徐寧，辛嘉英，王艷，竇博鑫，夏春谷

（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150076；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱 150030；3.中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究院羰基合成與選擇氧化國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730030）

固定化甲烷氧化菌細(xì)胞催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)動力學(xué)研究

徐寧1,2，辛嘉英1*，王艷1，竇博鑫1，夏春谷3

（1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150076；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱 150030；3.中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究院羰基合成與選擇氧化國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730030）

以甲基彎菌IMV 3011（Methylosinus trichosporiumIMV 3011）為試驗(yàn)對象，活性炭為載體，吸附法制成固定化甲烷氧化菌細(xì)胞，催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)，研究內(nèi)外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響，通過控制單一變量法，建立該反應(yīng)冪指數(shù)速率方程。結(jié)果表明，通過Mears方程驗(yàn)證，可忽略內(nèi)擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響；當(dāng)轉(zhuǎn)速高于200 r·min-1時(shí)，可忽略外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響。乙烯環(huán)氧化反應(yīng)冪指數(shù)速率方程中，各因素反應(yīng)級數(shù)分別為：乙烯0.6983、氧氣0.2715、環(huán)氧乙烷-1.0185、催化劑0.5635，通過阿倫尼烏斯方程擬合線得到反應(yīng)活化能22.575 kJ·mol-1。利用冪指數(shù)速率方程可計(jì)算乙烯環(huán)氧化反應(yīng)環(huán)氧化速率，擬合試驗(yàn)表明，測定值與計(jì)算值具有良好擬合性。

固定化；乙烯；環(huán)氧化反應(yīng)；冪指數(shù)方程

環(huán)氧乙烷是重要化學(xué)中間體，廣泛應(yīng)用于化學(xué)制劑合成、食品熏蒸殺菌等領(lǐng)域[1]。目前，環(huán)氧乙烷合成采用化學(xué)催化法將乙烯直接氧化，反應(yīng)溫度高，乙烯易被徹底氧化成二氧化碳[2]。與化學(xué)催化法相比，生物催化法反應(yīng)條件溫和、方法簡單、無污染、腐蝕性小[3]，應(yīng)用潛力大。甲烷單加氧酶（MMO）是甲烷氧化菌代謝途徑中最重要酶，具有催化烯烴環(huán)氧化能力，產(chǎn)物專一性和光學(xué)立體選擇性好[4-5]，可用于生物法合成環(huán)氧乙烷。但甲烷氧化菌直接參與反應(yīng)，易出現(xiàn)MMO穩(wěn)定性差、酶活再生困難、產(chǎn)物積累等問題。固定化細(xì)胞具有酶活穩(wěn)定、操作性好、機(jī)械強(qiáng)度高、可再生循環(huán)利用等優(yōu)點(diǎn)[6-7]，為解決上述問題提供有效途徑。

固定化甲烷氧化菌細(xì)胞采用活性炭為載體，活性炭介入使反應(yīng)體系由氣-液兩相變?yōu)闅?液-固三相，改變反應(yīng)體系組成平衡和動力學(xué)參數(shù)。因此，需建立適合固定化甲烷氧化菌催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)動力學(xué)模型，反映各因素對反應(yīng)速率影響。相關(guān)動力學(xué)研究一般以丙烯為主[8-10]，均用米氏方程分析單一底物對反應(yīng)速率影響，未涉及催化活化能計(jì)算。本研究將冪指數(shù)方程應(yīng)用于固定化細(xì)胞催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)動力學(xué)研究，該動力學(xué)方程與米氏方程不同，通過方程中各因素反應(yīng)級數(shù)數(shù)值，可推斷各反應(yīng)物初始濃度與初始環(huán)氧化速率正負(fù)相關(guān)性及影響程度。

本文將甲基彎菌IMV 3011（Methylosinus trichosporium IMV 3011）吸附到活性炭上，制成生物催化劑，催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)，研究內(nèi)外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響，建立冪指數(shù)速率模型，為生物法制備環(huán)氧乙烷提供理論依據(jù)。

