楊方凝,王利軍,劉 毅,代俊利,王 翔,宋 冀*
(1.承德醫(yī)學(xué)院,河北 承德 067000;2.北京起因科技有限公司,北京 100000;3.承德市中心醫(yī)院,河北 承德 067300)
外周血cfDNA是指游離在外周血中的脫氧核苷酸,健康人血液中的cfDNA主要來(lái)源于凋亡細(xì)胞,而腫瘤患者體內(nèi)的來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的cfDNA也會(huì)被釋放到血液中[1]。有實(shí)驗(yàn)觀察,惡性腫瘤患者外周血cfDNA濃度水平高于正常人,其中長(zhǎng)片段DNA濃度具有代表意義,且具有腫瘤細(xì)胞的特征,認(rèn)為其濃度和長(zhǎng)度的異常改變與腫瘤密切相關(guān)[2-4]。本研究針對(duì)女性乳腺癌患者術(shù)前與術(shù)后、同期乳腺良性腫瘤患者術(shù)前及健康人,分別檢測(cè)其外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA濃度,以研究其在乳腺癌診療中的臨床價(jià)值。
2016年10月~2017年3月承德市中心醫(yī)院收治的女性原發(fā)性乳腺癌患者、乳腺良性腫瘤患者及非患腫瘤健康人的血液樣本各33例(經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批并獲得通過(guò)),實(shí)驗(yàn)組術(shù)前1天、術(shù)后14~21天采血,對(duì)照1組術(shù)前1天采血,對(duì)照2組同期采血。
實(shí)驗(yàn)組(1)行手術(shù)治療的女性原發(fā)性乳腺癌患者;(2)病理診斷明確;(3)無(wú)外傷、急性炎癥、劇烈運(yùn)動(dòng)后、脫水、女性處于月經(jīng)期等情況。對(duì)照1組(1)與實(shí)驗(yàn)組同期行手術(shù)治療的女性乳腺良性腫瘤患者;(2)病理診斷明確;(3)無(wú)外傷、急性炎癥、劇烈運(yùn)動(dòng)后、脫水、女性處于月經(jīng)期等情況;(4)與實(shí)驗(yàn)組年齡、性別等基線資料具有可比性。對(duì)照2組(1)與實(shí)驗(yàn)組同期做健康體檢的女性健康人;(2)體檢后至少3個(gè)月內(nèi)未發(fā)現(xiàn)腫瘤疾患;(3)無(wú)外傷、急性炎癥、劇烈運(yùn)動(dòng)后、脫水、女性處于月經(jīng)期等情況;(4)與實(shí)驗(yàn)組年齡、性別等基線資料具有可比性。以上人員均自愿入組,簽署知情同意書(shū)。
(1)妊娠期婦女;(2)患系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病的患者;(3)接受器官移植的患者(包括骨髓);(4)腦卒中;(5)行新輔助化療及內(nèi)分泌治療患者。
用EDTA抗凝管收納采集的血液,1600 rpm/min的速度離心10分鐘進(jìn)行血漿分離。以血漿直接作為擴(kuò)增模板。QPCR反應(yīng)程序:預(yù)變性,95℃,1分鐘;變性,95℃,8秒;退火/延伸 60℃,15秒;變性,退火/延伸,35個(gè)循環(huán)。
應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理,計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)(%)表示,采用x2檢驗(yàn),計(jì)量資料以“±s”表示,采用t檢驗(yàn),以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
表1 實(shí)驗(yàn)組患者基本資料
表2 實(shí)驗(yàn)組術(shù)前與對(duì)照1組及對(duì)照2組外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA片段濃度差異比較
表3 實(shí)驗(yàn)組術(shù)前與術(shù)后外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA片段濃度差異的自身比較
表4 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后與對(duì)照1組、對(duì)照2組外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA濃度差異比較
據(jù)本研究的結(jié)果推斷,血漿cfDNA及長(zhǎng)片段DNA的定量檢測(cè)在鑒別乳腺癌、乳腺良性腫瘤中有一定參考價(jià)值,且動(dòng)態(tài)反映腫瘤的負(fù)荷,臨床上可能有助于輔助乳腺癌診斷、療效評(píng)估、療后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。
有研究發(fā)現(xiàn),部分惡性腫瘤患者外周血中cfDNA水平增高與腫瘤相關(guān)[5]。目前認(rèn)為惡性腫瘤細(xì)胞DNA進(jìn)入外周血循環(huán)主要有兩種途徑:一是腫瘤組織中的腫瘤細(xì)胞脫落進(jìn)入外周循環(huán)血液釋放出核酸;二是腫瘤細(xì)胞可能在異常增殖過(guò)程中自主釋放出DNA進(jìn)入血液循環(huán) 。另有研究表明,腫瘤細(xì)胞內(nèi)的DNA是通過(guò)胞外囊泡的形式到細(xì)胞外的[6]。本研究針對(duì)女性乳腺癌患者手術(shù)前后、乳腺良性腫瘤患者術(shù)前及健康女性,分別作外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA濃度的定量檢測(cè),發(fā)現(xiàn)女性乳腺癌患者術(shù)前的外周血cfDNA水平,明顯高于女性乳腺良性腫物患者及健康人群,因此,檢測(cè)外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA濃度,可能有助于輔助乳腺癌診斷、療效評(píng)估、療后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。但目前尚存一些問(wèn)題:一是此研究尚處于實(shí)驗(yàn)階段,需加大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證;二是檢測(cè)方法及儀器的不同,外周血cfDNA及長(zhǎng)片段DNA片段濃度的參考值不能統(tǒng)一;三是還需與現(xiàn)有的其他腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行對(duì)照,進(jìn)一步驗(yàn)證其單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用的臨床價(jià)值。
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