馮海容，鄭 軼，常海茹，趙永會(huì)（.唐山市協(xié)和醫(yī)院藥劑科，河北唐山 063000；.唐山市豐潤(rùn)區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，河北唐山 063000）

紫葉李果實(shí)總黃酮對(duì)大鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究Δ

馮海容1＊，鄭 軼1，常海茹2，趙永會(huì)1（1.唐山市協(xié)和醫(yī)院藥劑科，河北唐山 063000；2.唐山市豐潤(rùn)區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，河北唐山 063000）

目的：研究紫葉李果實(shí)總黃酮（PCE）對(duì)酒精性肝損傷（ALD）大鼠的保護(hù)作用機(jī)制，為將其開發(fā)為治療ALD的新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：將40只大鼠隨機(jī)分為正常組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、水飛薊賓組[陽性對(duì)照，30 mg/（kg·d）]和PCE高、低劑量組[80、40 mg/（kg·d）]，每組8只。每天上午ig給藥（10 mL/kg）1次，持續(xù)6周；給藥同時(shí)，除正常組外其余各組大鼠每天下午ig 50%乙醇（10 mL/kg）1次誘導(dǎo)ALD模型。給藥結(jié)束后，測(cè)定大鼠心、肝、脾等臟器指數(shù)和皮下脂肪、棕色脂肪、腹腔脂肪指數(shù)；測(cè)定谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）以及總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）等血清生化指標(biāo)水平；測(cè)定肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）、TC、TG以及糞便中TC、TG等生化指標(biāo)水平；觀察大鼠肝、腎組織病理變化。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠肝、脾、腎指數(shù)和皮下脂肪、腹腔脂肪指數(shù)升高（P＜0.05或P＜0.01），腦指數(shù)和棕色脂肪指數(shù)降低（P＜0.05）；血清中HDL水平和HDL/TC比值降低，其余血清指標(biāo)均升高（P＜0.05或P＜0.01）；肝組織中SOD、GSH-Px水平降低，其余肝組織生化指標(biāo)均升高（P＜0.01）；糞便中TC、TG水平升高（P＜0.01）；肝、腎均發(fā)生明顯病變。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE高劑量組大鼠上述指標(biāo)均顯著改善（P＜0.05或P＜0.01）；PCE低劑量組大鼠血清中ALT、AST和肝組織中MDA水平顯著降低（P＜0.01），肝組織中SOD和GSH-Px水平顯著升高（P＜0.05）；各給藥組肝、腎病變程度及肝中脂質(zhì)聚積減輕。結(jié)論：PCE可能通過抗氧化、促進(jìn)肝細(xì)胞再生、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等方面發(fā)揮其改善ALD的作用。

紫葉李果實(shí)總黃酮；酒精性肝損傷；保護(hù)作用；機(jī)制；大鼠

近年來，隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，酒的生產(chǎn)和消耗量不斷增加，長(zhǎng)期大量飲酒可誘發(fā)廣泛肝細(xì)胞壞死[1]，即酒精性肝損傷（Alcoholic liver disease，ALD）。ALD若得不到及時(shí)的治療，通常可發(fā)展為酒精性肝炎、脂肪肝、肝纖維化、肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重危害人類的健康，目前在國(guó)際上已成為導(dǎo)致肝損害的第二大病因，日益引起社會(huì)及醫(yī)學(xué)界的高度重視[2-3]。中藥由于具有多靶點(diǎn)、多層次、多途徑的作用特點(diǎn)，并具有相對(duì)低毒的優(yōu)勢(shì)，極具開發(fā)價(jià)值，在ALD方面也發(fā)揮了越來越重要的作用，因此從中醫(yī)藥中發(fā)掘治療ALD的藥物已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[4-5]。