1 催化反應(yīng)過程

乙烯環(huán)氧化反應(yīng)中，底物乙烯和氧氣從液相先擴(kuò)散至載體表面，再擴(kuò)散到載體內(nèi)部。吸附甲烷氧化菌催化乙烯環(huán)氧化產(chǎn)生環(huán)氧乙烷，環(huán)氧乙烷沿反途徑擴(kuò)散至反應(yīng)體系液相中。

2 材料與方法

2.1 材料與儀器

2.1.1 菌種與培養(yǎng)基

甲基彎菌IMV 3011（Methylosinus trichosporium IMV 3011）由俄羅斯科學(xué)院催化研究所提供；發(fā)酵培養(yǎng)基采用NMS培養(yǎng)基，具體配制方法見文獻(xiàn)[11]。

圖1 固定化甲烷氧化菌細(xì)胞催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)過程Fig.1Epoxidation of ethylene by immobilization of whole cells of Methylosinus trichosporium IMV 3011

2.1.2 主要試劑

甲烷、乙烯、氧氣氣體（純度99.99%哈爾濱卿華氣體有限公司）；環(huán)氧乙烷標(biāo)樣（色譜純，AccuStandard公司）；40目活性炭，哈爾濱天賜活性炭有限公司；試驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2.2 方法

2.2.1 固定化甲基彎菌IMV 3011細(xì)胞制備

將100 mL NMS液體培養(yǎng)基置于250 mL三角瓶中，滅菌冷卻后接入甲基彎菌IMV 3011，密封后抽真空，置換甲烷與空氣混合氣體（體積比例1 ? 1），間隔24 h換一次氣。30℃、180 r·min-1搖床培養(yǎng)、96 h后，8 000 r·min-1離心15 min收集細(xì)胞。用4℃、20 mmol·L-1、pH 7.0磷酸鹽緩沖液（含5 mmol·L-1MgCl2）洗滌2次，再懸浮于同樣緩沖液中。用1 mol·L-1HCl溶液浸泡活性炭顆粒，于50℃攪拌1 h，取出后再用去離子水反復(fù)洗滌，直至洗液pH為7.0，加熱干燥。將活性炭置于甲基彎菌IMV 3011細(xì)胞懸液中，二者質(zhì)量體積比例為1 ? 10，室溫下間歇攪拌20 h，濾出活性炭，用4℃、20 mmol·L-1、pH 7.0磷酸鹽緩沖液（含5 mmol·L-1MgCl2）洗滌2次，自然晾干得到固定化細(xì)胞即生物催化劑，該生物催化劑吸附活性炭量為2.5 mg干重細(xì)胞·g-1，催化活力為2.7 nmol·min-1·mg-1。

2.2.2 催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)

乙烯環(huán)氧化反應(yīng)在密封反應(yīng)器中進(jìn)行，250 mL磷酸鹽緩沖液（20 mmol·L-1、pH 7.0，含5 mmol·L-1MgCl2）將生物催化劑懸浮于3 L反應(yīng)器中，反應(yīng)器密封后抽真空，置換乙烯與氧氣混合氣體（體積比例1 ? 1），30℃振蕩反應(yīng)。

2.2.3 內(nèi)外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響

內(nèi)擴(kuò)散影響采用Mears方程[12]驗(yàn)證，表達(dá)方程見式（1）。

其中，φ-修正蒂勒模數(shù)；r-表觀反應(yīng)速率（mol·s-1·L-1）；dp-顆粒直徑（m）；CS-反應(yīng)物在顆粒表面濃度（mol·L-1）；De-有效擴(kuò)散系數(shù)（m2·s-1）；n-總反應(yīng)級數(shù)。

在足夠乙烯和氧氣濃度下，控制催化反應(yīng)器振蕩轉(zhuǎn)速為100、150、200、250、300 r·min-1，反應(yīng)結(jié)束后測定反應(yīng)環(huán)氧化速率，研究外擴(kuò)散對生物催化劑環(huán)氧化速率影響。

