韓忠耀　鄧先擴(kuò)　劉承貴　唐方方　王傳明

摘 要 目的：為解決在《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)課程中對(duì)目標(biāo)單體化學(xué)成分純度判斷不精準(zhǔn)及在提取、分離、純化等過程不能對(duì)目標(biāo)分離成分純度的動(dòng)態(tài)變化監(jiān)控等問題，加強(qiáng)與提高學(xué)生對(duì)現(xiàn)代科學(xué)儀器的實(shí)際操作能力，將高效液相應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)課程中。方法：結(jié)合黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)專業(yè)的實(shí)際情況，通過學(xué)生分組實(shí)驗(yàn)等方式探索將高效液相色譜儀應(yīng)用于《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)課堂中。結(jié)果：解決了傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)課程中用薄層層析法與顯色反應(yīng)等不能監(jiān)控天然藥物化學(xué)成分在提取、分離、純化過程中目標(biāo)單體成分純度的動(dòng)態(tài)變化過程及最終目標(biāo)單體化學(xué)成分具體的純度的問題。結(jié)論：高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)課程中的應(yīng)用，能對(duì)目標(biāo)單體成分進(jìn)行純度精準(zhǔn)判斷以及對(duì)目標(biāo)分離成分純度的進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控，并能增強(qiáng)學(xué)生對(duì)現(xiàn)代科學(xué)儀器的操作能力，但實(shí)驗(yàn)課程中仍存在一些問題，須進(jìn)一步增強(qiáng)該課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革。

關(guān)鍵詞 天然藥物化學(xué) 實(shí)驗(yàn)教學(xué) 高效液相 實(shí)驗(yàn)改革

《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)在實(shí)際開展過程中，通常是針對(duì)某一個(gè)天然藥物中某一個(gè)或幾個(gè)單體化學(xué)成分為目標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過提取、分離、純化等手段，得到目標(biāo)單體化學(xué)成分，最后通常通過薄層層析方法與顯色反應(yīng)等手段對(duì)目標(biāo)單體化學(xué)成分進(jìn)行判斷，但是在實(shí)驗(yàn)過程中，對(duì)得到的目標(biāo)單體化學(xué)成分的進(jìn)行純度判斷始終是個(gè)問題，例如：通過薄層層析技術(shù)并結(jié)合對(duì)照品比較法，雖然能夠?qū)Φ玫降哪繕?biāo)單體化學(xué)成分的純度進(jìn)行定性判斷，但是，具體純度是多少呢？為解決諸類問題，將HPLC技術(shù)，即高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)課程中，查閱相關(guān)文獻(xiàn)，未見關(guān)于高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革中的應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道。本文通過將高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)中進(jìn)行嘗試，探索實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)目標(biāo)單體化學(xué)成分具體純度的判斷以及天然藥物在提取、分離及純化等過程中對(duì)目標(biāo)單體化學(xué)成分純度進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控等問題的解決方法。

1高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)中應(yīng)用的必要性

HPLC技術(shù)，即高效液相色譜技術(shù)是近年來發(fā)展較快、應(yīng)用較廣的一門現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，主要用于天然藥物、中藥及民族藥的含量測(cè)定、質(zhì)量控制、定性定量分析等。

通常，該項(xiàng)技術(shù)主要應(yīng)用于《藥物分析》、《中藥制劑分析》、《中藥分析》、《分析化學(xué)》等課程的實(shí)驗(yàn)實(shí)踐教學(xué)過程中，較少應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中，但是，近年來，隨著天然藥物化學(xué)學(xué)科的發(fā)展、高校職業(yè)教育及適應(yīng)生產(chǎn)與工業(yè)實(shí)際的需要，將高效液相色譜儀應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)中越來越具有必要性，這是適應(yīng)高校實(shí)驗(yàn)課程多樣化、應(yīng)用型及實(shí)驗(yàn)教學(xué)改進(jìn)的要求。

將高效液相色譜儀應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中也是適應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)藥高等院校教學(xué)的需要，并能與現(xiàn)代企業(yè)實(shí)踐緊密結(jié)合起來，為此學(xué)校于2013年采購了多種現(xiàn)代化實(shí)驗(yàn)設(shè)施設(shè)備，如Agilent 1260型高效液相色譜儀及相關(guān)配件二極管陣列檢測(cè)器、在線真空脫氣機(jī)、四元梯度泵等，這些硬件設(shè)施設(shè)備的完善，為將高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)中提供物質(zhì)保障。

2 高效液相色譜儀在《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)中應(yīng)用探索

2.1 知識(shí)準(zhǔn)備

對(duì)《天然藥物化學(xué)》理論教學(xué)過程中加強(qiáng)了高效液相色譜儀的應(yīng)用的學(xué)習(xí)和講解，通過在理論教學(xué)中應(yīng)用講授法、案列分析法、視頻播放、Flash展示、小組討論等方法，學(xué)生基本掌握了該儀器的相關(guān)知識(shí)。