紫葉李（Prunus cerasifera ehrh Cv.atropurpurca）為薔薇科中藥，其果實(shí)具有保肝護(hù)肝、補(bǔ)中益氣、養(yǎng)陰生津、潤(rùn)腸通便等功效，其中含有的大量黃酮類化合物為其主要的有效成分[6]?？傸S酮類化合物廣泛地存在于植物中，具有良好的保肝護(hù)肝、利膽、抗氧化等多種生物活性及藥理作用[7-8]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)紫葉李果實(shí)總黃酮（Prunus cerasifera ehrh Cv.atropurpurca total flavone，PCE）抗ALD的研究仍屬于空白，因此筆者擬采用50%乙醇誘導(dǎo)大鼠發(fā)生ALD，研究PCE對(duì)ALD大鼠的肝功能、血膽紅素、血脂、血糖、血中谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、肝中脂質(zhì)的蓄積、糞便中的脂質(zhì)、肝的氧化應(yīng)激指標(biāo)等的影響，并對(duì)大鼠肝、腎病理變化進(jìn)行觀察，初步探討其對(duì)ALD大鼠的保護(hù)作用機(jī)制。

1 材料

1.1 儀器

HBS-1096B型酶標(biāo)儀（南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；AR64CN型通用電子天平（美國(guó)奧豪斯公司）；DP-280型全自動(dòng)生化分析儀（廣州東唐電子科技有限公司）；GS623型電子天平（日本新光株式會(huì)社）；TU-18101型通用儀器紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；TG-16G型高速冷凍離心機(jī)（常州市萬豐儀器制造有限公司）；Scientz-ⅡD型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（成都市生科儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 藥材、試劑盒與試劑

紫葉李果實(shí)于2016年8月自唐山市華北理工大學(xué)校園采摘，經(jīng)華北理工大學(xué)韓淑英教授鑒定為紫葉李（Prunus cerasifera ehrh Cv.atropurpurca）的果實(shí)，曬干后備用。

丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、總膽固醇（TC））、三酰甘油（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）試劑盒以及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；甲醛（分析純，天津市華東試劑廠，批號(hào)：20160426）；紅星二鍋頭酒（56℃，北京紅星股份有限公司，批號(hào)：20160619，實(shí)驗(yàn)時(shí)用純凈水配成50%的乙醇溶液）。

1.3 動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠40只，♂，體質(zhì)量160～200 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)于單格飼養(yǎng)籠中，室內(nèi)溫度為（25±2）℃、相對(duì)濕度為（45±5）%，自然光照，全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

2 方法

2.1 PCE的制備

將紫葉李果實(shí)去核，粉碎成粗粉，精密稱取干燥至恒質(zhì)量的果實(shí)粗粉，待用。于圓底燒瓶中加入500 mL飽和石灰水，煮沸2～3 min后，加入果實(shí)粗粉，然后加熱（微沸）回流提取2次，首次用時(shí)2 h，第2次1.5 h，趁熱用脫脂棉過濾。將所得濾液放置稍冷（60～70℃），用濃HCl調(diào)濾液pH至4～5，放置過夜使沉淀完全，抽濾，得淡黃色PCE粗品。將PCE粗品置于燒杯中，按PCE粗品-水比例為1 g∶200 mL加入蒸餾水，于石棉網(wǎng)上加熱溶解，趁熱過濾，濾液靜置1 h，即析出精制PCE。最終總黃酮得率為86%。將所得精制PCE溶解至所需濃度，于4℃冰箱保存，備用。

2.2 PCE抗ALD的作用考察

2.2.1 動(dòng)物分組、給藥與造模 將40只大鼠隨機(jī)分為5組，即正常組、模型組、水飛薊賓組[陽性對(duì)照，30 mg/（kg·d）]和PCE高、低劑量組[80、40 mg/（kg·d）][6，8]，每組8只。各給藥組大鼠每天上午ig給藥1次，給藥體積為10 mL/kg，連續(xù)6周；正常組和模型組大鼠ig等體積蒸餾水。在給藥同時(shí)，模型組和各給藥組大鼠每天下午均ig 1次50%乙醇（10 mL/kg）復(fù)制ALD模型，持續(xù)6周，記錄大鼠體質(zhì)量、攝食量、飲水量的變化。

