劉家陽(yáng)，黃 旭，賈宏新

(遼寧省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院 ，遼寧 沈陽(yáng) 110015)

固相萃取/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定畜肉中16種鎮(zhèn)靜劑類獸藥殘留

劉家陽(yáng)1，黃 旭2，賈宏新3*

(遼寧省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院 ，遼寧 沈陽(yáng) 110015)

建立了畜肉中16種鎮(zhèn)靜劑類獸藥殘留的固相萃取凈化/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)的同時(shí)測(cè)定方法。樣品均質(zhì)后經(jīng)氫氧化鈉溶液水解，加入鹽酸溶液提取。提取液經(jīng)固相萃取柱MCX凈化，洗脫液氮?dú)獯蹈珊笥昧鲃?dòng)相溶解，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色譜柱分離，在電噴霧電離源(ESI)和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)正離子模式下測(cè)定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：采用基質(zhì)匹配外標(biāo)法測(cè)定，16種鎮(zhèn)靜劑類化合物在一定濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r2≥0.996 8)，在樣品中的檢出限和定量下限分別為0.01～0.05 μg/kg和0.1～0.5 μg/kg，在3個(gè)濃度加標(biāo)水平下的平均回收率為71.6%～112%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.9%～15.8%。市售多種鮮肉制品的測(cè)定結(jié)果表明，該方法選擇性好、操作簡(jiǎn)單快速、結(jié)果準(zhǔn)確，適用于畜肉中16種鎮(zhèn)靜劑類獸藥殘留的同時(shí)快速測(cè)定。

固相萃取；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；鎮(zhèn)靜劑；畜肉

近年來(lái)畜肉及其制品中獸藥殘留問(wèn)題逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)[1]。鎮(zhèn)靜劑藥物是一類通過(guò)抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)減弱其生理機(jī)能而達(dá)到緩和激動(dòng)、消除躁動(dòng)、恢復(fù)安靜情緒的藥物[2]。近年來(lái)，安眠鎮(zhèn)靜類藥物被個(gè)別不法畜牧業(yè)主作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑用于養(yǎng)殖業(yè)[3]。鎮(zhèn)靜劑類藥物在畜禽體內(nèi)具有一定的代謝周期，非法使用會(huì)保持其藥物原形或代謝產(chǎn)物在畜禽體內(nèi)殘留。消費(fèi)者食用此產(chǎn)品后會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成不良影響，甚至出現(xiàn)增加機(jī)體代謝負(fù)擔(dān)和功能性減退等問(wèn)題，因此許多國(guó)家將此類藥物列為禁用藥物。國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)、歐盟等組織和地區(qū)均對(duì)此類藥物推出限量標(biāo)準(zhǔn)[4-5]。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告中明確規(guī)定氯丙嗪、地西泮等在動(dòng)物源性食品中不得檢出；阿扎哌隆和阿扎哌醇具有相應(yīng)的參考值；安眠酮禁止使用等[6]。目前鎮(zhèn)靜劑殘留的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法[7]、高效液相色譜法[8-10]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11-13]和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[14-16]。其中酶聯(lián)免疫法易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果和交叉反應(yīng)；高效液相色譜法的抗干擾能力差，靈敏度低且不能滿足標(biāo)準(zhǔn)限值的要求；GC-MS方法需對(duì)樣品進(jìn)行繁瑣的衍生化處理；LC-MS/MS技術(shù)無(wú)需衍生化處理，而且在滿足多組分同時(shí)檢測(cè)的情況下仍有較好的選擇性、靈敏度和特異性，彌補(bǔ)了前幾種方法的缺陷。從實(shí)際應(yīng)用來(lái)看，LC-MS/MS方法也是報(bào)道最多的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(Waters ACQUITY H-CLASS TQD)；高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司 MULTIFUGE X1R)；渦旋振蕩器(美國(guó)IKA VORTEX公司 GENIUS 3)；超聲波清洗器(美國(guó)BANDELIN 512H)；氮吹儀(Preekem N1公司)；天平(感量0.000 1 g，美國(guó)Sartorius公司)；Milli-Q超純水器(美國(guó)Millipore公司)；Oasis MCX 6 cc/150 mg固相萃取柱(美國(guó)Waters公司)。

