侯利華

軍事醫(yī)學科學院 生物工程研究所，北京 100071

綜述

埃博拉疫苗臨床研究進展

侯利華

軍事醫(yī)學科學院 生物工程研究所，北京 100071

2014年西非埃博拉疫情暴發(fā)后，多個埃博拉疫苗臨床試驗陸續(xù)開展。開展臨床試驗的埃博拉疫苗主要是病毒載體類疫苗，例如人腺病毒載體（Ad5和Ad26）、3型黑猩猩腺病毒載體（ChAd3）、水泡性口炎病毒載體（VSV）、痘病毒載體（MVA）。從免疫策略上來說，包括單次免疫與初免-加強兩種免疫策略。基于Ad5、Ad26、ChAd3和MVA載體的埃博拉疫苗在Ⅰ、Ⅱ期臨床試驗中顯示了良好的免疫原性，基于VSV載體的疫苗更是在Ⅲ期臨床試驗中顯示了很好的保護性。

埃博拉疫苗；臨床試驗；病毒載體疫苗；免疫原性

在2014年西非埃博拉疫情暴發(fā)之前，世界范圍內共開展了3項埃博拉疫苗研究。2014年西非埃博拉疫情暴發(fā)后，20余個埃博拉疫苗臨床試驗陸續(xù)開展。目前開展臨床試驗的埃博拉疫苗主要是病毒載體類疫苗，例如人腺病毒載體（Ad5和 Ad26）、3型黑猩猩腺病毒載體（chAd3）、水泡性口炎病毒載體（VSV）、痘病毒載體（MVA），以及DNA疫苗和VLP疫苗。從免疫策略上來說，包括單次免疫與初免-加強兩種免疫策略。截至2016年12月，國際上尚無埃博拉疫苗獲得批準上市，但有數(shù)個疫苗進入臨床研究階段（表1）。

表1 截至2016年9月已開展（或登記）的埃博拉疫苗臨床試驗進展

1 DNA疫苗

1.1 分別表達 Ebola GP（Zaire）、Ebola GP（S/ G）、NP（Zaire）

該疫苗由美國國家過敏癥和傳染病研究所（NIAID）研制，臨床試驗在2003～2005年開展[1]，是最早開展的埃博拉疫苗臨床試驗，為隨機、雙盲、安慰劑對照的Ⅰ期臨床試驗，研究結果表明埃博拉的DNA疫苗是安全且有免疫原性的。編碼Ebola GP（Zaire）、GP（Sudan/Gulu）和NP蛋白的3個質粒，同時進行肌肉注射，分為2、4、8 mg組和安慰劑組，共計27人。疫苗安全性好，無嚴重不良反應。在20名疫苗組試驗者中，至少有一種抗原成分能被ELISA或細胞免疫反應檢測到。6名受試者檢測到CD8+的特異性T細胞反應。

1.2 分別表達Ebola GP（Zaire）、GP（Sudan）、MARV GP（Angola）

2009～2010年美國國防部和美國NIH資助在烏干達開展了一項DNA疫苗的隨機、雙盲、安慰劑對照的臨床Ⅰb期試驗[5]，該試驗分為3組，即分別表達Ebola Zaire GP組（EBO組）、Mar?burg GP組（MARV組）和同時注射的二聯(lián)疫苗組，分別在0、4、8周免疫，使用Biojector 2000無針注射系統(tǒng)進行肌肉注射。研究結果表明，該注射方式和疫苗耐受性好，無嚴重的局部與全身不良反應。EBO疫苗組中17/30產生了EBO特異性抗體反應，二聯(lián)疫苗組中有14/30產生了EBO特異性抗體反應，MARV疫苗組9/29產生了特異性抗體反應，二聯(lián)疫苗組中有7/30產生了MARV特異性抗體反應。EBO疫苗組中19/30產生了EBO特異性T細胞反應，二聯(lián)疫苗組中有10/30產生了EBO特異性T細胞反應，MARV疫苗組15/29產生了特異性T細胞反應，二聯(lián)疫苗組中有13/30產生了MARV特異性T細胞反應。

