沈嫣婧 齊 艷 樓正青

浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

黃連解毒湯對(duì)腹透患者感染病原菌的作用研究*

沈嫣婧 齊 艷 樓正青

浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

目的：研究黃連解毒湯對(duì)腹透患者感染的病原菌的作用。方法：對(duì)腹透患者感染的病原菌進(jìn)行鑒定和藥敏分析，采用連續(xù)倍比試管稀釋法測(cè)定黃連解毒湯對(duì)腹透液中常見病原菌的最小抑菌濃度（MIC），結(jié)合抗菌藥物的耐藥情況為臨床用藥提供參考依據(jù)。結(jié)果：送檢的208例腹膜透析液中共檢出病原菌59株，其中革蘭陽(yáng)性球菌占69.5%，對(duì)喹諾酮類敏感性較高；革蘭陰性桿菌占23.7%，對(duì)三代頭孢菌素、碳青霉烯類和喹諾酮類敏感性較高。黃連解毒湯對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為250mg/ml，對(duì)表皮葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌、腸球菌和大腸埃希菌的MIC均大于1000mg/ml。結(jié)論：黃連解毒湯在體外對(duì)腹膜透析患者感染的金黃色葡萄球菌有顯著的抗菌活性。

黃連解毒湯 腹透感染 病原菌 耐藥性

細(xì)菌的耐藥性和抗生素的副作用嚴(yán)重困擾著醫(yī)藥學(xué)界，單靠單一化學(xué)藥物治療目前已無法解決這一難題。中藥在治療細(xì)菌性感染疾病具有副作用小、細(xì)菌耐藥性較少等優(yōu)勢(shì)，越來越受到人們的重視。黃連解毒湯具有清熱解毒之功效，臨床常用于治療敗血癥、膿毒血癥、肺炎等[1]，在腹膜透析相關(guān)感染中的作用研究較少。筆者探討黃連解毒湯對(duì)腹透感染常見病原菌的作用，以期對(duì)推動(dòng)抗菌中藥的研究和開發(fā)提供幫助。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源:選取杭州市中醫(yī)院腎內(nèi)科2015年5月至2016年4月就診治療的腹膜透析患者208例，年齡在20～80歲。

1.2 標(biāo)本處理:由腎內(nèi)科醫(yī)師無菌操作抽取透析液8～10ml，分別注入需氧瓶和厭氧瓶中，送微生物室。收到標(biāo)本后立即放入全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中進(jìn)行培養(yǎng)，若標(biāo)本陽(yáng)性則儀器自動(dòng)報(bào)警，后轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板或厭氧平板中進(jìn)行培養(yǎng)鑒定。若培養(yǎng)5天未報(bào)警，則表示該標(biāo)本無細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)。

1.3 病原菌鑒定和藥敏試驗(yàn):嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行操作。應(yīng)用法國(guó)生物梅里埃公司Vitek-2鑒定儀及配套鑒定卡進(jìn)行菌種鑒定，采用K-B法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、金黃色葡萄球菌（ATCC25923）和糞腸球菌（ATCC29212），均由浙江省臨檢中心提供。

1.4 黃連解毒湯的制備:分別稱取中藥飲片黃連、黃芩、黃柏和梔子9g、6g、6g、9g（質(zhì)量比為3∶2∶2∶3）混合，加10倍量純化水浸泡30min，煎煮60min，8層紗布濾過，藥渣再加5倍純化水煎煮60min，8層紗布濾過，將兩次煎煮濾液合并，離心后濃縮為10ml，即每毫升濃縮液相當(dāng)于原生藥3g。將濃縮液作為黃連解毒湯儲(chǔ)備液置100℃，20min飽和蒸汽高壓滅菌后，4℃保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋至適宜濃度。

1.5 供試菌液的制備:將培養(yǎng)陽(yáng)性的透析液（實(shí)驗(yàn)菌）純化后接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)24h，菌液用3ml營(yíng)養(yǎng)肉湯校正濃度至0.5cfu，作為供試菌液。