2.2.2 指標(biāo)檢測(cè) 大鼠處死前禁食12 h，股動(dòng)脈取血，常規(guī)分離血清，按照試劑盒說明書操作檢測(cè)血清中ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、GGT、TC、TG、HDL、LDL水平，并計(jì)算AST/ALT、HDL/TC比值；將大鼠處死后取心、肝、脾、肺、腎、大腦等臟器組織以及皮下脂肪、棕色脂肪、腹腔脂肪等脂肪組織，計(jì)算臟器（脂肪）指數(shù)[臟器（脂肪）指數(shù)（g/100 g）＝臟器（脂肪）的質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）×100]，并用肉眼觀察大鼠肝的外形、體積、顏色、質(zhì)地的改變；將部分肝組織于10%甲醛溶液中固定，對(duì)其蘇木精-伊紅（HE）染色病理切片和油紅O染色病理切片以及其腎組織的HE病理切片進(jìn)行觀察；將肝組織勻漿后，按照試劑盒說明書操作檢測(cè)肝組織中SOD、MDA、 GSH-Px水平；按照試劑盒說明書操作檢測(cè)糞便中TC、TG水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0、Origin 8.6統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以s表示，組間比較采用單因素方差分析，后以LSD法進(jìn)行組間兩兩比較。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 PCE對(duì)ALD大鼠體質(zhì)量、攝食量、飲水量的影響

在給予乙醇造模及PCE治療前，各組大鼠的體質(zhì)量、攝食量和飲水量均無明顯差異（P＞0.05）。在實(shí)驗(yàn)期間，與正常組比較，模型組大鼠的體質(zhì)量、攝食量明顯減少（P＜0.05或P＜0.05），飲水量明顯增加（P＜0.05）；與模型組比較，PCE各劑量組大鼠體質(zhì)量、攝食量均明顯增加（P＜0.05），飲水量明顯減少（P＜0.05），且PCE高劑量組的變化較低劑量組明顯，結(jié)果見圖1。

圖1 各組大鼠體質(zhì)量、攝食量、飲水量測(cè)定結(jié)果Fig 1 Determination results of body weight，food intake and water intake of rats in each group

3.2 PCE對(duì)ALD大鼠臟器和脂肪指數(shù)的影響

乙醇造模6周后，與正常組比較，模型組大鼠肝、脾、腎指數(shù)以及腹腔脂肪指數(shù)均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；腦指數(shù)和棕色脂肪指數(shù)均明顯降低（P＜0.05）。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE高劑量組大鼠的肝、脾、腎以及皮下脂肪、腹腔脂肪指數(shù)均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），腦指數(shù)和棕色脂肪指數(shù)明顯升高（P＜0.05），且PCE高劑量組的變化較低劑量組明顯（P＜0.05），結(jié)果見表1。

3.3 PCE對(duì)ALD大鼠血清中ALT、AST、GGT水平以及AST/ALT比值的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清中ALT、AST、GGT水平以及AST/ALT比值均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中ALT、AST水平以及水飛薊賓組、PCE高劑量組大鼠血清中GGT水平和AST/ALT比值均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；且PCE高劑量組的變化較低劑量組明顯，其中ALT、AST、GGT水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見表2。

表1 各組大鼠臟器指數(shù)和脂肪指數(shù)測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 1 Determination results of organ indexes and fat indexes of rats in each group（s，n＝8）

表1 各組大鼠臟器指數(shù)和脂肪指數(shù)測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 1 Determination results of organ indexes and fat indexes of rats in each group（s，n＝8）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與PCE高劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.PCE high-dose group，ΔP＜0.05