從以上結果可以看出，埃博拉的DNA疫苗免疫程序復雜，免疫原性弱，不適合緊急公共衛(wèi)生事件中使用。

2 病毒載體類疫苗

2.1 黑猩猩腺病毒載體-埃博拉疫苗（ChAd3-ZEBOV vaccine）

該疫苗以黑猩猩3型腺病毒（ChAd3）為載體，表達Zaire型EBOV GP蛋白，疫苗類型為復制缺陷型重組腺病毒，在人體內不能持續(xù)復制。疫苗由美國NIAID研制，商業(yè)開發(fā)權授予英國制藥企業(yè)葛蘭素史克公司（GSK）合作，目前在clincaltrial.gov登記注冊的臨床試驗已有10個左右。在非洲國家利比里亞開展了Ⅲ期臨床試驗。

2.1.1 Ⅰ期臨床試驗-1 2014年11月27日，在《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)表了ChAd3-EBOI期臨床試驗的初步結果[5]。該研究對ChAd3-EBO進行了第一階段劑量遞增的開放性試驗，為雙價疫苗，疫苗含有1∶1的分別表達Ebola Zaire和Ebola Sudan型GP的病毒載體。將20個健康成年人編成2組，10人/組，以肌肉注射方式進行接種，劑量為2×1010或2×1011VP，觀察期為免疫后4周。在本項研究中沒有發(fā)現(xiàn)安全性問題，但是有2名接種劑量為2×1011VP的受試者在免疫后1天內出現(xiàn)了短暫發(fā)熱癥狀。20個受試者體內均產生了包膜糖蛋白特異的抗體，接種2× 1011VP的組別要比接種2×1010VP的組別擁有更高的抗體效價（針對Zaire的抗體的幾何平均效價比為2037∶331；P=0.001)，同時接種2×1011VP的組別也擁有更高比例的糖蛋白特異的T細胞反應。其中，2×1011VP的組別中10個人均有CD4反應，而2×1010VP組別中僅有3個人有CD4反應（P=0.004）；檢測了CD8反應，2×1011VP組別中有7人有反應，而2×1010VP組別中只有2人有反應（P=0.07）。

由于該疫苗的埃博拉病毒包膜糖蛋白基因序列為Zaire-Mayinga（1976）型，考慮到2014年暴發(fā)的 Zaire-Guinea（2014）型糖蛋白序列與Zaire-Mayinga（1976）型同源性為97.6%，以Zaire-Guinea（2014）型糖蛋白為抗原，檢測到的抗體幾何平均滴度在2周和4周時分別為177和623，而以Zaire-Mayinga（1976）型糖蛋白為抗原檢測到的抗體幾何平均滴度在2周和4周時分別為376和2037，說明2種抗原之間的抗原性存在著差異，也就暗示著采用Zaire-Guinea（2014）型糖蛋白作為2014年疫情的抗原可能會具有更好的保護性。

該文章認為ChAd3-EBO疫苗的不良反應和免疫反應取決于劑量。當劑量為2×1011VP時，Zaire型包膜糖蛋白特異的抗體反應處于與已報道的非人靈長類試驗中疫苗誘導的保護性免疫范圍內。

