賀艷芳，歐超偉，龐偉君(廣東醫(yī)科大學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 湛江 524001)

免疫固定電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用進(jìn)展

賀艷芳，歐超偉，龐偉君
(廣東醫(yī)科大學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 湛江 524001)

結(jié)合實(shí)際情況，本文首先闡述了免提固定電泳技術(shù)的基本概念，后對(duì)該技術(shù)的臨床應(yīng)用情況進(jìn)行全面分析，旨意為相關(guān)研究人員提供參考資料。

免疫固定電泳技術(shù)；多發(fā)性骨髓瘤；腎??；毛細(xì)血管免疫固定電泳；支氣管炎；應(yīng)用價(jià)值

所謂電泳，主要指的是帶電分子于電場(chǎng)中朝向電性相反電極移動(dòng)現(xiàn)象。使用電泳現(xiàn)象，可對(duì)物質(zhì)實(shí)現(xiàn)分離，該項(xiàng)技術(shù)也被稱(chēng)之為電泳技術(shù)。早在19世紀(jì)，沙俄物理學(xué)家Rocoss就進(jìn)行了世界首個(gè)電泳實(shí)驗(yàn)。在1937年，有學(xué)者使用特定界面，使用電泳的方式，將血清蛋白成功的分成了5個(gè)成分，這對(duì)于電泳的發(fā)展來(lái)講，有著里程碑式意義。到了上世紀(jì)中葉，聚丙烯酰胺凝膠等物質(zhì)介入到電泳中，這令該項(xiàng)技術(shù)得到了飛躍性進(jìn)展，各式各樣和電泳相關(guān)的技術(shù)與設(shè)備問(wèn)世。這些自動(dòng)化電泳分析設(shè)備，全面拓展了電泳應(yīng)用領(lǐng)域，當(dāng)前已經(jīng)成為了醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作的必要性工具之一。結(jié)合實(shí)際情況，本文就免疫固定電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用進(jìn)展情況加以全面分析，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 免疫固定電泳技術(shù)簡(jiǎn)介

所謂免疫固定電泳技術(shù)，主要指的是把待檢測(cè)的呼和物質(zhì)抗原先經(jīng)過(guò)常規(guī)區(qū)電泳，令差異化蛋白質(zhì)分離（蛋白質(zhì)所帶的靜電荷存在差異，不同的分子或者帶電微粒電泳遷移率存在不同，因而出現(xiàn)分離現(xiàn)象）。后使用單克隆抗血清作用在被分離的蛋白質(zhì)中，實(shí)施抗原體反應(yīng)。令抗原在原有電泳位置上被免疫固定。這種方式為既往免疫電泳的分支方式。在進(jìn)行完免疫固定之后，區(qū)帶呈現(xiàn)出單一化免疫復(fù)合物質(zhì)沉淀帶，和沒(méi)有進(jìn)行過(guò)免疫固定的樣本相比，經(jīng)這種方式處理過(guò)的樣本可以更加容易的分辨出蛋白質(zhì)成分，方便對(duì)樣本性質(zhì)和成分鑒定。免疫電泳為電泳和免疫技術(shù)的統(tǒng)體現(xiàn)，當(dāng)前已經(jīng)被大范圍的應(yīng)用在臨床疾病診斷之中。把高分辨率和抗原-抗體與血清電白電泳完美糅合，可對(duì)樣本蛋白實(shí)施定型和分型，這種處理方式的靈敏性較高，可以檢測(cè)到含量為50～150 ng/dl[1]的單克隆抗體。和其他方式相比，這種方法的特異性也較強(qiáng)，對(duì)于診斷免疫球蛋白增殖疾病來(lái)講，存在十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

2 免疫固定電泳技術(shù)在多發(fā)性骨髓瘤診斷中的應(yīng)用價(jià)值

MM（多發(fā)性骨髓瘤）為非良性漿細(xì)胞病變中的一種極為常見(jiàn)的單克隆骨髓漿細(xì)胞而惡性增殖疾病。增生后的漿細(xì)胞節(jié)后相對(duì)單一，單克隆免疫球蛋白也被稱(chēng)之為M蛋白。差異化類(lèi)型MM疾病患者，所顯示出的M蛋白位置有差異。發(fā)生增生的漿細(xì)胞浸潤(rùn)和產(chǎn)物會(huì)令機(jī)體器官功能異常。有文獻(xiàn)證實(shí)，MM誤診率為高達(dá)54.00%～69.54%[2]。誤診時(shí)長(zhǎng)跨越范圍廣泛，導(dǎo)致患者錯(cuò)過(guò)治療時(shí)機(jī)。

M蛋白在電泳條件下基底較窄，單峰，分布均勻，因此也被稱(chēng)之為敷蛋白。使用經(jīng)尿液和血清免疫固定電泳，可將M蛋白分為IgE,IgM,IgG,IgA,IgD與輕鏈型，單雙克隆型，不分泌型等等。