甲醇、乙腈、正己烷(色譜純，F(xiàn)isher公司)；甲酸(色譜純，Sigma公司)；鹽酸、氫氧化鈉、氨水(分析純，北京化工廠)；乙酸銨(分析純，中國(guó)國(guó)藥制劑有限公司)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別準(zhǔn)確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg置于10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，于-20 ℃冰箱保存。臨用前，用甲醇稀釋成100 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品預(yù)處理 畜肉或肉制品去皮去骨，剔除筋膜，用均質(zhì)器充分粉碎混勻后，放置-18 ℃以下冷凍貯存。

1.3.2 樣品提取 稱取2.0 g已粉碎樣品(精確至0.01 g)置于50 mL聚丙烯離心管中，加入5 mol/L氫氧化鈉溶液0.40 mL,渦旋混合30 s，于65 ℃水浴中放置1 h，期間將樣品每隔20 min取出渦旋30 s。水浴后立即加入1.0 mol/L鹽酸溶液10.0 mL劇烈振蕩20 s，超聲10 min，渦旋混合2 min，于-10 ℃，10 000 r/min高速冷凍離心8 min。傾出上清液置于另一50 mL聚丙烯離心管中，在原離心管中再加入1.0 mol/L鹽酸溶液7.0 mL重復(fù)以上操作，合并上清液并用1.0 mol/L鹽酸溶液定容至20 mL。加入10 mL正己烷劇烈振搖2 min，于-10 ℃，10 000 r/min高速離心8 min，吸出下層提取液10.0 mL待凈化。1.3.3 凈 化 將Waters Oasis MCX固相萃取柱連接固相萃取儀中，移取10 mL提取液過(guò)柱，棄去流出液。依次用0.7 mol/L 鹽酸溶液3.0 mL、80%甲醇溶液5.0 mL淋洗，用5%氨化甲醇4.0 mL洗脫，收集洗脫液。于40 ℃水浴氮吹至近干，加入流動(dòng)相定容至1.0 mL，渦旋混合1 min，緩慢過(guò)0.22 μm濾膜，濾液待上機(jī)測(cè)定。

1.4 基質(zhì)工作曲線配制

依次吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)使用液加入相同取樣量的3種空白基質(zhì)樣品中(牛肉、羊肉、豬肉)，樣品按“1.3”前處理方法處理后得到3種基質(zhì)工作曲線，分別對(duì)3種樣品進(jìn)行定量校正。16種鎮(zhèn)靜劑的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線范圍為0.10～10 ng/mL。

1.5 LC-MS/MS測(cè)定

1.5.1 色譜條件 Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色譜柱；柱溫：35 ℃；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：5.0 μL；流動(dòng)相：A為乙腈-0.1%甲酸，B為0.1%甲酸；梯度洗脫程序：0～4.0 min，5%～28% A；4.0～5.5 min，28% A；5.5～8.5 min，28%～30% A；8.5～12 min，30%～68% A；12～16 min，68%～5% A。

1.5.2 質(zhì)譜條件 電噴霧電離源(ESI+)；MRM檢測(cè)方式；毛細(xì)管電壓：1.8 kV；脫溶劑氣溫度：450 ℃；脫溶劑氣流量：800 L/h；錐孔氣流量：10 L/h；源溫度：150 ℃；電離方式、監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞條件見(jiàn)表1。

表1 16種待測(cè)物質(zhì)的質(zhì)譜采集參數(shù)Table 1 Mass spectrometric acquisition parameters of 16 compounds

*quantitative ion

1.5.3 樣品測(cè)定 取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線分析液和已制備好的樣品分析液5 μL分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)平行測(cè)定3次，取峰面積的平均值)。以基質(zhì)工作曲線標(biāo)準(zhǔn)峰的保留時(shí)間和2對(duì)離子對(duì)作為定性依據(jù)，以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