2.1.2 Ⅰ期臨床試驗-2 2015年1月28日在《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)表了另外一篇ChAd3-EBOⅠ期臨床試驗的初步結果[6]。本實驗中評價了單價ChAd3-EBO Z（Zaire）的免疫原性和安全性，試驗地點在英國，共招募60名受試者，平均分入3個劑量組，分別是1×1010、2.5×1010、5× 1010VP。安全性觀察截至免疫后4周，研究結果表明3個劑量組均未發(fā)現(xiàn)安全性問題。2/59受試者發(fā)燒，4名受試者在免疫后2周發(fā)生了延長的活化部分凝血活酶時間（3例在中劑量組，1例在高劑量組）。8名受試者出現(xiàn)了暫時的高膽紅素血癥（6例在中劑量組，2例在高劑量組）。免疫4周后，高劑量組的ELISA抗體的幾何平均值最高（469，68%陽轉率）。采用與上一個臨床試驗同樣的檢測方法，3個劑量組的抗體EC90值分別為235、402和469。在利用滅活病毒（2014 Guinea基因型）作為包被抗原檢測時，6/35（17%）有陽性反應，低劑量組2/10，中劑量組1/12，高劑量組3/13。ELISPOT方法檢測的T細胞反應陽性率為100%，14天時到達峰值（中位數(shù)為693 SFC/106細胞）。流式細胞術檢測到了CD4+和CD8+的T細胞免疫反應。在測試的所有劑量中，抗體水平和T細胞免疫水平均低于同類疫苗在食蟹猴體內激發(fā)的免疫水平。

2.1.3 Ⅰ期臨床試驗-3 2015年11月，Tapia等在《柳葉刀傳染病》發(fā)表了用ChAd3-EBO初免，利用痘病毒載體的MVA-BN-Filo進行加強免疫的Ⅰ期臨床試驗結果[4]，該文章綜合了3個臨床Ⅰ期結果。在美國進行的是單盲、隨機的Ⅰ期臨床試驗，招募18～65歲的成年人；在馬里進行的是開放和雙盲、劑量遞增的Ⅰb臨床試驗，招募18～50歲的醫(yī)務人員，其中部分受試者劃入巢式、隨機、雙盲和安慰劑對照的MVA-BN-Filo疫苗組。在馬里和美國的臨床試驗隨機化中，采用計算機按照1∶1隨機分配至不同的劑量組中，馬里受試者的劑量分別為1×1010、2.5×1010、5×1010和1×1011VP，美國受試者的劑量分別為1×1010和1×1011VP。馬里受試者隨機分入巢式試驗中，接受注射2×108PFU的MVA-BN-Filo或安慰劑（生理鹽水）。在馬里試驗的雙盲部分，研究者、臨床工作人員、受試者和免疫學實驗室工作人員保持盲態(tài)，但研究藥師、疫苗注射人員和統(tǒng)計師不是盲態(tài)。在美國臨床試驗中，研究者不是盲態(tài)，但受試者是盲態(tài)。主要研究終點是免疫7天后的安全性，由副反應發(fā)生率來判斷。

本試驗于2014年10月至2015年2月進行，在馬里共入組91名受試者，1×1010VP組10人，2.5×1010VP組35人，5×1010VP組35人，1×1011VP組11人；在美國共入組受試者20人，1×1010VP組10人，1×1011VP組10人。馬里受試者中共有52人加強免疫了MVA-BN-Filo（27人）或安慰劑（25人）。研究結果表明2種疫苗都沒有安全性問題。馬里的91名受試者中有7人（8%）出現(xiàn)了發(fā)熱（5×1010VP組5人，1×1011VP組2人），發(fā)熱持續(xù)時間不超過24小時；美國的20名受試者中4人出現(xiàn)發(fā)熱，均在1×1011VP組，持續(xù)時間不超過24小時；加強免疫MVA-BN-Filo的27名馬里受試者中，有15人出現(xiàn)注射部位疼痛或虛弱。