2.2 實(shí)驗(yàn)的選擇、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組

黔南民族醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)專業(yè)《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)共安排五個(gè)實(shí)驗(yàn)，以“黃連中鹽酸小檗堿的提取、分離與鑒定”為例，按照實(shí)驗(yàn)講義，學(xué)生分小組分別開展實(shí)驗(yàn)。將高效液相色譜技術(shù)分別對(duì)藥材粗粉浸泡液、滲漉液、過濾液（石灰乳調(diào)PH后）、濃鹽酸調(diào)試液、鹽酸小檗堿粗品（鹽析純化）、純品共六個(gè)操作過程中鹽酸小檗堿進(jìn)行純度測(cè)定，進(jìn)行全程動(dòng)態(tài)監(jiān)控。實(shí)驗(yàn)的開展，首先是按照實(shí)驗(yàn)教材全程完成傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，再利用實(shí)驗(yàn)過程中比較耗時(shí)的滲漉過程及整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，離線開展高效液相動(dòng)態(tài)全程監(jiān)控檢測(cè)的相關(guān)操作。

2.3 授課教師示范引導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：對(duì)高效液相色譜儀使用前對(duì)照品溶液的制備、供試品溶液的制備、濾膜、濾頭、過濾器及流動(dòng)相的制備等，邊操作演示邊介紹，讓學(xué)生熟識(shí)使用精密儀器高效液相色譜儀前的一些操作要領(lǐng)及注意事項(xiàng)。

在開展實(shí)驗(yàn)的過程中，教師首先介紹高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)、基本原理、操作要領(lǐng)及操作時(shí)注意事項(xiàng)。然后答疑，對(duì)學(xué)生的疑問進(jìn)行解答。最后，以對(duì)照品溶液的檢測(cè)為例進(jìn)行全程演示。

通過教師演示，讓學(xué)生熟識(shí)并掌握高效液相色譜儀的各種操作要領(lǐng)及注意事項(xiàng)，為學(xué)生實(shí)際動(dòng)手操作奠定基礎(chǔ)。

2.4 學(xué)生實(shí)際操作

教師演示后，學(xué)生以小組為單位，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別收集藥材粗粉浸泡液、滲漉液等六個(gè)操作過程中間體適量及純品適量，然后按照供試品溶液的制備方法，進(jìn)行處理，分別用0.45€%em 微孔濾膜濾過到液相小瓶、編號(hào)，即得各操作過程中間體供試品溶液及純品的供試品溶液。然后與對(duì)照品溶液，分別加入到高效液相進(jìn)樣區(qū)相應(yīng)位置，對(duì)號(hào)入座。

2.5 相關(guān)保障措施

根據(jù)檢測(cè)數(shù)量與檢測(cè)時(shí)間等，由于儀器設(shè)備的限制，為保證實(shí)驗(yàn)的順利開展，分小組開展實(shí)驗(yàn)，同時(shí)，保證流動(dòng)相的量要高于實(shí)際用量，根據(jù)預(yù)測(cè)時(shí)間，分時(shí)間段依次進(jìn)行檢測(cè)。每小組檢測(cè)結(jié)束后，離線方式打開數(shù)據(jù)處理軟件，分別查看藥材粗粉浸泡液、滲漉液等六個(gè)操作過程鹽酸小檗堿的純度，記錄在實(shí)驗(yàn)記錄中。用EXCEL軟件或SPSS 18.0軟件繪制不同階段鹽酸小檗堿的純度動(dòng)態(tài)變化曲線數(shù)據(jù)圖。

3 結(jié)果與討論

將高效液相色譜儀應(yīng)用到《天然藥物化學(xué)》實(shí)驗(yàn)課程中，這種探索的結(jié)果是成功的，解決了學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作中對(duì)純度的精準(zhǔn)檢測(cè)，動(dòng)態(tài)監(jiān)控了目標(biāo)化學(xué)成分純度在提取、分離、純化等各階段動(dòng)態(tài)變化，同時(shí)，提高了學(xué)生的動(dòng)手操作能力，但是，在實(shí)驗(yàn)的開展過程中，也存在一定的問題，如儀器設(shè)備少，不能滿足實(shí)際教學(xué)的需要，整個(gè)實(shí)驗(yàn)開展下來比較費(fèi)時(shí)，同時(shí)，在精密儀器室開展實(shí)驗(yàn)，缺少專業(yè)實(shí)驗(yàn)員，建議設(shè)立專業(yè)實(shí)驗(yàn)員教學(xué)崗位。

（通訊作者：王傳明）

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