2.2.4 冪指數(shù)速率方程建立

為建立冪指數(shù)速率方程[13]，采用控制單一變量方法，即分別控制體系乙烯初始濃度：80、100、120、140、160 μmol·L-1；氧氣初始濃度：120、140、160、180、200 μmol·L-1：催化劑用量：1、2、3、4、5、6 g·L-1；環(huán)氧乙烷初始濃度：5、10、15、20、25 μmol·L-1。測定初始環(huán)氧化速率，確定各反應(yīng)物反應(yīng)級數(shù)及相關(guān)參數(shù)，建立冪指數(shù)速率方程式（2）。

k-速率常數(shù)，a、b、c、d代表乙烯、氧氣、催化劑和環(huán)氧乙烷反應(yīng)級數(shù)，Ea-活化能（kJ·mol-1），A-指前因子，T-反應(yīng)溫度（K），R值為8.314 kJ·mol-1·K-1。

2.2.5 測定方法

乙烯濃度、氧氣濃度和環(huán)氧乙烷濃度用氣相色譜法測定，測定條件：SE-54毛細(xì)管柱（Φ 0.23 mm× 30 m），F(xiàn)ID檢測器，載氣（N2）流速為75 mL·min-1，檢測器、進(jìn)樣室、色譜柱溫度分別為180、180、60℃，進(jìn)樣量1 μL。

環(huán)氧化速率用1 mg甲烷氧化菌細(xì)胞（干重）在1 h內(nèi)催化乙烯生成環(huán)氧乙烷濃度表示（μmol·h-1·mg-1）。

3 結(jié)果與分析

3.1 內(nèi)外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響

為獲得準(zhǔn)確動力學(xué)方程，首先確定傳質(zhì)阻力對環(huán)氧化速率影響，包括內(nèi)擴(kuò)散傳質(zhì)阻力和外擴(kuò)散傳質(zhì)阻力。

內(nèi)擴(kuò)散傳質(zhì)阻力通過賦予方程中各參數(shù)適當(dāng)估計(jì)值，即r、dp、Cs和De數(shù)量級分別為10-12、10-3、10-6和1，估算得出φ為10-3<，說明固定化甲烷氧化菌細(xì)胞催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)符合Mears方程，可忽略內(nèi)部擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響。

圖2 轉(zhuǎn)速對環(huán)氧化速率影響Fig.2Effect of stirring rate on the reaction rate of biocatalyst

由圖2可知，當(dāng)轉(zhuǎn)速<200 r·min-1時(shí)，隨轉(zhuǎn)速增加，環(huán)氧化速率隨之增加；當(dāng)轉(zhuǎn)速>200 r·min-1時(shí)，繼續(xù)增加轉(zhuǎn)速環(huán)氧化速率無明顯變化。當(dāng)轉(zhuǎn)速>200 r·min-1時(shí)，可完全忽略外部擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響。因此建立催化反應(yīng)冪指數(shù)速率方程時(shí)，選擇振蕩轉(zhuǎn)速為200 r·min-1。

3.2 冪指數(shù)速率方程建立

通過改變單一變量方法，研究乙烯初始濃度、氧氣初始濃度、催化劑用量及環(huán)氧乙烷初始濃度對動力學(xué)參數(shù)影響，確定各因素反應(yīng)級數(shù)，建立催化反應(yīng)冪指數(shù)速率方程。

3.2.1 乙烯初始濃度對環(huán)氧化速率影響

結(jié)果見圖3。隨乙烯初始濃度增加，吸附在催化劑表面乙烯濃度增大，斜率增加，環(huán)氧化速率增加。由圖4可知，lnr與ln[ethylene]具有線性關(guān)系（R2=0.9698），其線性方程斜率為0.6983。因此，乙烯初始濃度反應(yīng)級數(shù)為0.6983。

圖3 乙烯初始濃度對環(huán)氧化速率影響Fig.3Plot of ethylene concentration versus reaction time with different ethylene initial concentration

圖4 乙烯反應(yīng)級數(shù)擬合線Fig.4Plot of ln(initial epoxidation rate)versus ln(concentration of ethylene)to determine the reaction order with respect to ethylene