檢測了免疫4周后抗體的GMT值，1×1011VP組的抗體均值顯著高于其他劑量組，抗體水平在免疫4周后達到峰值，在接下來的12周緩慢下降。經過MVA-BN-Filo加強之后，抗體均值上升36倍，且能在此高水平維持。接受高劑量組chAd3-EBO的抗體水平高于低劑量組。加強免疫組與非加強免疫的受試者在基礎水平上沒有差異。初免-加強免疫時間間隔也沒有差異，加強免疫4周后的抗體GMT為9297.6，顯著高于初免后28天的抗體GMT（356.4），平均值增長了26倍。觀察了5名1×1011VP組受試者chAd3-EBO-Z的抗體持久性，免疫后259天，抗體水平輕微下降。初次免疫后，T細胞反應較輕微，chAd3-EBO-Z初免后，14/49受試者CD4+細胞或CD8+細胞的T細胞免疫反應陽性。在加強免疫后7天，CD4+細胞或CD8+細胞的T細胞免疫反應均增加。

2016年4月，Ewer在《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)表了ChAd3-EBO-Z初免、MVA-Filo加強免疫的長期免疫效果觀察結果[10]。初次免疫受試者的劑量分別為1×1010、2.5×1010和5×1010，每組20人，每組中10人接受MVA-Filo加強免疫。免疫4周后，chAd3-EBO-Z初免與rVSV-ZEBOV免疫學效果相似，chAd3-EBO-Z的抗體滴度為752，而rVSV-ZEBOV的抗體滴度為921。2種疫苗的中和抗體滴度也相似，分別為 14.9和 22.2。MVA-Filo加強免疫后，抗體滴度升高了12倍，達到9007；CD8+T細胞反應升高了5倍，中和抗體滴度顯著升高，達到139。ChAd3-EBO-Z免疫后6個月的抗體滴度為758，而經過MVA-Filo加強的受試者加強后6個月的抗體滴度為1750，加強后的免疫效果更好一些。

2.1.4 Ⅰ/Ⅱa期臨床試驗-4 2016年3月，Santis等在《柳葉刀傳染病》雜志上發(fā)表了在瑞士洛桑開展的ChAd3-EBO-Z疫苗的隨機、雙盲、安慰劑對照的臨床試驗結果[11]。共120名受試者，分為安慰劑組（20人）、2.5×1010組（51人）和5×1010組（49人）。75%的高劑量組受試者、79%的低劑量組受試者及25%的安慰劑組受試者出現(xiàn)了局部不良反應。疲勞和惡心是最常見的系統(tǒng)不良反應，出現(xiàn)在62%的高劑量組受試者、60%的低劑量組受試者及25%的安慰劑組受試者中。頭痛和發(fā)熱也是較為常見的系統(tǒng)不良反應。免疫后28天，針對Ebola GP抗體值達到峰值，高劑量組為51 μg/mL，低劑量組為44.9 μg/mL，安慰劑組為3.2 μg/mL。免疫后180天，抗體值降低到高劑量組為25.5 μg/mL，低劑量組為22.1 μg/mL，安慰劑組為3.2 μg/mL。高劑量組受試者中，57%產生CD4+T細胞反應，67%產生CD8+T細胞反應；低劑量組受試者中，61%產生CD4+T細胞反應，69%產生CD8+T細胞反應。

2.2 人腺病毒 26載體埃博拉疫苗（Ad26-EBOV）

2016年 Milligan等在 JAMA發(fā)表了利用Ad26.ZEBOV與MVA-BN-Filo加強的臨床試驗結果[12]。該產品由美國制藥公司Johnson&Johnson研制。這是一項單中心、隨機、安慰劑對照、觀察者盲態(tài)的Ⅰ期臨床試驗，在英國牛津開展，開始于2014年12月，結束于2015年10月。共入組87名18～50歲的受試者，分為5組，72人隨機分入4組，每組18人，2組為首次免疫Ad26.ZE?BOV，分別再于免后29、57天免疫MVA-BN-Fi?lo；2組為首次免疫MVA-BN-Filo，分別再于免后29、57天免疫Ad26.ZEBOV。15人分配至開放研究組，首次免疫Ad26.ZEBOV，再于免后15天免疫MVA-BN-Filo。未見疫苗相關的嚴重不良事件。在隨機組內，MVA-BN-Filo免后未出現(xiàn)發(fā)熱，而Ad26.ZEBOV免后5%的受試者出現(xiàn)發(fā)熱。在開放研究組，Ad26.ZEBOV免后27%的受試者出現(xiàn)發(fā)熱。在隨機組內，97%的Ad26.ZE?BOV接種者初次免疫后28天可檢測到抗體，而23%的MVA-BN-Filo接種者初次免疫后28天可檢測到抗體，在加強免疫后21天，所有受試者均可檢測到抗體。加強免疫后7天，86%的受試者檢測到特異性T細胞反應。免疫后240天，所有接種疫苗的受試者抗體仍然維持在高水平。