1.6 抗菌作用檢測(cè):采用連續(xù)倍比試管稀釋法，取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基配制好后，分裝于8根試管中并編號(hào)。1號(hào)試管加入4ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，2～8號(hào)試管每管均加3ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，于121℃，15min高壓滅菌后備用。取黃連解毒湯2ml加入1號(hào)試管中充分搖勻，濃度為1000mg/ml。從1號(hào)試管中吸取3ml藥液置2號(hào)試管中充分混勻。3～6號(hào)試管采用該法依次倍比稀釋1/4、1/8、1/16、1/32，使1～6號(hào)試管藥液濃度依次為1000、500、250、125、62.5、31.25mg/ml；然后每根試管加入0.3ml供試菌液。同時(shí)，7號(hào)試管加入0.3ml滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯作為空白對(duì)照組，8號(hào)試管加入0.3ml供試菌液作為陽(yáng)性對(duì)照組。將1～8號(hào)試管充分搖勻后，于35℃孵育16～24小時(shí)。以在試管內(nèi)完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為最小抑菌濃度（MIC）。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分布和構(gòu)成:208例送檢標(biāo)本中陽(yáng)性標(biāo)本為52例，陽(yáng)性率為25.0%。其中革蘭陽(yáng)性球菌41例占69.5%，革蘭陰性桿菌14例占23.7%。所分離的細(xì)菌主要為革蘭陽(yáng)性球菌，尤以凝固酶陰性葡萄球菌為主占32.2%，其次為鏈球菌屬、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌。見表1。

表1 病原菌分布和構(gòu)成

表2 腹透液分離的59株病原菌耐藥率

表3 腹透液中葡萄球菌屬的耐藥情況

2.2 病原菌的耐藥性分析:表2、3顯示，腹透液中的革蘭陽(yáng)性球菌對(duì)喹諾酮類敏感性較高，革蘭陰性桿菌對(duì)三代頭孢菌素、碳青霉烯類、喹諾酮類敏感性較高。凝固酶陰性葡萄球菌的檢測(cè)株數(shù)和耐藥株數(shù)均高于金黃色葡萄球菌，兩者均對(duì)抗菌藥物多藥耐藥。

2.3 黃連解毒湯的抗菌試驗(yàn)結(jié)果:除對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為250mg/ml外，其余均大于1000mg/ml?？梢婞S連解毒湯在體外對(duì)腹膜透析患者感染的金黃色葡萄球菌具有顯著的抗菌活性。

3 討論

中藥及其復(fù)方制劑的抗菌作用不僅體現(xiàn)在方劑有效成分對(duì)細(xì)菌的直接抑制,同時(shí)還表現(xiàn)在方劑中各味藥多種成分相互作用的綜合效應(yīng)上[2]。黃連解毒湯中黃連、黃芩、黃柏、梔子均性寒味苦，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效。四藥聯(lián)合，協(xié)同作用更強(qiáng)。據(jù)報(bào)道[3]，黃連和黃芩在體外具有明顯的抑菌作用，可能與增強(qiáng)白細(xì)胞及肝網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力有關(guān)；黃柏對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，其抗菌原理主要為抑制細(xì)菌的呼吸和RNA的合成。本研究發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯對(duì)金黃色葡萄球菌具有顯著的抗菌活性。

本研究中感染率最高的為凝固酶陰性葡萄球菌、鏈球菌屬和腸球菌屬，均為人體的正常菌群，可能與腹膜透析侵入性操作有關(guān)。腹腔內(nèi)置管作為異物置入后，破壞了原有密閉的腹膜腔內(nèi)環(huán)境，加之透析患者體內(nèi)多種免疫功能減退，使人體的正常寄生菌乘虛而入造成感染。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，任何疾病的發(fā)生發(fā)展過程都是致病因素作用于人體，引起正邪斗爭(zhēng)，導(dǎo)致陰陽(yáng)氣血偏盛偏衰或臟腑經(jīng)絡(luò)機(jī)能失常的結(jié)果。故中藥的治療作用主要是扶正驅(qū)邪、消除病因、糾正紊亂的臟腑氣機(jī)及陰陽(yáng)氣血的偏盛偏衰現(xiàn)象，恢復(fù)臟腑經(jīng)絡(luò)的正常生理功能，達(dá)到治愈疾病的目的。由于中藥及其復(fù)方制劑成分復(fù)雜多樣,所以不能單純從體外抑菌、殺菌試驗(yàn)的效果來評(píng)價(jià)中藥在體內(nèi)的作用。因此，黃連解毒湯對(duì)金黃色葡萄球菌的作用機(jī)制、在腹透感染患者體內(nèi)是否發(fā)揮抗感染作用及其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

[1]張鵬暉,張建亭.黃連解毒湯藥理作用研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)雜志,2012,47(6):458-460.

[2]劉云寧,李小鳳,班旭霞,等.中藥抗菌成分及其抗菌機(jī)制的研究進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2015,8(8):1012-1017.

[3]徐濤.中藥黃柏的現(xiàn)代藥理作用研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥咨訊,2010,34(2):111.

2016-08-18

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目質(zhì)粒介導(dǎo)產(chǎn)KPC酶大腸埃希菌的克隆流行及傳播機(jī)制研究，編號(hào)：81301490