本文選擇的16種鎮(zhèn)靜劑多為堿性弱極性化合物[17]，對(duì)于色譜分離體系中固定相的選擇側(cè)重于對(duì)弱極性化合物的保留且對(duì)流動(dòng)相pH值有較寬的耐受范圍。本方法選擇了超高效液相色譜中常用的3種色譜柱(ACQUITY UPLC HSS T3，ACQUITY CSH C18，ACQUITY UPLC BEH C18)進(jìn)行比較。在使用HSS T3色譜柱時(shí)待測(cè)物色譜峰有明顯的滯后現(xiàn)象，整體時(shí)間延長(zhǎng)，個(gè)別色譜峰展寬明顯。分析原因主要是鎮(zhèn)靜劑類化合物呈堿性，洗脫液加入酸性流動(dòng)相后弱極性特征發(fā)生轉(zhuǎn)變，色譜柱對(duì)其保留增強(qiáng)所致。在使用CSH C18色譜柱時(shí)色譜峰形尖銳，展寬情況好轉(zhuǎn)且靈敏度提高，但16種鎮(zhèn)靜劑的色譜峰距離較遠(yuǎn)，分布不對(duì)稱。因此，本實(shí)驗(yàn)最終選用極性適中的ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，在此條件下各目標(biāo)化合物的峰形尖銳且基本實(shí)現(xiàn)基線分離，具有較好的分離效果和靈敏度。

采用梯度洗脫程序，對(duì)超高效液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)常用的乙腈-水和甲醇-水流動(dòng)相體系進(jìn)行了考察。在使用甲醇-水作為流動(dòng)相時(shí)，柱壓明顯升高，各組分的保留時(shí)間明顯滯后。在乙腈-水體系中洗脫性明顯增強(qiáng)，各化合物的保留時(shí)間縮短，峰形更尖銳且分離度提高?？紤]到16種鎮(zhèn)靜劑的質(zhì)譜電離方式均為正離子模式，在流動(dòng)相體系中加入0.1%甲酸溶液后，多個(gè)目標(biāo)化合物的離子強(qiáng)度得到提高，具有較好的洗脫效果和分離度。因此，本實(shí)驗(yàn)最終選用0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，在優(yōu)化條件下16種鎮(zhèn)靜劑的總離子流圖見(jiàn)圖1。

圖1 16種化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖Fig.1 TIC chromatogram of 16 mixed analytes standard solution

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

16種待測(cè)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)多為含有氮原子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)出堿性化合物的特性，更適合在質(zhì)譜ESI源的正電離模式下運(yùn)行。本實(shí)驗(yàn)采用將16種化合物單標(biāo)液分別進(jìn)樣的方式，在選定的離子化模式基礎(chǔ)上，通過(guò)全掃描和子離子掃描并調(diào)節(jié)毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、源溫度等質(zhì)譜參數(shù)以進(jìn)一步提高各母離子和子離子的信號(hào)水平。根據(jù)歐盟2002/657/EC對(duì)禁用獸藥殘留檢測(cè)確證方法的要求，確證檢測(cè)需要4個(gè)鑒別點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)上述質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化和篩選，每種待測(cè)物最終確定2個(gè)監(jiān)測(cè)離子對(duì)，以滿足歐盟獸殘檢測(cè)確證的要求。

2.3 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

為保證樣品水解過(guò)程的充分性和均勻性，本實(shí)驗(yàn)考察了在不同堿液體積，不同水解溫度條件下對(duì)水解產(chǎn)物最終狀態(tài)的影響：在80 ℃水浴環(huán)境下，分別將0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL的5 mol/L氫氧化鈉溶液加入樣品中進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，加入0.4，0.6，0.8，1.0 mL堿液的樣品在50 min內(nèi)先后全部液化，但加入0.8，1.0mL堿液的樣品中出現(xiàn)棕色泡沫，因此確定加入堿液的最佳體積為0.4 mL；同時(shí)比較了55，60，65，70，75 ℃水浴溫度的影響，結(jié)果表明65，70，75 ℃的水浴環(huán)境下樣品水解完全，液態(tài)均勻且顏色透明。因此，最終采用加入5 mol/L氫氧化鈉溶液0.4 mL，65 ℃水浴溫度作為水解條件。

表2 兩種提取方式對(duì)基質(zhì)工作曲線斜率的影響Table 2 Influence of two extractive methods on slopes of the calibration curve with matrix

a：K1is the slope of calibration curve with base；b：K2is the slope of calibration curve with enzyme