PCE低劑量組389.9±20.37Δ2.849±0.716Δ0.197±0.029Δ0.342±0.017 0.362±0.035Δ0.283±0.037 0.695±0.173 0.983±0.258Δ1.062±0.194Δ0.271±0.263Δ指標(biāo)大鼠體質(zhì)量，g肝，g/100 g脾，g/100 g肺，g/100 g腦，g/100 g心，g/100 g腎，g/100 g皮下脂肪，g/100 g腹腔脂肪，g/100 g棕色脂肪，g/100 g正常組430.8±19.20 1.957±0.203 0.119±0.046 0.342±0.018 0.413±0.051 0.262±0.021 0.522±0.097 0.756±0.113 0.892±0.590 0.321±0.162模型組356.9±11.60＊＊3.534±0.193＊＊0.210±0.061＊＊0.357±0.093 0.359±0.037＊0.289±0.065 0.867±0.137＊1.067±0.620＊1.193±0.513＊0.227±0.197＊水飛薊賓組410.2±12.50##2.073±0.407##0.124±0.019##0.331±0.026 0.410±0.068#0.277±0.024 0.607±0.164#0.801±0.302#0.945±0.376#0.313±0.124#PCE高劑量組419.7±19.21##1.982±0.320##0.121±0.024##0.337±0.063 0.409±0.059#0.261±0.032 0.592±0.240#0.790±0.135#0.916±0.175#0.319±0.297#

表2 各組大鼠血清中ALT、AST、GGT水平以及AST/ ALT比值測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 2 Determination results of ALT，AST，GGT levels in serum and AST/ALT ratio of rats in each group（s，n＝8）

表2 各組大鼠血清中ALT、AST、GGT水平以及AST/ ALT比值測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 2 Determination results of ALT，AST，GGT levels in serum and AST/ALT ratio of rats in each group（s，n＝8）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與PCE高劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.PCE high-dose group，ΔP＜0.05

AST/ALT 1.56±0.15 2.06±0.93＊1.61±0.17#1.59±0.35#1.87±0.12組別正常組模型組水飛薊賓組PCE高劑量組PCE低劑量組劑量，mg/（kg·d）30 80 40 ALT，U/L 45.21±10.05 98.39±16.42＊＊56.02±14.25##52.91±11.30##80.53±20.15#ΔAST，U/L 70.66±9.38 202.75±19.32＊＊90.29±12.41##83.98±13.05##150.67±19.62##ΔGGT，U/L 1.96±0.57 4.19±1.07＊＊2.13±0.94##2.06±0.62##3.27±1.15Δ

3.4 PCE對(duì)ALD大鼠血清中TBIL、DBIL、IBIL水平的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清中TBIL、DBIL、IBIL水平明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE高劑量組大鼠血清中TBIL、DBIL、IBIL水平明顯降低（P＜0.01）；且PCE高劑量組的變化較低劑量組明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見表3。

3.5 PCE對(duì)ALD大鼠血清中TC、TG、HDL、LDL水平以及HDL/TC比值的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清中TC、TG、LDL水平均明顯升高（P＜0.01），HDL水平以及HDL/TC比值明顯降低（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE高劑量組大鼠血清中上述指標(biāo)均明顯改善（P＜0.05或P＜0.01）；且PCE高劑量組變化較低劑量組明顯，其中TC、HDL水平和HDL/TC比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見表4。

表3 各組大鼠血清中TBIL、DBIL、IBIL水平測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 3 Determination results of TBIL，DBIL，IBIL levels in serum of rats in each group（s，n＝8）

表3 各組大鼠血清中TBIL、DBIL、IBIL水平測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 3 Determination results of TBIL，DBIL，IBIL levels in serum of rats in each group（s，n＝8）

注：與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與PCE高劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，##P＜0.01；vs.PCE high-dose group，ΔP＜0.05

IBIL，μmol/L 0.46±0.13 0.73±0.29＊＊0.49±0.12##0.48±0.24##0.61±1.82Δ組別正常組模型組水飛薊賓組PCE高劑量組PCE低劑量組劑量，mg/（kg·d）30 80 40 TBIL，μmol/L 1.72±0.32 2.65±1.04＊＊1.80±0.95##1.78±0.27##2.29±1.07ΔDBIL，μmol/L 1.26±0.24 1.92±0.91＊1.31±0.19##1.30±0.56##1.68±0.20Δ