免疫固定電泳技術(shù)為鑒別M蛋白的公允方式之一，國(guó)內(nèi)諸多文獻(xiàn)對(duì)該學(xué)術(shù)命題進(jìn)行了報(bào)道。有實(shí)驗(yàn)指出[3]，在50例MM患者中，6例免疫固定電泳結(jié)果顯示為陰性，出現(xiàn)這種情況的原因可能是患者處于病情好轉(zhuǎn)期。還有1例患者無(wú)法檢測(cè)出M蛋白，推測(cè)為不分泌性多發(fā)骨髓瘤，剩下患者電泳結(jié)果均顯示為陽(yáng)性。診斷有效率為88.00%。M蛋白數(shù)量在一定程度上反映出癌瘤細(xì)胞大小和單克隆增生水平，因?yàn)橥蛔冃灾昙?xì)胞非良性增生，常規(guī)細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，M蛋白顯含量顯著上升。目前，MM的發(fā)病率呈現(xiàn)出了逐年上升的趨勢(shì)，由此能夠看出，應(yīng)將M蛋白檢測(cè)視為必要檢查手段之一。使用免疫固定電泳法，對(duì)于MM診斷和分型鑒別有著極其重要的現(xiàn)實(shí)意義，利用該項(xiàng)技術(shù)，可在一定程度上降低MM誤診率。

3 免疫固定電泳技術(shù)在惡性腫瘤疾病中的診斷價(jià)值

惡性腫瘤為機(jī)體細(xì)胞非正常增生所產(chǎn)生的贅生物，腫瘤內(nèi)的遺傳因子，免疫情況和誘變因子為促使腫瘤形成的基礎(chǔ)。如果正常細(xì)胞發(fā)生癌變，其就會(huì)體現(xiàn)出不同于正常行細(xì)胞的生物學(xué)行為，表面成分也發(fā)生了一些改變。促使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，體現(xiàn)出免疫監(jiān)視，抗癌細(xì)胞抗體為癌癥抗原刺激機(jī)體所出現(xiàn)的體液免疫應(yīng)答所形成的效應(yīng)分子。有文獻(xiàn)證實(shí)，對(duì)20例已確診的癌癥患者血清蛋白電泳和免疫固定電泳結(jié)果進(jìn)行全面比較。結(jié)果證實(shí)有12例患者的血清蛋白電泳結(jié)果存在非正常峰帶，在此其中有8例在γ區(qū)域，4例在β-γ區(qū)域，其免疫固定電泳結(jié)果呈現(xiàn)為陽(yáng)性。

4 免疫固定電泳在骨髓瘤腎臟疾病患者中的診斷價(jià)值

因?yàn)镸M患者一般存在免疫功能障礙現(xiàn)象。對(duì)其實(shí)施免疫球蛋白定量檢查可見(jiàn)其單種免疫球蛋白指數(shù)顯著上升，其余幾種蛋白則呈現(xiàn)為下降。少數(shù)患者的免疫球蛋白和輕鏈在爭(zhēng)產(chǎn)范圍以?xún)?nèi)，只有兩種輕鏈體現(xiàn)出了比例失調(diào)現(xiàn)象。因此單純憑借免疫固定電泳技術(shù)并不能很好的提示出骨髓瘤腎病，需要使用該項(xiàng)技術(shù)來(lái)鑒別是否存在單克隆抗體。但克隆免疫球蛋白存類(lèi)型不同，分子大小也存在差異性，電場(chǎng)內(nèi)泳動(dòng)的速度也不盡相同，其主要成分可以出現(xiàn)在γ區(qū)域，α 1，α2或者β區(qū)域，如果克隆成分沒(méi)有出現(xiàn)在γ區(qū)域或者其他類(lèi)別腎病引起的β或者α2區(qū)域上升時(shí)，蛋白電泳存在一定缺陷，無(wú)法證明是否存在單克隆抗體。對(duì)于這種現(xiàn)象，同樣需要免疫固定電泳鑒別，IgD免疫球蛋白在正常情況下，含量非常少，即使單克隆抗體IgD上升至正常值200倍以上，血清蛋白電泳結(jié)果也不會(huì)呈現(xiàn)出單克隆條帶。因此，在診斷IgD骨髓瘤腎病時(shí)，應(yīng)結(jié)合血清免疫固定電泳技術(shù)。

5 免疫固定電泳技術(shù)在診斷支氣管炎癥中的價(jià)值體現(xiàn)