2.3.2 凈化條件的優(yōu)化 由于肉類樣品基質(zhì)中脂肪蛋白含量較高，經(jīng)堿溶液水解后仍殘留部分脂肪蛋白干擾。本方法在樣品水解液中加入鹽酸溶液，使溶液pH值降至蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)以下使蛋白變性后離心沉淀，以達(dá)到消除蛋白類的干擾。本實(shí)驗(yàn)考察了乙酸乙酯、正己烷、石油醚的去除效果。由于16種待測(cè)物中部分呈中等偏弱極性，經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用乙酸乙酯時(shí)待測(cè)目標(biāo)物損失較多，回收率偏低；采用石油醚時(shí)，對(duì)油脂類和弱極性干擾物的去除效果較好，但樣品凈化液冷凍離心后，脂肪層出現(xiàn)片狀結(jié)構(gòu)且分布不均勻，無(wú)法進(jìn)行萃取操作；而采用正己烷溶劑時(shí)，處理液經(jīng)高速冷凍離心后脂肪層分布均勻且界面清晰，蛋白顆粒全部形成沉淀，待測(cè)物損失較少。因此，本方法最終采用正己烷作為凈化試劑并結(jié)合高速冷凍離心方式，取得了較好的凈化效果。由于16種鎮(zhèn)靜劑多為弱堿性化合物，MCX固相萃取柱對(duì)其有較強(qiáng)的吸附作用，因此，本文采用Oasis MCX離子交換固相萃取柱進(jìn)行凈化，通過(guò)后續(xù)的淋洗和洗脫步驟后，最終獲得較為澄清且雜質(zhì)含量少的樣品處理液。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)及消除

在液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的ESI源中，基質(zhì)效應(yīng)會(huì)影響儀器的靈敏度和重現(xiàn)性。對(duì)于肉制品這種富含蛋白、脂肪等復(fù)雜基質(zhì)的樣品，其基質(zhì)效應(yīng)會(huì)更加明顯并嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。因此在建立本方法的同時(shí)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并采取有效措施消除或減弱其影響是非常必要的。本方法采用空白樣品處理液加標(biāo)曲線法(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)(Matrix Effect，ME)：ME=(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線斜率/無(wú)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線斜率-1)×100%?；|(zhì)效應(yīng)為負(fù)值表示存在基質(zhì)抑制效應(yīng)；基質(zhì)效應(yīng)為正值表示存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；基質(zhì)效應(yīng)為0表示無(wú)基質(zhì)效應(yīng)；絕對(duì)值越大表明基質(zhì)效應(yīng)越強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)在16種鎮(zhèn)靜劑類待測(cè)物曲線范圍濃度內(nèi)進(jìn)行評(píng)價(jià)(見(jiàn)表3)，可以看出16種鎮(zhèn)靜劑有不同程度的基質(zhì)效應(yīng)，且抑制效應(yīng)多于增強(qiáng)效應(yīng)。

表3 16種待測(cè)物質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Matrix effects of 16 compounds

a:Ssis the slope of the calibration curve with matrix;b：Smis the slope of the calibration curve without matrix

為消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性與重現(xiàn)性，本實(shí)驗(yàn)采用基質(zhì)匹配工作曲線法對(duì)各目標(biāo)物進(jìn)行定量分析。

2.5 線性范圍、檢出限與定量下限

本方法采用基質(zhì)工作曲線作為定量曲線：選取未檢出鎮(zhèn)靜劑的3種陰性畜肉樣品(牛肉、羊肉、豬肉)，吸取不同量的標(biāo)準(zhǔn)使用液加入3種空白樣品中，按照“1.3”步驟處理后經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)，以待測(cè)物的峰面積(Y)作為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度(X，μg/L)為橫坐標(biāo)，得到 3種基質(zhì)的工作曲線。結(jié)果顯示，16種鎮(zhèn)靜劑的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r2)分別不低于0.996 8?；诨|(zhì)工作曲線中最低響應(yīng)的MRM色譜圖，確定該方法的檢出限LOD(S/N>3)和定量下限LOQ(S/N>10)分別不大于0.05 μg/kg和0.5 μg/kg(結(jié)果見(jiàn)表4)。