表4 各組大鼠血清中TC、TG、HDL、LDL水平以及HDL/TC比值測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 4 Determination results of TC，TG，HDL，LDL levels in serum and HDL/TC ratio of rats in each group（s，n＝8）

表4 各組大鼠血清中TC、TG、HDL、LDL水平以及HDL/TC比值測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 4 Determination results of TC，TG，HDL，LDL levels in serum and HDL/TC ratio of rats in each group（s，n＝8）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與PCE高劑量組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.PCE high-dose group，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

HDL/TC 0.92±0.056 0.31±0.027＊＊0.57±0.062#0.68±0.016##0.32±0.025ΔΔ組別正常組模型組水飛薊賓組PCE高劑量組PCE低劑量組劑量，mg/（kg·d）30 80 40 TC，mmol/L 1.83±0.083 3.18±0.094＊＊2.21±0.090#2.19±0.031#2.92±0.097ΔTG，mmol/L 0.26±0.037 0.66±0.031＊＊0.33±0.016##0.47±0.032#0.58±0.017 HDL，mmol/L 1.69±0.076 0.97±0.033＊＊1.26±0.061#1.49±0.023##0.92±0.029ΔLDL，mmol/L 0.31±0.065 0.72±0.015＊＊0.42±0.053##0.53±0.037#0.65±0.029

3.6 PCE對(duì)ALD大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH-Px水平的影響

與正常組比較，模型組大鼠肝組織中SOD、GSH-Px水平明顯降低（P＜0.01），MDA水平明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE各劑量組大鼠肝組織中SOD、GSH-Px水平明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），MDA水平明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；且PCE高劑量組變化較低劑量組明顯（P＜0.05），結(jié)果見表5。

3.7 PCE對(duì)ALD大鼠肝組織和糞便中TC、TG水平的影響

與正常組比較，模型組大鼠肝組織和糞便中TC、TG水平均明顯增加（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE高劑量組大鼠肝組織中TC、TG水平明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），而糞便中TC、TG水平明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；且PCE高劑量組變化較低劑量組明顯，其中肝組織中TC、TG水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見表6。

表5 各組大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH-Px水平測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 5 Determination results of SOD，MDA，GSHPx levels in liver tissue of rats in each group（s，n＝8）

表5 各組大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH-Px水平測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 5 Determination results of SOD，MDA，GSHPx levels in liver tissue of rats in each group（s，n＝8）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與PCE高劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.PCE high-dose group，ΔP＜0.05

GSH-Px，μg/g 189.32±12.73 97.19±9.05＊＊176.29±11.09##182.24±6.85##125.95±10.61#Δ組別正常組模型組水飛薊賓組PCE高劑量組PCE低劑量組劑量，mg/（kg·d）30 80 40 SOD，U/g 173.60±10.24 76.56±6.49＊＊155.89±9.37##161.07±12.10##105.29±8.94#ΔMDA，nmol/g 20.95±7.61 65.83±9.07＊＊29.42±2.57##25.03±8.11##43.89±7.62#Δ

表6 各組大鼠肝組織和糞便中TC、TG水平測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 6 Determination results of TC，TG levels in fecesand liver tissue of rats in each group（s，n＝8）

表6 各組大鼠肝組織和糞便中TC、TG水平測(cè)定結(jié)果（s，n＝8）Tab 6 Determination results of TC，TG levels in fecesand liver tissue of rats in each group（s，n＝8）

注：與正常組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與PCE高劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.PCE high-dose group，ΔP＜0.05

糞便0.59±0.037 0.93±0.420＊＊1.20±0.340#1.29±0.160#0.87±0.096組別正常組模型組水飛薊賓組PCE高劑量組PCE低劑量組劑量，mg/（kg·d）30 80 40 TC，mmol/L肝組織0.98±0.64 1.93±0.15＊＊1.12±0.67##1.15±0.58##1.67±0.36Δ糞便0.86±0.42 1.28±0.52＊＊1.51±0.64##1.53±0.39#1.15±0.68 TG，mmol/L肝組織0.22±0.017 0.47±0.012＊＊0.29±0.093##0.27±0.076##0.41±0.065Δ

