李 偉 吳秀清 袁文洪 高宇明*. 四川省威遠(yuǎn)縣人民醫(yī)院，四川 威遠(yuǎn) 64450；. 四川省資陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川 資陽 64300

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UHPLC法測定蒙藥扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量

李 偉1吳秀清2袁文洪2高宇明2*
1. 四川省威遠(yuǎn)縣人民醫(yī)院，四川 威遠(yuǎn) 642450；2. 四川省資陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川 資陽 641300

目的：建立超高效液相色譜(UHPLC)法同時(shí)測定扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的方法。方法：取本品研細(xì)過篩后用甲醇超聲提取，采用色譜柱ThermoSyncromis C18(100mm×3mm,1.7μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(85∶15)；檢測波長225nm；進(jìn)樣體積1μL；柱溫室溫。結(jié)果：木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別在17.860～142.877μg(r=0.9991)、15.553～124.426μg(r=0.9995)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率(n=6)分別為101.04%、101.29%，RSD分別為2.01%、1.85%。結(jié)論：該方法簡便快捷，重復(fù)性好，可用于扎沖十三味丸的質(zhì)量控制。

扎沖十三味丸；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；UHPLC

扎沖十三味丸為傳統(tǒng)蒙藥，主要由訶子、木香、石菖蒲、制草烏等13味藥物組成，具有祛風(fēng)通竅、舒筋活血、鎮(zhèn)靜安神的功效，臨床用于半身不遂、左癱右瘓、口眼歪斜、四肢麻木、腰腿不利、言語不清、筋骨疼痛、神經(jīng)麻痹、風(fēng)濕、關(guān)節(jié)疼痛等。原標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)[1]，規(guī)定了顯微鑒別、化學(xué)鑒別、薄層鑒別。木香為扎沖十三味丸主要組成之一，其主要活性成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯，具有較強(qiáng)的抗炎、抗腫瘤和抗?jié)冏饔肹2]，且2015年版《中國藥典》中收載有木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定項(xiàng)目[3]。本研究建立了UHPLC測定木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的方法，比原標(biāo)準(zhǔn)更快速更簡潔，保證了藥品的質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器 THERMO Ultimate 3000 UHPLC(含VWD檢測器)，ThermoSyncromis C18(100mm×3mm，1.7μm)色譜柱，Mettler Toledo MS205DU 電子天平，KQ-100E型超聲波清洗器。

1.2 材料 木香烴內(nèi)酯(批號(hào)：111524-201509，純度99.0%)、去氫木香內(nèi)酯(批號(hào)：111525-201510，純度99.7%)對(duì)照品購自中國食品藥品檢定研究院，扎沖十三味丸(內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠，批號(hào)分別為14028087、160321202、160231043)。甲醇(色譜純，F(xiàn)isher公司)，水為注射用水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo Syncromis C18(100mm×3mm，1.7μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(85:15)；流速：0.2mL/min；檢測波長：225nm；柱溫室溫；進(jìn)樣量1μL。在該條件下，木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯分離度大于1.5(見圖1)。

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 分別稱取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品18.04mg、15.60mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.3 供試品溶液的制備 將本品磨碎，過三號(hào)篩，精密稱取1.0g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲(100W，40HZ)20min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用0.22μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60mL置20mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，得到8個(gè)濃度梯度的混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)(見表1)。結(jié)果表明，2種成分在各自的濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

表1 木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液1μL，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.3%和0.5%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)：140238 087)，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯峰面積的RSD分別為1.3%和1.1%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批藥品(批號(hào)：140238 087)，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣1μL，記錄峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的平均含量為0.594、0.591mg/g，RSD分別為1.9%和1.6%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取0.5g已知木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯含量的樣品6份(批號(hào)：140238 087)，分別精密加入相當(dāng)于樣品中兩種成分含有量80%、100%、120%的混合對(duì)照品溶液適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測定 取扎沖十三味丸，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算樣品中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量，見表3。

表3 樣品中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量測定結(jié)果

3 討論

本研究在選擇色譜條件時(shí)，參考了《中國藥典》(2015年版)一部“木香”項(xiàng)下的含量測定方法?？疾炝瞬煌纳V柱和流動(dòng)相比例，最終結(jié)果以Thermo Syncromis C18(100mm×3mm，1.7μm)色譜柱，流動(dòng)相比例為甲醇∶水(85∶15)，流速0.2mL/min時(shí)分離效果好，分析時(shí)間短。韓國珍等[2]用HPLC方法測定扎沖十三味丸中的木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量，本研究采用的UHPLC方法分離效率更高，通過對(duì)色譜條件的優(yōu)化，大大縮短了分析時(shí)間，使得可以在10min以內(nèi)完成對(duì)扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量測定。該方法分析時(shí)間短、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可適用于扎沖十三味丸的質(zhì)量控制。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1988：70.

[2]魏華，彭勇，馬國需，等.木香有效成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2012，43(3)：613-620.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[4]韓國珍，溫愛平.高效液相色譜法測定扎沖十三味丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量[J].中國藥物與臨床，2007，7(10)：796-797.

李偉(1964-)，男，碩士，主管中藥師，主治中醫(yī)師，研究方向?yàn)樗巹┕芾怼?/p>

高宇明(1986-)，女，碩士，研究方向?yàn)槭称匪幤贩治鰴z驗(yàn)。E-mail：174479333@qq.com

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2017-02-09 編輯：程鵬飛)