支氣管炎癥包含慢性支氣管炎和急性之支氣管炎，微生物刺激，機(jī)體免疫反應(yīng)和過(guò)敏性反應(yīng)等是造成該疾病發(fā)生的主要原因。和正常人相比，支氣管炎患者的機(jī)體免疫球蛋白數(shù)量顯著上升。有實(shí)驗(yàn)對(duì)45例支氣管炎者的血清蛋白電泳結(jié)果與免疫固定電泳結(jié)果進(jìn)行全面比較，結(jié)果證實(shí)。35例受試者的血清蛋白電泳存在非正常峰帶，在此其中有30例于γ區(qū)內(nèi)，5例在β-γ區(qū)，抑制相對(duì)應(yīng)的免疫固定電泳結(jié)果均為陽(yáng)性。

6 毛細(xì)血管免疫固定電泳臨床診斷價(jià)值體現(xiàn)

毛細(xì)血管免疫固定電泳技術(shù)已經(jīng)在臨床上應(yīng)用。其在診斷惡性淋巴瘤，M蛋白血癥，巨球蛋白血癥定疾病上提供了有利證據(jù)。和尿液樣本周氏蛋白相比，其更為敏感，發(fā)現(xiàn)時(shí)間也更早，雖說(shuō)從當(dāng)前情況來(lái)看，骨髓穿刺依舊為診斷一些血液疾病癌癥的金標(biāo)準(zhǔn)。但在發(fā)作期內(nèi)比較容易見(jiàn)到骨髓瘤細(xì)胞，在疾病早期要想檢測(cè)出骨髓細(xì)胞并不容易。疾病先期注要表現(xiàn)為單克隆抗體上升和免疫球蛋白上升。所以說(shuō)，在疾病早期對(duì)患者實(shí)施免疫固定電泳技術(shù)可以體現(xiàn)出獨(dú)到優(yōu)勢(shì)，可以被視為臨床篩查M蛋白血癥的公允方式。

免疫固定電泳技術(shù)在診斷腎臟疾病，血液病，惡性腫瘤等突顯出獨(dú)到優(yōu)勢(shì)，其檢出率的高低在一定程度上依賴(lài)于疾病誤診和漏診率。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，毛細(xì)血管免疫電泳血清分型法對(duì)單克隆免疫球蛋白增多者的檢出率為100.00%，傳統(tǒng)瓊脂糖凝膠固定電泳的檢出率為80.00%，雖說(shuō)后者為常用經(jīng)典方式，更為醫(yī)生所接受，但這種方式操作相對(duì)繁瑣，對(duì)于人工操作的熟練度有一定要求，另外受到加樣準(zhǔn)確性，染料質(zhì)量等因素，直接對(duì)結(jié)果造成影響。與后者相比，前者操作程序更為簡(jiǎn)便，出具結(jié)果時(shí)間也更少。但毛細(xì)血管免疫電泳血清分型法也存在一定局限性，那就是在結(jié)果判斷上更加依賴(lài)于檢驗(yàn)者臨床經(jīng)驗(yàn)，要求對(duì)電泳技術(shù)圖譜有較強(qiáng)識(shí)別能力。和曲線圖相比，電泳帶更為置管，。雖說(shuō)都是對(duì)抗原抗體反應(yīng)，曲線圖如果呈現(xiàn)窄高征象即可斷定結(jié)果，峰值會(huì)受到一些因素影響。

從客觀的角度來(lái)看，主要影響原因?yàn)闃O少數(shù)交叉反映，出現(xiàn)這種情況主因免疫學(xué)具備同一性。單克隆免疫球蛋白會(huì)出現(xiàn)想用的抗原決定簇。在特定條件下，單獨(dú)型，同種型和同種異型抗原決定簇會(huì)出現(xiàn)相同抗體反映，于γ球蛋白區(qū)域中會(huì)呈現(xiàn)多克隆增殖免疫球蛋白區(qū)域，形成寡克隆蛋白帶或者寬區(qū)帶，這種結(jié)果會(huì)對(duì)后續(xù)判斷帶來(lái)影響，增加主觀性。值得說(shuō)明的是，免疫固定電泳為定性分析，所出具的結(jié)果并無(wú)定量指標(biāo)。

綜上所述，隨著我國(guó)醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，和既往相比，電泳技術(shù)也取得了卓越性進(jìn)展，自動(dòng)化設(shè)備的使用與介質(zhì)支持等令該項(xiàng)技術(shù)日趨完善。其應(yīng)用范圍也有所增大。當(dāng)前已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于核酸，酶，蛋白質(zhì)與病毒，細(xì)胞分離之中。該項(xiàng)技術(shù)在臨床診斷中發(fā)揮了舉足輕重的地位。在實(shí)際操作過(guò)程中，相關(guān)人員應(yīng)做好質(zhì)量控制，將誤差降到最低，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。當(dāng)前免疫固定電泳技術(shù)與相關(guān)設(shè)備正正在不斷發(fā)展更顯，勢(shì)必會(huì)在今后臨床檢驗(yàn)工作中能夠體現(xiàn)出重要地位。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.06.103