3.2.2 氧氣初始濃度對環(huán)氧化速率影響

O2作為氧化劑，吸附在催化劑表面環(huán)氧化乙烯，氧氣初始濃度對環(huán)氧化速率影響見圖5，隨氧氣初始濃度增加，環(huán)氧化速率增加，但是增加幅度小于乙烯初始濃度增加引起環(huán)氧化速率增加幅度。由圖6可知，lnr與ln[O2]之間具有線性關(guān)系（R2= 0.9722），線性方程斜率即O2反應(yīng)級數(shù)為0.2715。

圖5 氧氣初始濃度對環(huán)氧化速率影響Fig.5Plot of ethylene concentration versus reaction time with different O2initial concentration

圖6 氧氣反應(yīng)級數(shù)擬合線Fig.6Plot of ln(initial epoxidation rate)versus ln(concentration of O2)to determine the reaction order with respect to O2

3.2.3 催化劑用量對環(huán)氧化速率影響

由圖7可見，隨催化劑用量增加，環(huán)氧化速率顯著增大。催化劑用量增加，提供更多甲烷氧化菌催化反應(yīng)，可吸附更多底物參與反應(yīng)，增加環(huán)氧化速率。此外，lnr與ln[catalyst]擬合直線具有良好線性關(guān)系R2=0.9906（見圖8），斜率為0.5635。確定催化劑用量反應(yīng)級數(shù)為0.5635。

3.2.4 環(huán)氧乙烷初始濃度對環(huán)氧化速率影響

由圖9可知，隨反應(yīng)體系中環(huán)氧乙烷初始濃度增加，乙烯環(huán)氧化速率降低。環(huán)氧乙烷濃度與環(huán)氧化速率負(fù)相關(guān)性主要是由于環(huán)氧乙烷對甲烷氧化菌MMO有抑制作用，MMO活力下降，導(dǎo)致環(huán)氧化速率降低。lnr與ln[epoxyethane]線性關(guān)系R2為0.9794（圖10），斜率為-1.0185。因此，環(huán)氧乙烷反應(yīng)級數(shù)為-1.0185。

圖7 催化劑用量對環(huán)氧化速率影響Fig.7Plot of ethylene concentration versus reaction time with different catalyst dosages

圖8 催化劑反應(yīng)級數(shù)擬合線Fig.8Plot of ln(initial epoxidation rate)versus ln(amount of catalyst)to determine the reaction order with respect to catalyst

圖9 環(huán)氧乙烷初始濃度對環(huán)氧化速率影響Fig.9Plot of ethylene concentration versus reaction time with different epoxyethane initial concentration

3.2.5 催化反應(yīng)活化能確定

溫度對乙烯環(huán)氧化速率影響如圖11所示，隨溫度升高環(huán)氧化速率隨之增加。溫度升高增加催化劑催化活力，但溫度過高導(dǎo)致甲烷氧化菌MMO失活。因此，反應(yīng)溫度低于40℃為宜。

通過已有速率常數(shù)及溫度與乙烯環(huán)氧化速率關(guān)系，對式（2）式兩邊同時(shí)取ln，得：

代入阿倫尼烏斯擬合線性方程圖12，求得活化能（Ea）及指前因子（A）：

圖10 環(huán)氧乙烷反應(yīng)級數(shù)擬合線Fig.10Plot of ln(initial epoxidation rate)versus ln(concentration of epoxyethane)to determine thereaction order with respect to epoxyethane

圖11 反應(yīng)溫度對環(huán)氧化速率影響Fig.11Plot of ethylene concentration versus reaction time with different reaction temperature

3.2.6 冪試數(shù)速率方程建立及驗(yàn)證

將上述試驗(yàn)測得各反應(yīng)物反應(yīng)級數(shù)及活化能代入式（2）中，得到乙烯環(huán)氧化反應(yīng)冪指數(shù)速率模型為：