2.3 水泡性口炎病毒載體-埃博拉疫苗（rVSVZBEOV vaccine）

該疫苗是利用改造后的水泡性口炎病毒載體，表達Zaire Kikwit 1995型EBO GP蛋白，疫苗類型為復制型重組VSV病毒，在人體內能夠持續(xù)復制，由加拿大公共衛(wèi)生署研制，目前商業(yè)開發(fā)權轉讓給美國默克公司。

2.3.1 Ⅰ期臨床試驗-1 2015年4月1日在《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)表了VSV疫苗的Ⅰ期臨床試驗結果[7]，是一項雙盲、安慰劑對照、劑量遞增的Ⅰ期臨床試驗，試驗地點在美國，共入組52人，分為2個臨床試驗點，每個點26人，分為2組，2×107PFU組和3×107PFU組，每組13人中，10人注射疫苗，3人注射安慰劑。

該疫苗最常見的不良反應為注射部位疼痛、肌肉痛和虛弱，所有受試者均出現(xiàn)了暫時的VSV病毒血癥。免疫后14天，2×107PFU組，19/ 20（95%）受試者陽轉；3×107PFU組，18/20（90%）受試者陽轉。2×107PFU組的抗體GMT值為857，而3×107PFU組的抗體GMT值為283。免疫4周后，所有受試者100%陽轉，2×107PFU組的抗體 GMT值高于3×107PFU組（4079 vs 1300），基于假病毒的中和抗體水平分別為441和223。該試驗未進行T細胞免疫檢測。

2.3.2 Ⅰ期臨床試驗-2 2015年4月1日在《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)表了另外一篇VSV載體疫苗的Ⅰ期臨床試驗結果，包括3個開放、劑量遞增的Ⅰ期試驗和1個隨機、雙盲、對照的Ⅰ期試驗，試驗地點在歐洲和非洲，共入組158人。未發(fā)現(xiàn)嚴重的疫苗相關副反應。輕到中度的早期反應較為常見，但是暫時性的。在注射3×106PFU以上的110人受試者中，103人（94%）在免疫后3天內出現(xiàn)了疫苗的病毒血癥，在唾液和尿液中未檢測到rVSV。免疫后2周時，日內瓦的51名受試者中，有11名（22%）出現(xiàn)了1～4個關節(jié)的關節(jié)炎，疼痛持續(xù)的平均時間是8天左右。在德國和肯尼亞的40名受試者中出現(xiàn)了2個自限性疾病的受試者，1例在滑膜液中檢出病毒，1例在皮膚水泡中檢出病毒，說明在免疫后2周病毒仍在外周組織復制。

共分為6個劑量組，即3×105、3×106、1×107、2×107、5×107PFU組和安慰劑組。ELISA檢測抗體時，低水平的陽性值在一些地方檢測出（12/ 23，52%）。免疫4周后，所有疫苗組受試者都檢測到了抗體，最低劑量3×105PFU組也顯示出了免疫原性。在使用滅活病毒作為抗原的ELISA檢測中，血清陽轉率為53%。利用假病毒檢測中和抗體時，91名受試者中有76人出現(xiàn)了陽轉。盡管在GP蛋白ELISA和假病毒中和抗體之間有相關性，在試驗中還是觀察到一些較大的差異。在日內瓦的試驗中，5×107PFU組和1× 107PFU組受試者中ELISA檢測到了相似的GP抗體水平，GMT值分別為1780和1064，而中和抗體值分別為273和99，說明高劑量可能會激發(fā)更高的中和抗體水平。