3.8 PCE對(duì)ALD大鼠肝、腎組織病理學(xué)變化的影響

3.8.1 對(duì)肝組織病理學(xué)的影響 正常組大鼠肝為鮮紅色、無腫脹，具有良好的光澤，柔軟富有彈性；病理切片觀察可見明顯脂肪顆粒和空泡，但未見脂肪顆粒聚集，無炎癥細(xì)胞存在。與正常組比較，模型組大鼠肝顏色暗淡，呈暗紅色，表面有眾多顆粒聚集，光澤度較差，邊緣增厚，體積較大；HE染色可見肝竇輪廓較為模糊、細(xì)胞較為腫脹，同時(shí)肝細(xì)胞內(nèi)具有明顯脂肪顆粒；油紅O染色亦可見脂肪顆粒聚積，并有少量空泡存在，細(xì)胞核因被脂肪顆粒擠壓而導(dǎo)致移位，可見少量單核炎癥細(xì)胞存在。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE各劑量組大鼠肝體積相對(duì)較小，呈鮮紅色，具有良好的光澤，邊緣較薄；HE染色可見肝細(xì)胞形態(tài)較為規(guī)則，肝竇清晰，可見少部分肝細(xì)胞有脂肪變性；油紅O染色可見非常少量的脂肪顆粒聚積，未見單核炎癥細(xì)胞，細(xì)胞無腫脹，且PCE高劑量組肝狀態(tài)優(yōu)于低劑量組，結(jié)果見圖2。

圖2 各組大鼠肝組織病理學(xué)觀察結(jié)果（×40）Fig 2 Results of pathological observation of liver tissues of rats in each group（×40）

3.8.2 對(duì)腎組織病理學(xué)的影響 正常組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完好、輪廓清晰。與正常組比較，模型組大鼠腎小球有萎縮的跡象，輪廓稍微呈模糊不清。與模型組比較，水飛薊賓組和PCE各劑量組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)大部分完好，偶爾有少量的萎縮跡象，輪廓較為清晰，且PCE高劑量組和低劑量組腎狀態(tài)相似，結(jié)果見圖3。

圖3 各組大鼠腎組織病理學(xué)觀察結(jié)果（油紅O染色，×40）Fig 3 Results of pathological observation of liver，kidney tissues of rats in each group（oil red O staining，×40）

4 討論

ALD的早期防治在臨床上具有十分重要的意義[9]。水飛薊賓作為保肝藥在臨床上被廣泛應(yīng)用，其作用機(jī)制為促進(jìn)肝細(xì)胞再生、清除自由基、抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體脂質(zhì)代謝等[10]，可從多層次、多途徑防治ALD，因此本研究以其為陽性對(duì)照藥。

轉(zhuǎn)氨酶升高是肝細(xì)胞損害的敏感標(biāo)志[11]。通常，ALT、AST大量存在于肝細(xì)胞中，當(dāng)酒精進(jìn)入體內(nèi)對(duì)肝細(xì)胞造成損害時(shí)，細(xì)胞質(zhì)中ALT、AST會(huì)被大量排放到血液中，導(dǎo)致血清中轉(zhuǎn)氨酶升高，進(jìn)而繼續(xù)引起臟器不適。過量飲酒還會(huì)使體內(nèi)氧自由基增加，肝損傷加重，血脂、血糖含量升高。本研究表明，PCE能顯著抑制血清中ALT、AST水平的升高，提示PCE具有抑制肝細(xì)胞損傷的作用。

