張柳蓮 王慶福 黃清鏵 張偉偉 陳盈盈 梁磊*

（1 廣東省生物工程研究所（廣州甘蔗糖業(yè)研究所），廣東廣州510316；2 廣東省甘蔗改良與生物煉制重點實驗室，廣東廣州510316；3 廣東省植物纖維綜合利用工程技術(shù)研究開發(fā)中心，廣東廣州510316；4 廣州市植物纖維綜合利用重點實驗室，廣東廣州510316；5 廣東省生物質(zhì)高值化利用工程實驗室，廣東廣州510316）

秀珍菇（Pleurotus geesteranus Singer）是平菇[1]家族的主要成員，因其營養(yǎng)豐富、口感脆嫩，菇味清香濃郁，深受消費者喜愛[2]。在秀珍菇栽培過程中的主要污染雜菌是鏈孢霉、綠色木霉、黑曲霉及細菌，其中危害最大的是鏈孢霉（Neurospora）。鏈孢霉主要種類有橙色鏈孢霉、粗糙鏈孢霉、好食鏈孢霉、問型鏈孢霉等，呈絨毛狀，白色或灰色，匍匐生長，分枝。分生孢子梗直接從菌絲上長出，與菌絲無明顯差異，梗頂端形成分生孢子[3，4]。鏈孢霉含有大量分生孢子，傳染能力極強。鏈孢霉在自然界分布廣泛，其菌絲生長速度與毛霉極為相似，適宜條件下僅2～3 d 即可布滿培養(yǎng)料表面，與食用菌的菌絲爭奪營養(yǎng)、水分和空間，是目前影響食用菌企業(yè)生產(chǎn)最嚴重的病害之一，嚴重時甚至?xí)斐山^收，導(dǎo)致企業(yè)嚴重虧損[5]，因而選取高效殺菌劑十分急迫。試驗考察多菌靈、甲基托布津、來蘇爾消毒液、二氯異氰尿酸納等四種食用菌生產(chǎn)常用殺菌劑[6～9]對秀珍菇、鏈孢霉的菌絲生長及孢子萌發(fā)抑制情況，以期為秀珍菇生產(chǎn)和鏈孢霉防治提供了參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料①供試菌株:秀珍菇GX01，保藏于廣東省生物工程研究所（廣州甘蔗糖業(yè)研究所）；鏈孢霉菌株為N.Cr01，從秀珍菇污染菌袋中分離。

②供試藥劑:多菌靈（50%可濕性粉劑，四川農(nóng)化股份有限公司）、甲基托布津（70%可濕性粉劑，江蘇龍燈化學(xué)有限公司）、來蘇爾消毒液德州安捷高科消毒制品有限公司）、二氯異氰尿酸鈉（50%，山西康派偉業(yè)生物科技有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥劑濃度梯度設(shè)置 25%多菌靈（質(zhì)量/體積）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

70%甲基托布津（質(zhì)量/體積）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

來蘇爾消毒液（體積比）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

二氯異氰尿酸納（質(zhì)量/體積）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

1.2.2 培養(yǎng)板的準備 采用平板實驗法[3]，按濃度梯度依次加入殺菌劑，以不加藥組為空白對照。

1.2.3 秀珍菇菌絲生長試驗 在無添加殺菌劑的PDA培養(yǎng)上將秀珍菇母種活化，置于25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲將要長滿平板時使用。接種時取直徑6 mm的菌塊至實驗組培養(yǎng)皿中間，每處理重復(fù)3次，置25℃下培養(yǎng)，同時接種無添加殺菌劑的PDA平板作為對照。

每隔24 h觀察1次，觀察菌絲的生長趨勢，至其中一種處理菌絲長滿培養(yǎng)皿后測量所有處理的菌絲生長長度。按照公式計算菌絲生長速率/（mm·d-1）、不同濃度的4種殺菌劑對菌絲生長的抑制率。菌絲生長速率/（mm·d-1）=（菌絲生長長度-接種的菌片半徑）/培養(yǎng)天數(shù)。抑制率/%=[（對照菌絲生長速率-殺菌劑處理菌絲生長速率）/對照菌絲生長速率]×100。

1.2.4 鏈孢霉菌絲生長試驗 鏈孢霉孢子萌發(fā)，采用涂布平板法。將從秀珍菇污染菌袋中分離出來鏈孢霉菌株，在PDA 培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)3 d，再將培養(yǎng)好的鏈孢霉用無菌水洗出，稀釋到在10×10倍顯微鏡下每個視野中含有30～50個分生孢子。在1.2.2培養(yǎng)板上均勻涂布0.1 mL 的鏈孢霉孢子懸浮液，每處理重復(fù)3次。涂布后的玻片平板反置，于25℃下恒溫培養(yǎng)，18 h后檢查萌發(fā)情況，計算孢子萌發(fā)數(shù)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試藥劑對秀珍菇菌絲生長的影響從表1可以看出甲基托布津、來蘇爾消毒液對秀珍菇菌絲的生長影響不大，高濃度的多菌靈對秀珍菇有一定的抑制作用，而1000 倍以上就基本上沒有抑制作用；秀珍菇菌絲在添加甲基托布津、多菌靈、來蘇爾消毒液這三種殺菌劑的培養(yǎng)基中，菌絲厚實潔白，生長勢與無添加的對照組相比沒有明顯差別。但二氯異氰尿酸納對秀珍菇菌絲的生長有極強的抑制作用，秀珍菇菌絲無法正常生長。

表1 供試四種殺菌劑對秀珍菇生長影響

2.2 鏈孢霉菌絲平板抑菌試驗結(jié)果從表2 可以看出甲基托布津、來蘇爾消毒液對秀珍菇致病鏈孢霉菌絲的生長抑制能力較弱，只有高濃度（200 倍）具有較明顯的抑制；但是多菌靈和二氯異氰尿酸納在供試濃度范圍內(nèi)均對鏈孢霉菌絲生長表現(xiàn)完全抑制作用。

表2 供試四種殺菌劑對鏈孢霉菌絲生長影響

2.3 供試殺菌劑對鏈孢霉孢子萌發(fā)的影響從表3的數(shù)據(jù)可以看出:四種殺菌劑中甲基托布津和來蘇爾消毒液對鏈孢霉的孢子萌發(fā)的抑制作用比較弱，只有在高濃度（200倍）下，才能完全抑制孢子的萌發(fā)；而添加多菌靈和二氯異氰尿酸鈉組在供試濃度下鏈孢霉的孢子均不能萌發(fā)，達到完全抑制的效果。

表3 供試四種殺菌劑對鏈孢霉孢子萌發(fā)的影響

3 結(jié)論與討論

試驗結(jié)果表明，四種殺菌劑在相同的條件下，對秀珍菇菌絲和致病鏈孢霉、鏈孢霉孢子分別有不同的影響，多菌靈對鏈孢霉具有很強的抑制性，可以完全抑制鏈孢霉菌絲的生長和鏈孢霉孢子的萌發(fā)；同時對秀珍菇菌絲的抑制能力較弱，秀珍菇菌絲在添加多菌靈的培養(yǎng)基中，菌絲的生長厚實致密；甲基托布津和來蘇爾消毒液均對秀珍菇菌絲的生長基本沒有影響，但兩種殺菌劑對鏈孢霉的抑制能力也較弱，只有在高濃度才具有較明顯抑制，在秀珍菇防治鏈孢霉污染的應(yīng)用受到限制；二氯異氰尿酸納對秀珍菇、鏈孢霉和鏈孢霉孢子均有很強的抑制性。由此可見多菌靈是適合秀珍菇防霉抗病的高效殺菌劑。