2016年4月，在《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)表了該研究的最終研究結果[13]。未見疫苗相關的嚴重不良反應，輕到中度的早期不良反應常見但是很短暫。30%的受試者出現(xiàn)了發(fā)熱。在免疫后180天時，抗體滴度仍維持在較高水平。與免疫后28天抗體值相比，抗體變化范圍在0.59～1.59倍之間。

2.3.3 Ⅲ期臨床試驗 2015年7月31日在《柳葉刀》雜志發(fā)表了一項rVSV-ZEBOV疫苗的Ⅲ期臨床試驗[8]，該研究于2015年4月1日至7月20日在幾內亞開展，由WHO負責實施。這是一項開放、隨機分組的環(huán)形接種試驗，作為國家監(jiān)測體系的一部分，由埃博拉反應小組來獨立確定疑似Ebola病例，實驗室確認新病例之后，首先定義這個組的接觸者和接觸者的接觸者，按1∶1隨機分配至立即接種組和延遲（21天后）接種組中，接種劑量為2×107PFU，未懷孕或哺乳期的成年人都可以入組。塊隨機（Block randomis?ation）是通過隨機變化塊、地域（城市或農村）、環(huán)的大?。ā?0人或>20人）來進行分層。該試驗是開放設計的，對受試者和不同接種時間的區(qū)域內的隊伍來說不可能保持盲態(tài)，但埃博拉響應小組和實驗室檢測人員并不清楚立即接種組和延遲接種組的分配?？紤]到體內病毒潛伏期約10天，預設的主要研究重點是入組后10天出現(xiàn)埃博拉病毒病癥狀且實驗室確認的病例，根據(jù)立即接種組和延遲接種組的發(fā)病情況來進行分析。

試驗共招募7651人，分90群（cluster），其中48群（4123人）立即接種，即在出現(xiàn)病例后，周圍接觸人群馬上接種疫苗；42群（3528人）延遲接種（21天后），即出現(xiàn)病例后，周圍接觸人群在21天后接種疫苗。結果表明在接種10天之后，立即接種組沒有出現(xiàn)感染病例，而延遲接種組出現(xiàn)了16例新發(fā)病例。在立即接種組和延遲接種組接種6天后，均沒有出現(xiàn)新發(fā)病例，疫苗顯示了良好的保護效果。試驗中，共報告了43例SAE，其中1例被認為可能與疫苗接種相關（1例受試者出現(xiàn)了高熱）。

2016年12月，Henao-Restrepo等在《柳葉刀》發(fā)表了VSV-ZEBOV疫苗的Ⅲ期臨床試驗的最終研究報告[14]。受試者人群包括幾內亞和塞拉利昂的唐克里里和邦巴里地區(qū)，Ⅲ期臨床試驗最終招募8334人，根據(jù)感染病例分為117個群，其中包括194名兒童，5837人接種疫苗。該試驗只監(jiān)測了不良反應和Ebola病毒感染情況，未進行血清抗體方面的檢測。在隨機化分組部分，4539名受試者分為51個群，分配至立即接種組（3232人合格，2151人同意，2119人立即接種）；4557人分為47個群，分配至延遲接種組（3096人合格，2539人同意，2041人隨機化分組后21天接種）。立即接種組在接種10天后無發(fā)病人數(shù)，而延遲接種組在隨機化分組后10天有16人（7個群）發(fā)病，疫苗顯示了100%的有效性（95%CI 68.9～100.0，P=0.0045）。此外，19個非隨機化分群共計2745人，其中2006人合格，1677人進行了立即接種，其中包括194名兒童。在所有的117個群中，立即接種組在接種10天后無發(fā)病人數(shù)，而延遲接種組在隨機化分組后10天有23人（11個群）發(fā)病，總體而言，預估疫苗有效率為100%（95%CI 79.3～100.0，P= 0.0033）。所有疫苗接種者訪視至84天，在免疫后14天53.9%的受試者至少報告了1項不良反應，大部分是輕度的。主要的副作用是頭痛（25.4%）、疲勞（18.9%）和肌肉痛（13.1%）。出現(xiàn)了80例嚴重不良事件。2例被判定為與疫苗有關，分別是發(fā)熱和過敏反應；1例流感樣疾病是可能相關。3例均康復，無后遺癥。