SOD催化氧自由基的歧化反應(yīng)，是機(jī)體內(nèi)清除氧自由基的重要酶之一。肝細(xì)胞損傷或脂質(zhì)聚積時(shí)還會(huì)產(chǎn)生大量的過氧化物，MDA為過氧化物的最終產(chǎn)物，可嚴(yán)重破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。長(zhǎng)期大量的飲酒，乙醇能激活氧分子，導(dǎo)致體內(nèi)自由基的代謝受到嚴(yán)重的影響，自由基在體內(nèi)大量的堆積，進(jìn)而使肝細(xì)胞中的SOD和GSH大量減少，并使SOD和GSH的活力降低，對(duì)身體造成嚴(yán)重的傷害[12]。GSH對(duì)由活性氧和羥自由基誘發(fā)的脂氫過氧化物也有很強(qiáng)的清除能力，可起到延緩細(xì)胞衰老的作用。本研究表明，PCE能明顯降低ALD大鼠肝組織中的MDA水平，并能增加SOD、GSH-Px的活性，提示其能提高肝組織的抗氧化酶（SOD）活性、抑制自由基的產(chǎn)生并促進(jìn)其清除，抑制氧自由基引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使MDA生成減少，從而對(duì)肝組織起到保護(hù)作用。

此外，長(zhǎng)期大量的飲酒還可使脂肪酸氧化減弱，進(jìn)而使脂肪在血液和肝細(xì)胞內(nèi)沉積，即TG、TC、LDL在體內(nèi)大量地聚積，而體內(nèi)HDL則大量地減少。本研究表明，PCE能顯著升高血清中HDL和HDL/TC比值水平，以及降低TC、TG在肝細(xì)胞內(nèi)的聚積；可促進(jìn)體內(nèi)TC、TG的排泄，即增加了糞便中TC、TG的含量。病理組織形態(tài)學(xué)檢查亦表明PCE能明顯減輕大鼠ALD的病變程度，并減少肝中脂質(zhì)的聚積。膽紅素在肝內(nèi)進(jìn)行代謝，是臨床上判定黃疸的重要依據(jù)，也是肝功能檢測(cè)的重要指標(biāo)之一[13]。本研究表明，PCE能顯著對(duì)抗ALD大鼠血清中TBIL、DBIL、IBIL水平的升高，提示PCE能改善酒精對(duì)機(jī)體肝功的影響并使黃疸異?；謴?fù)正常。

綜上所述，PCE具有良好的改善ALD的作用，可改善肝的病理變化，降低血清中ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、TC、TG、LDL、GGT水平以及肝組織中TC、TG、MDA水平；可升高血清中HDL水平、HDL/TC比值以及肝組織中SOD、GSH-Px水平，增加糞便中TC、TG含量。PCE改善ALD，主要是通過促進(jìn)肝細(xì)胞再生、清除體內(nèi)氧化自由基、調(diào)節(jié)機(jī)體脂質(zhì)代謝等方面發(fā)揮作用，但其更多作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。

[1] 梁惠，呂銳，傅泳，等.益生菌對(duì)大鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2016，32（7）：991-997.

[2] O’Shea RS，Dasarathy S，McCullough AJ，et al.Alcoholic liver disease[J].Hepatology，2010，51（1）：307-328.

[3] 肖鳳霞，張旭倩，鄧少東，等.毛橘紅總黃酮對(duì)酒精性肝損傷大鼠肝組織病理的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2012，23（6）：615-619.

[4] 薛承斌，晏瓊，韓定獻(xiàn).貞茯菌膠囊對(duì)酒精性肝損傷模型小鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥房，2014，25（43）：4043-4045.

[5] Lee KW，Bode AM，Dong Z.Molecular targets of phytochemicals for cancer prevention[J].Nat Rev Cancer，2011，11（3）：211-218.

[6] 汪洪濤，陳成，余芳，等.紫葉李果實(shí)總多酚的提取工藝及其抗氧化活性研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，42（10）：153-156.

[7] 王洪武，李守超，賀海波，等.竹節(jié)參提取物對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2012，17（9）：961-966.

[8] 徐博，吳畏難，李傳甲，等.萱草花總黃酮對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制探討[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（23）：104-108.

[9] Sancho-Bru P，Altamirano J，Rodrigo-Torres D，et al. Liver progenitor cell markers correlate with liver damage and predict short-term mortality in patients with alcoholic hepatitis[J].Hepatology，2012，55（6）：1931-1941.