表4 16種鎮(zhèn)靜劑類化合物的線性范圍、線性關(guān)系、檢出限與定量下限Table 4 Linear ranges，linear equations，LODs and LOQs of 16 compounds

2.6 方法的準(zhǔn)確度與精密度

本方法采用加標(biāo)回收試驗(yàn)進(jìn)行準(zhǔn)確度和精密度的評(píng)價(jià)。選取不含待測(cè)物且充分粉碎混勻的3種畜肉作為空白基質(zhì)樣品，分別按照低(LOQ)、中、高3個(gè)濃度水平進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定，每個(gè)水平在相同條件下平行測(cè)定6個(gè)樣品，各化合物的回收率和精密度見(jiàn)表5。結(jié)果表明，16種鎮(zhèn)靜劑的平均回收率為71.6%～112%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.9%～15.8%。本方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)的要求。

表5 16種鎮(zhèn)靜劑類化合物的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 5 Spiked recoveries and RSDs of 16 compounds in blank samples(n=6)

(續(xù)表5)

CompoundSpikedw/(μg·kg-1)BovinemuscleOvinemusclePorcinemuscleRecoveryR/%RSDsr/%RecoveryR/%RSDsr/%RecoveryR/%RSDsr/%Haloperidol0.1,1,584.0,102,1106.6,3.8,8.685.2,91.6,1039.7,7.6,8.286.0,94.2,96.19.4,3.4,11.3Droperidol0.1,1,591.2,106,97.76.5,8.8,4.184.2,99.6,10311.5,3.5,8.485.0,102,95.99.9,3.7,8.6Perphenazine0.5,1,597.3,107,1025.6,3.8,8.596.5,106,98.44.8,9.5,4.1102,97.5,1002.9,7.4,5.2

2.7 實(shí)際樣品的測(cè)定

利用本方法對(duì)大中型超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、早市的10份畜肉及畜肉制品樣品進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出以上16種鎮(zhèn)靜劑類獸藥殘留。

3 結(jié) 論

本文采用固相萃取的凈化方式，建立了超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜測(cè)定畜肉及其制品中16種鎮(zhèn)靜劑類獸藥殘留的檢測(cè)方法，該方法采用外標(biāo)基質(zhì)工作曲線法定量。在保證樣品凈化效率的同時(shí)有效補(bǔ)償了基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的干擾，提高了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證數(shù)據(jù)和實(shí)際抽樣檢測(cè)，證明該方法具有靈敏度高、快速準(zhǔn)確、安全經(jīng)濟(jì)、適于多組分分析等特點(diǎn)，適用于畜肉及其制品中鎮(zhèn)靜劑類獸藥殘留的快速測(cè)定。

[1] He J L,Li K X,Yu J L,Liu C J.Chin.AnimalHealthInspect.(賀家亮，李開(kāi)雄，于見(jiàn)亮，劉成江.中國(guó)動(dòng)物檢疫)，2006，23(7):22-24.

[2] Yan L J,Zhang J,Pan C S,Lin L Y，Zhang X Y,Shen H Q.Chin.J.Anal.Chem.(嚴(yán)麗娟，張潔，潘晨松，林立毅，張欣怡，申河清.分析化學(xué))，2013，41(1):31-35.

[3] Zhang L Q,Wu P G,Jin Q,Zhang Y M,Wang X F,Ren R.Chin.J.HealthLab.Technol.(張力群，吳平谷，金銓，張宜明，王小芳，任韌.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志)，2013，23(6):1634-1638.

[4] Codex Alimentarius Commission(CAC).Codex Alimentarius Commission Maximum Residue Limits for Veterinary Drugs in Foods Updated as at the 35th Session of the Codex Alimentarius Commission.

[5] European Parliament and Council.Regulation No.470/2009 of the European Parliament and the Council.2009.

[6] Ministry of Agriculture.No.235 Bulletin of the Ministry of Agriculture of the People's Republic of China.(農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)).

[7] Peng C F,Duan X H,Song S S,Xue F.Int.J.Mol.Sci.，2013，14(10):19474-19483.

[8] Wei J M,Luo Y Z,Bai Y X.Sci.Technol.FoodInd.(魏晉梅，羅玉柱，白云旭.食品工業(yè)科技)，2014，35(10):95-102.