2.4 人5型腺病毒載體-埃博拉疫苗（Ad5-EBOV）

該疫苗是以人5型腺病毒（Ad5）為載體表達EBOV GP蛋白，疫苗類型為復制缺陷型重組腺病毒，在人體內不能持續(xù)復制。

2.4.1 Ⅰ期臨床試驗 2015年3月25日在《柳葉刀》發(fā)表了Ad5-EBOV的Ⅰ期臨床試驗[15]，這是在江蘇省泰州市進行的一項隨機雙盲、安慰劑對照的臨床Ⅰ期研究。18～60歲的健康成年人順序入組，按照2∶1的比例分別編入安慰劑組、低劑量組和高劑量組。所有參加者、研究者和實驗室人員均為盲態(tài)。主要的安全性終點為接種7天內的征集性不良反應。主要的免疫原性終點是接種后28天的糖蛋白特異的抗體滴度和T細胞反應

在2014年12月28日至2015年1月9日間共招募120名受試者，分別入組低劑量組、高劑量組和安慰劑組，每組40人。受試者觀察到28天。在接種7天內82名受試者（68%）報告至少有1項征集性副反應（安慰劑組19例，低劑量組27例，高劑量組36例，P=0.0002）。最常見的反應為注射部位的輕微疼痛，安慰劑組8人（20%），低劑量組14人（35%），高劑量組29例（73%），組間P<0.0001。其他副反應和實驗室檢測在組間無顯著性差異。低劑量和高劑量組的受試者的糖蛋白特異的抗體水平顯著升高，在14天時抗體GMT值分別為421.4和820.5（P< 0.0001）；在28天時抗體幾何平均值分別為682.7和1305.7（P<0.0001）。14天時T細胞反應達到峰值，低劑量組SFC中位數(shù)為465.0，高劑量組為765.0。共有21人（18%）輕微發(fā)熱，包括安慰劑組9人、低劑量組6人和高劑量組6人。未觀察到嚴重的副反應。研究結果表明高劑量疫苗Ad5-EBOV是安全的，免疫原性很強。1針高劑量Ad5-EBOV在14天時就能激發(fā)產生糖蛋白特異的體液免疫和T細胞反應來抵抗埃博拉病毒感染。

2016年12月22日，Ad5-EBOV加強免疫的研究結果發(fā)表在《柳葉刀全球衛(wèi)生》上[16]。與上一研究同樣的一批受試者，在首次免疫后6個月，再次接受同樣劑量的疫苗免疫，觀察至免疫后1年。原初的臨床試驗招募的120名受試者中，有110人參加了加強免疫（高劑量組38人，低劑量組35人，安慰劑組37人），初次免疫后6個月進行同種疫苗的加強免疫，誘導了針對埃博拉糖蛋白的強烈的體液免疫反應，這一反應強度要高于單針初次免疫所激發(fā)的免疫反應。加強免疫后28天抗體水平快速增長，相比于加強免疫前，低劑量組增長了30倍以上，達到6110.3（95%CI 4705.4～7934.6），高劑量組增長了20倍，達到11824.9（8903.6～15704.8）。接受1.6×1011VP疫苗的高劑量組受試者相比于低劑量組顯示出更強的加強免疫后抗體滴度。然而，在此之后抗體水平逐漸下降。到加強免疫后12個月，低劑量組和高劑量組的抗體幾何平均值分別為674.1（95%CI 505.9～898.2）和856.8（573.8～1279.2），仍然維持在相對較高的水平。