[10] 王紅軍，姜媛媛，路平，等.水飛薊賓的抗腫瘤、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)分子藥理學(xué)機(jī)制研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（4）：413-421.

[11] 吳誠(chéng)，呂著海，沈存思，等.養(yǎng)元飲對(duì)酒精性肝損傷大鼠解酒和保肝作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（14）：150-153.

[12] 李海燕，李夏，金向群，等.黃芩苷對(duì)大鼠慢性酒精性肝損傷的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008，14（6）：58-60.

[13] 林佳媛，馬國(guó).膽紅素代謝及其調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，41（3）：405-411.

Study on the Protective Effect Mechanism of Total Flavones from Prunus cerasifera Fruits for Alcoholic Liver Disease in Rats

FENG Hairong1，ZHENG Yi1，CHANG Hairu2，ZHAO Yonghui1（1.Dept.of Pharmacy，Tangshan Union Hospital，Hebei Tangshan 063000，China；2.Dept.of Pharmacy，People’s Hospital of Tangshan Fengrun District，Hebei Tangshan 063000，China）

OBJECTIVE：To study the protective effects of total flavone from Prunus cerasifera fruits（PCE）on alcoholic liver disease（ALD）in rats，and provide experimental basis for developing new medicines for anti-ALD.METHODS：40 rats were randomly divided into normal group（distilled water），model group（distilled water），silibinin group[positive control，30 mg/（kg·d）] and PCE high-dose，low-dose groups[80，40 mg/（kg·d）]，8 in each group.All rats were intragastrically administrated（10 mL/kg）every morning，once，for 6 weeks；meanwhile，except for normal group，rats in other groups received 50%alcohol（10 mL/kg）once intragastrically every afternoon to induce ALD model.After administration，heart，liver，spleen and other organ indexes，subcutaneous fat，brown fat，abdominal fat indexes were determined，as well as serum biochemical indexes[glutamate transaminase（ALT），aspartate aminotransferase（AST），total bilirubin（TBIL），direct bilirubin（DBIL），indirect bilirubin（IBIL），gamma-glutamyl transpeptidase（GGT），and total cholesterol（TC），triglyceride（TG），high-density lipoprotein（HDL），low-density lipoprotein（LDL）]level and liver biochemical indexes[superoxide dismutase（SOD），malondialdehyde（MDA），glutathione peroxidase（GSH-Px），TC，TG]and TC，TG levels in feces；pathological changes of liver and kidney tissues were observed.RESULTS：Compared with normal group，heart，liver，spleen indexes，subcutaneous fat，abdominal fat indexes in model group were increased（P＜0.05 or P＜0.01），brain index and brown fat index were decreased（P＜0.05）；HDL level and HDL/TC ratio in serum were decreased，other serum indexes were increased（P＜0.05 or P＜0.01）；SOD，GSH-Px levels in liver tissue were decreased，other above-mentioned liver biochemical indexes were increased（P＜0.01）；TC，TG levels in feces were increased（P＜0.01）；liver and kidney showed obvious lesions.Compared with model group，the above-mentioned indexes in silibinin group and PCE highdose group were significantly improved（P＜0.05 or P＜0.01）；ALT，AST in serum and MDA level in liver tissue in PCE lowdose group were significantly decreased（P＜0.01），and SOD，GSH-Px levels in liver tissue were significantly increased（P＜0.05）；lesion degree of liver and kidney and lipid accumulation in liver were reduced in administration groups.CONCLUSIONS：PCE may play a role in anti-ALD by anti-oxidation，promoting liver cell regeneration and regulating lipid metabolism.

Total flavone from Prunus cerasifera fruits；Alcoholic liver disease；Protective effect；Mechanism；Rats

R285.5

A

1001-0408（2017）10-1332-06

2016-11-22

2017-02-11）

（編輯：林 靜）

河北省科技局科研項(xiàng)目（No.152496-5-3）

＊主管藥師。研究方向：藥理作用機(jī)制。電話：0315-3406194。E-mail：1092811283@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.10.10