根據(jù)式（4）計(jì)算環(huán)氧化速率，與實(shí)際測定值對比，結(jié)果如圖8所示。

對計(jì)算值與實(shí)測值擬合發(fā)現(xiàn)（圖13a），擬合程度較好，如殘差圖13b所示，殘差置信區(qū)間均包含零點(diǎn)，說明擬合反應(yīng)動力學(xué)模型能較好反映實(shí)際試驗(yàn)結(jié)果，可用于實(shí)際催化反應(yīng)參數(shù)預(yù)測。

圖12 阿倫尼烏斯擬合線Fig.12Arrhenius plot of ln(k)versus 1/T

圖13 計(jì)算值與實(shí)測值比較和殘差Fig.13Comparison of experimental and calculated initial epoxidation rates using power-law rate model

4 討論

4.1 內(nèi)外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響

Delidovich等將附著金活性炭作為催化劑催化葡萄糖氧化反應(yīng)，測定Weisz模型中各參數(shù)數(shù)值，對比有效因子Φ理論值和測定值，判斷內(nèi)擴(kuò)散不形成傳質(zhì)阻力[14]；Brink等研究固定化分枝桿菌細(xì)胞催化丙烯環(huán)氧化反應(yīng)內(nèi)外擴(kuò)散動力學(xué)模型，在假設(shè)反應(yīng)符合擬態(tài)單底物米氏動力學(xué)方程及忽略底物抑制前提下，分別測定固定化載體顆粒半徑、固定化細(xì)胞密度及相關(guān)動力學(xué)參數(shù)，根據(jù)Thiele方程計(jì)算有效因子η>0.85，該研究條件下底物內(nèi)擴(kuò)散是主要傳質(zhì)阻力[15]。本研究省略內(nèi)擴(kuò)散方程中各參數(shù)數(shù)值測定，通過Mears方程估算即可判斷內(nèi)擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響，本試驗(yàn)條件下可忽略內(nèi)擴(kuò)散作用，與Brink研究結(jié)果不一致原因是固定化載體類型、顆粒尺寸同及試驗(yàn)條件不同。

通過增加轉(zhuǎn)速可忽略外擴(kuò)散影響，固定化載體與體系液相界面處形成一層液膜，液膜厚度增加阻礙底物和產(chǎn)物擴(kuò)散，假設(shè)液膜厚度均一，液膜內(nèi)傳質(zhì)僅為分子擴(kuò)散，分子傳質(zhì)速率一定[16]，且與濃度梯度關(guān)系服從Fick第一定律，對定律作解微分方程并簡化后可知，增加轉(zhuǎn)速可降低液膜傳質(zhì)阻力，忽略外擴(kuò)散影響。

4.2 冪指數(shù)速率方程建立

固定化甲烷氧化菌催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)冪指數(shù)速率方程中，反應(yīng)各因素反應(yīng)級數(shù)為：乙烯0.6983、氧氣0.2715、環(huán)氧乙烷-1.0185、催化劑0.5635。反應(yīng)級數(shù)數(shù)值反映各因素對初始環(huán)氧化速率影響程度。由上述數(shù)據(jù)可知：乙烯、氧氣、催化劑初始濃度增加與初始環(huán)氧化速率呈正相關(guān)，對環(huán)氧化初始速率影響程度：乙烯>催化劑>氧氣。因此，乙烯初始濃度為該反應(yīng)控速步驟，與Hyman等[17]研究結(jié)果一致。環(huán)氧乙烷初始濃度與環(huán)氧化速率成負(fù)相關(guān)，可能由于環(huán)氧乙烷對甲烷氧化菌中MMO有抑制作用。Smith研究表明，環(huán)氧丙烷對MMO活力有抑制作用，結(jié)合MMO催化位點(diǎn)，特別是MMOH[18]。環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷結(jié)構(gòu)相似，環(huán)氧乙烷環(huán)狀結(jié)構(gòu)中氧拉伸使碳原子更具有親電性，更易與MMO活性部位中親核氨基酸殘基結(jié)合，可能是環(huán)氧乙烷對MMO活力抑制作用原因。

