謝英娜

（遼寧省沈陽市第九人民醫(yī)院病理室，遼寧 沈陽 110024）

甲狀腺乳頭狀癌中ret癌基因的表達(dá)

謝英娜

（遼寧省沈陽市第九人民醫(yī)院病理室，遼寧 沈陽 110024）

目的觀察研究人類甲狀腺乳頭狀癌中ret癌基因的表達(dá)及其意義。方法選取本院2010年3月至2016年6月近6年腫瘤科收治的43例甲狀腺乳頭狀癌確診患者（乳頭狀癌組）及其癌旁正常組織（對(duì)照組），選取同期30例甲狀腺濾泡型癌（濾泡型癌組），29例甲狀腺腺瘤（腺瘤組）術(shù)后病理標(biāo)本（甲狀腺組織）。通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)兩組4組入選者中ret癌基因的活化情況。結(jié)果入選甲狀腺乳頭狀癌的43例患者中共出現(xiàn)14例（32.56%）ret/ptc癌基因呈陽性表達(dá)。濾泡型癌組、腺瘤組與對(duì)照組經(jīng)檢測(cè)ret/ptc癌基因均呈陰性表達(dá)。ret/ptc癌基因呈陽性表達(dá)的患者平均年齡顯著小于ret/ptc癌基因呈陰性表達(dá)的患者（P<0.05）。結(jié)論甲狀腺乳頭狀癌與ret癌基因的活化表達(dá)有著重要聯(lián)系，ret癌基因的活化可能與該病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。且ret/ptc癌基因呈陽性平均年齡較小，其腫瘤呈現(xiàn)的體積較小發(fā)展程度較輕，其腫瘤組織細(xì)胞分裂繁殖能力較弱，經(jīng)治療患者遠(yuǎn)期預(yù)后能力較強(qiáng)，ret癌基因的活化表達(dá)可成為判定患者甲狀腺乳頭狀癌的生物學(xué)行為指標(biāo)。

ret基因；表達(dá)；ptc基因；甲狀腺腫瘤；甲狀腺乳頭狀癌

近年來，國外專家研究稱甲狀腺乳頭狀癌患者的癌細(xì)胞中多會(huì)有ret癌基因活化表達(dá)，該形式被命名為ret/ptc癌基因[1]。因此本次實(shí)驗(yàn)本院選取2010年3月至2016年6月近6年腫瘤科收治的43例甲狀腺乳頭狀癌確診患者及其癌旁正常組織，選取同期30例甲狀腺濾泡型癌，29例甲狀腺腺瘤的術(shù)后病理標(biāo)本，通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)兩組4組入選者中ret癌基因的活化情況。現(xiàn)進(jìn)行如下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取本院2010年3月至2016年6月近6年腫瘤科收治的43例甲狀腺乳頭狀癌確診患者（乳頭狀癌組）及其癌旁正常組織（對(duì)照組），選取同期30例甲狀腺濾泡型癌（濾泡型癌組），29例甲狀腺腺瘤（腺瘤組）術(shù)后病理標(biāo)本（甲狀腺組織）。4組患者在性別、年齡、病程等一般資料方面均沒有顯著性差異（P>0.05），因而具有可比性。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：①患者的確診均為術(shù)后病理標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②所有患者的檢查資料、術(shù)后隨訪資料完整；③手術(shù)治療前未接受放化療、免疫治療等；④研究對(duì)象了解本研究的目的、意義并簽訂知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)[3]：①手術(shù)前使用放療或者化療治療的患者；②合并其他部位原發(fā)性腫瘤的患者；③病歷及隨訪資料不完整的患者。

1.3 方法：TaqDNA聚合酶、引物、Trizol試劑、RT試劑盒、蛋白酶K由南京諾唯贊生物科技有限公司提供。

RNA提取：甲狀腺乳頭狀癌、癌旁正常組織、甲狀腺濾泡型癌、甲狀腺腺瘤組織分別放入離心管中，其中裂解液500 μL并使用高速分散器（湖北康龍電子科技有限責(zé)任公司）將組織粉碎，放置一段時(shí)間后吸取上清液放入其他離心管里（在冰浴中進(jìn)行），加入3 mol/L MaAC、氯仿、飽和酚并混勻，靜置15 min，12000 r/min離心10 min。吸取上清液放入其他離心管(內(nèi)置異丙醇)，-20 ℃下過夜。第2天離心后棄上清液，加入0.5 mL異丙醇及裂解液，-20 ℃下靜置1 h。離心后棄上清液，加入乙醇靜置在空氣中直至干燥。加入DEPC水測(cè)定其樣品濃度。