加強免疫后，特異T細胞反應適度增強，在低劑量組中，IFN-γ的斑點形成細胞數(shù)為23.3（IQR 16.7～90.0），高劑量組中這一數(shù)值為95.0（63.3～196.7），均顯著高于安慰劑組。相比于加強免疫前，雖然加強免疫誘導了更高水平的IFN～γ表達，但這一表達水平顯著低于初次免疫后28天的IFN～γ表達水平。研究結果表明在初免疫后6個月進行同種疫苗加強免疫能夠引起強烈而持久的抗體反應。

2.4.2 Ⅱ期臨床試驗 2016年12月22日，在塞拉利昂開展的Ad5-EBOVⅡ期臨床試驗結果發(fā)表于《柳葉刀》[9]。這是一項隨機、觀察員單盲、安慰劑對照的Ⅱ期臨床試驗。18～50周歲的健康成年人隨機以2∶1∶1的比例分別接受單針次高劑量（1.6×1011VP）和低劑量（8.0×1010VP）Ad5-EBOV或安慰劑，疫苗接種后對所有受試者進行6個月的隨訪。共招募500名受試者，分別接種了高劑量疫苗（250人）、低劑量疫苗（125人）或安慰劑（125人）。疫苗接種受試者的征集性注射部位不良反應顯著高于安慰劑組（P= 0.0077），但大多數(shù)反應是輕度或中度的。高劑量疫苗組報告了3例嚴重不良反應事件。Ad5-EBOV誘導的ELISA EC90抗體陽性反應在免疫后14天可檢測到，抗體反應在免疫后28天達到峰值，低劑量組抗體滴度為1471.8（95%CI：1151.0～1881.8），高劑量組抗體滴度為 2043.1（1762.4～2368.4）。疫苗誘導產生的抗體在之后的幾個月內迅速下降。該研究表明Ad5-EBOV疫苗在塞拉利昂健康成年人中是安全的，且具有高免疫原性，以低劑量（8.0×1010VP）進行接種最佳。

3 結語

目前，已有臨床數(shù)據(jù)證實，GP蛋白具有良好的免疫原性，可刺激機體產生免疫保護。rVSV-ZBEOV疫苗更是在Ⅲ期臨床試驗中驗證了其保護性，證實了以GP蛋白為目標抗原的病毒載體疫苗的可行性。多種病毒載體類疫苗在人體上顯示了很好的安全性和免疫原性，有望發(fā)展成為埃博拉疫苗。

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An Overview of Clinical Trials for Ebola Vaccines

HOU Li-Hua*
Beijing Institute of Biotechnology,Beijing 100071,China
*Corresponding author,houlihua@sina.com

Several clinical trials for Ebola vaccines started after Ebola epidemic outbreak in 2014.Ebola vac?cines in the clinical trials mainly focused on viral vectors,such as human adenovirus vector（Ad5 and Ad26）, Chimpanzee adenovirus vector（chAd3）,vesicular stomatitis virus vector（VSV）,vaccinia vector（MVA）.Different vac?cination strategies were used in the clinical trials,including one immunization and prime-boost immunization.Those Ebola vaccines based on Ad5,Ad26,ChAd3 and MVA vectors showed good immunogenicity in phaseⅠand phaseⅡ clinical trials,and Ebola vaccine based on VSV vector showed protection efficacy in phaseⅢ clini?cal trial.

Ebola vaccine;clinical trials;virus-vector vaccines;immunogenicity

R373;R392

A

1009-0002（2017）01-0035-09

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.01.007

2017-01-02

侯利華（1973-），女，研究員

侯利華，（E-mail）houlihua@sina.com