通過阿倫尼烏斯方程擬和線得到該反應(yīng)活化能為22.575 kJ·mol-1，Jankowiak等[19]以純銀或銅-銀復(fù)合物作為催化劑催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)，各反應(yīng)條件下反應(yīng)活化能為1～20.7 kcal·mol-1（即4.18～ 86.53 kJ·mol-1）。較低活化能說明固定化甲烷氧化菌細(xì)胞具有良好催化活性，該催化劑具有應(yīng)用于生物法合成環(huán)氧乙烷潛力。

5 結(jié)論

為建立適合固定化甲烷氧化菌催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)動力學(xué)模型，本研究先判斷反應(yīng)體系傳質(zhì)擴(kuò)散阻力對環(huán)氧化速率影響。通過Mears方程估算內(nèi)部傳質(zhì)擴(kuò)散阻力，本試驗(yàn)條件下可排除內(nèi)擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響。通過增加轉(zhuǎn)速至200 r·min-1，減小液膜阻力，排除外擴(kuò)散對環(huán)氧化速率影響。在上述結(jié)論基礎(chǔ)上，通過控制單一變量方法，得到反應(yīng)各因素反應(yīng)級數(shù)及活化能，建立冪指數(shù)速率方程，該方程可體現(xiàn)各因素對環(huán)氧化速率影響，預(yù)測初始環(huán)氧化速率具體數(shù)值，為進(jìn)一步提高固定化甲烷氧化菌催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)轉(zhuǎn)化率和反應(yīng)器生產(chǎn)能力提供理論依據(jù)。

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Kinetics of ethylene epoxidation by immobilization of whole cells of Methylosinus trichosporiumIMV 3011

XU Ning1,2,XIN Jiaying1,WANG Yan1,DOU Boxin1,XIA Chungu3(1.Key Laboratory for Food Science and Engineering,Harbin University of Commerce,Harbin 150076,China;2.School of Food Science,Northeast Agricultural University, Harbin 150030,China;3.State Key Laboratory for Oxo Synthesis and Selective Oxidation, Lanzhou Institute of Chemical Physics,Chinese Academy of Sciences,Lanzhou 730030,China)

Immobilization ofMethylosinus trichosporiumIMV 3011 on granular activated carbon was carried out to develop heterogeneous biocatalyst for ethylene epoxidation reaction.In this paper, effects of internal and external mass diffusion resistances on rate of ethylene epoxidation were studied. Then,power-exponent equation of ethylene epoxidation reaction was established by single variable method.Results showed that internal mass diffusion resistance was ignored based on verification of Mears equation.Moreover,external mass diffusion resistance was ignored when rotation speed was over 200 r·min-1.The orders of power-exponent equation with respect to ethylene,oxygen,epoxyethane and catalyst were found to be 0.6983,0.2715,-1.0185 and 0.5635,respectively,with an activationenergy of 22.575 kJ·mol-1from an Arrhenius plot.As shown,there is a close similarity between the observed rates and the calculated rates with acceptable deviation.The power-exponent equation will allow for the prediction of rate of ethylene epoxidation.

immobilization;ethylene;epoxidation;power-law kinetic model

TS255.1

A

1005-9369（2017）02-0052-07

2016-12-16

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（21073050、21573055）

徐寧（1981-），女，講師，博士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail:xuningneau@163.com

*通訊作者：辛嘉英，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樯锎呋?。E-mail:xinjiayingvip@163.com

時(shí)間2017-3-7 16:15:52[URL]http://kns.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20170307.1615.014.html

徐寧,辛嘉英,王艷,等.固定化甲烷氧化菌細(xì)胞催化乙烯環(huán)氧化反應(yīng)動力學(xué)研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(2):52-58.

Xu Ning,Xin Jiaying,Wang Yan,et al.Kinetics of ethylene epoxidation by immobilization of whole cells ofMethylosinus trichosporiumIMV 3011[J].Journal of Northeast Agricultural University,2017,48(2):52-58.(in Chinese with English abstract)