RT反應(yīng)條件：42 ℃30 min、99 ℃5 min、5 ℃5 min，反應(yīng)體積為10 μL。PCR反應(yīng)體積為50 μL，設(shè)空白對(duì)照。

PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性2 min后，94 ℃ 30 s、59 ℃ 30 s、72 ℃1 min共27個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min。

反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳后經(jīng)電泳凝膠成像分析系統(tǒng)采集圖像，測(cè)定灰度值[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：利用統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件SPSS13.0進(jìn)行處理分析，采用卡方檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行對(duì)比分析，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05來顯示結(jié)果差異性顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ret/ptc癌基因呈陽性表達(dá)患者中組織學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)的有9例（20.93%），組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的有2例（4.65%）。見表1。

表1 四組入選者ret/ptc癌基因表達(dá)比較

2.2 乳頭狀癌組經(jīng)臨床資料研究得ret/ptc癌基因呈陽性表達(dá)的患者平均年齡（27.68±5.36）歲，ret/ptc癌基因呈陰性表達(dá)的患者平均年齡（44.37±13.93）歲。呈陽性患者平均年齡顯著小于陰性表達(dá)的患者（P<0.05）。呈陽性表達(dá)的患者腫瘤大小、性別、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移與呈陰性患者無顯著差異（P>0.05）。

3 討 論

經(jīng)諸多實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腫瘤的演進(jìn)、發(fā)生多由機(jī)體內(nèi)一連串的基因發(fā)生突變導(dǎo)致的，這些改變將極大破壞或影響正常細(xì)胞的調(diào)控、增生等機(jī)制。甲狀腺上皮性腫瘤由于其濾泡上皮發(fā)生病變，經(jīng)不同因素影響最終發(fā)展成為床生物學(xué)行為、表型等各不相同的腫瘤。本次實(shí)驗(yàn)中乳頭狀癌多為多灶性，經(jīng)由淋巴道轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，而濾泡性癌多為單灶性，其多經(jīng)由侵襲血管完成轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，上述兩種癌細(xì)胞具備不一樣的生物學(xué)特征，不同的甲狀腺腫瘤演進(jìn)、發(fā)生多由機(jī)體內(nèi)一連串的對(duì)應(yīng)特定基因發(fā)生突變導(dǎo)致的[4]。

而本次實(shí)驗(yàn)研究甲狀腺乳頭狀癌與ret癌基因活化表達(dá)間的聯(lián)系。ret癌基因在10q11.2區(qū)，外顯子共21個(gè)，其主要表達(dá)合成酪氨酸蛋白激酶受體，該受體能通過胞膜[5]。其增殖分化調(diào)節(jié)主要由胞外信號(hào)傳導(dǎo)來調(diào)控。當(dāng)10號(hào)染色體的H4基因與RET癌基因融合發(fā)生突變后形成ret/ptc癌基因，其表達(dá)合成的蛋白延長ret癌基因合成的受體激活時(shí)長，下游信號(hào)將這一指令進(jìn)行傳導(dǎo)，導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，經(jīng)多方證實(shí)其幾乎只在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)。與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

綜上所述，甲狀腺乳頭狀癌與ret癌基因的活化表達(dá)有著重要聯(lián)系，ret癌基因的活化可能與該病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。且ret/ptc癌基因呈陽性平均年齡較小，其腫瘤呈現(xiàn)的體積較小發(fā)展程度較輕，其腫瘤組織細(xì)胞分裂繁殖能力較弱，經(jīng)治療患者遠(yuǎn)期預(yù)后能力較強(qiáng)，ret癌基因的活化表達(dá)可成為判定患者甲狀腺乳頭狀癌的生物學(xué)行為指標(biāo)。

[1] 趙堅(jiān)強(qiáng),郭良,戚曉平,等.RET原癌基因p.C618Y突變的家族性甲狀腺髓樣癌一家系的臨床診治分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2013,93 (6):440-444.

[2] 潘瑞蓉,張海鳴,王濟(jì)芳,等.RET/PTC3在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)[J].廣東醫(yī)學(xué),2016,37(4):577-579.

[3] 葉艷,武學(xué)潤,趙樹君,等.RET/PTC1重排和 BRAFV600E突變甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞系原位裸鼠模型比較[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2016,15(1):62-66.

[4] 俞靈鶯,馬麗珍,屠巧峰,等.熒光定量PCR檢測(cè)甲狀腺結(jié)節(jié)針吸細(xì)胞甲狀腺乳頭狀癌的原癌基因1,3的重排[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2014,30(10):830-833.

[5] 濮亞斌,李剛強(qiáng).甲狀腺乳頭狀癌組織中酪氨酸激酶受體第16外顯子基因突變情況及意義[J].山東醫(yī)藥,2014,48(7):22-23.

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