[9] Li P D,Han H R,Zhai X H,He W H,Sun L Y,Hou J F.J.Chromatogr.Sci.，2012，50(2):108-113.

[10] Liang X H,Dai Z Y,Liu W E.J.CentralSouthUniv.:Med.Sci.(梁湘輝，戴智勇，劉文恩.中南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版)，2009，34(7):689-692.

[11] Wei J M,Luo Y Z,Zhang L,Fang S L.J.Sci.FoodAgric.，2015，95(3):598-606.

[12] Sun L,Zhang L,Xu Q,Wang S H,Wang X.Chin.J.Chromatogr.(孫雷，張?bào)P，徐倩，王樹(shù)槐，汪霞.色譜)，2010，28(1):38-42.

[13] Lee S，Han E,In S,Choi H,Chung H,Chung K H.J.Anal.Toxicol.，2011，(35):312-315.

[14] Tan G L,Zhao T Z,Wang W L,Li X L,Zhang N.Mod.FoodSci.Technol.(譚貴良，趙天珍，王文林，李向麗，張娜.現(xiàn)代食品科技)，2014，(2):274-278.

[15] Wang L P,Li X,Sun Y,Zhao H X,Qiu Y M,Zhong W K,Tang Y Z,Wang D N,Zhou Z Q.Chin.J.Anal.Chem.(汪麗萍，李翔，孫英，趙海香，邱月明，仲維科,唐英章,王大寧,周志強(qiáng).分析化學(xué))，2005，33(7):951-954.[16] Zhu J,Liu S X,Li B,Han L.J.Instrum.Anal.(朱堅(jiān)，劉世雄，李波，韓麗.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2005，24(11):301-303.

[17] Zhang S,Zhou S,Chen D W,Hua Z D,Wu Y N,Sun C Y,Zhao Y F.J.Instrum.Anal.(張爍，周爽，陳達(dá)煒，花鎮(zhèn)東，吳永寧，孫承業(yè)，趙云峰.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2014，33(11):1213-1218.

Simultaneous Determination of 16 Sedative Residues in Livestock Products by Solid Phase Extraction/Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

LIU Jia-yang1，HUANG Xu2，JIA Hong-xin3*

(Liaoning Institute for Food Control,Shenyang 110015,China)

A multi-residue method was established for the simultaneous determination of 16 sedative residues(e.g.xylaznie，methaqualone，diazepan，promethazine，oxazepam，carazolol，chlordiazepoxide，zolpidem，chlorpromazine，acetopromaizine，azaperone，azaperol，propionylpromazin，haloperidol，droperidol，perphenazine) in pork using solid phase extraction/ultra performance liquid chromaography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS).The homogenized samples were hydrolyzed with NaOH,then the analytes were extracted with HCl and cleaned up with an Oasis MCX SPE column.After evaporated to dryness under nitrogen and reconsituted，the reconstituted solution was filtrated through a 0.22 μm syringe filter.Chromatographic separation was performed on a Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm) column.The qualitative and quantitative detections of 16 analytes were operated by electrospray ionization-tandem mass spectrometry under the positive mode using multiple reaction monitoring(MRM)mode，with the external standard method.The matrix matching external standard method was used for quantitation analysis.All sedative residues have good linear relationship in the certain concentration range with correlation coefficients(r2) not less than 0.996 8.The limits of detection(LOD) and quantitation(LOQ) for 16 sedative residues were in the range of 0.01-0.05 μg/kg and 0.1-0.5 μg/kg，reapectively.The average recoveries at three spiked concentration levels varied from 71.6% to 112%，and the relative standard deviations(RSD) were 2.9%-15.8%.The method was of high sensitivity，simplicity，reliability and low cost,and was suitable for the simultaneous determination of 16 sedative residues in livestock products.

solid phase extraction；ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；sedative；livestock products

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.03.002

2016-09-21；

2016-10-12

遼寧省科學(xué)事業(yè)公益研究基金項(xiàng)目(2014004028)

O657.63;TQ460.72

A

1004-4957(2017)03-0305-07

*通訊作者：賈宏新，博士，主任技師，研究方向：食品安全檢驗(yàn)檢測(cè)，Tel：024-31620803，E-mail：1094888124@qq.com