鮑小招 范廣民 吳忠明 陳振乾 吳忠標(biāo) 曾愛(ài)平 屈宏斐

(溫州醫(yī)學(xué)院附屬溫嶺市醫(yī)院泌尿外科，浙江 臺(tái)州 317500)

腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體在前列腺癌中的表達(dá)及意義

鮑小招 范廣民1吳忠明 陳振乾 吳忠標(biāo) 曾愛(ài)平2屈宏斐

(溫州醫(yī)學(xué)院附屬溫嶺市醫(yī)院泌尿外科，浙江 臺(tái)州 317500)

目的 探討腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體(TRAIL)在前列腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 取石蠟包埋的前列腺癌組織(前列腺癌組)和良性前列腺增生組織(良性前列腺增生組)各50例,免疫組化法測(cè)定兩組組織中TRAIL蛋白的表達(dá)。結(jié)果 前列腺癌組TRAIL蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于良性前列腺增生組(依次為：86.00% vs 66.00%；0.180±0.043 vs 0.128±0.021 OD值)(P<0.05或P<0.01)。前列腺癌組TRAIL蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度分別在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期之間、伴有和不伴有骨/淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(依次為：88.89% vs 84.38%，0.181±0.051 vs 0.179±0.029；89.47% vs 75.00%，0.182±0.044 vs 0.181±0.036)(均P>0.05)。結(jié)論 TRAIL在前列腺癌組織中表達(dá)增強(qiáng)，但與TMN分期、骨/淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，增強(qiáng)表達(dá)的TRAIL可能與前列腺組織的惡化有關(guān)。

前列腺癌；前列腺增生；腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體

前列腺癌在不同種族間存在差異，還受不同文化、社會(huì)、心理因素等影響〔1〕，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，受多基因和多因素的影響〔2〕，對(duì)其發(fā)病機(jī)制的研究一直是個(gè)熱點(diǎn)話題。以往不管是體內(nèi)試驗(yàn)還是體外試驗(yàn)都發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體(TRAIL)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有促凋亡作用，主要通過(guò)細(xì)胞表面的死亡受體(DR4和DR5)起作用〔3,4〕。目前已發(fā)現(xiàn)前列腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)與TRAIL的基因多肽性相關(guān),我國(guó)患者與TRAIL基因啟動(dòng)子區(qū)存在一個(gè)SNP位點(diǎn)(-716A/G)發(fā)生轉(zhuǎn)變有關(guān)〔5〕。近來(lái)報(bào)道TRAIL在前列腺癌中表達(dá)增加，血清前列腺癌特異性抗原濃度越高其表達(dá)強(qiáng)度越強(qiáng)，其受體R4還與前列腺癌的Gleason分級(jí)、前列腺癌特異性抗原再現(xiàn)及生存率降低有關(guān)〔6〕，但它的作用機(jī)制如何至今尚未完全闡明。本研究通過(guò)觀察TRAIL在前列腺癌中的表達(dá),探討TRAIL與前列腺癌生物學(xué)特征的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 病例選自臺(tái)州市各醫(yī)院2010年5月至2014年2月的前列腺癌(前列腺癌組)住院手術(shù)患者50例,年齡59～82平均71歲，標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理確診。并與良性前列腺增生患者50例(良性前列腺增生組)作對(duì)照,年齡53～81(平均69)歲,均經(jīng)尿道前列腺電切除術(shù)留取增生前列腺組織。兩組組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定保存，兩組患者的年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 試劑 抗人TRAIL多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)R&D公司(生產(chǎn)批號(hào)為BTE0512031)，工作濃度為1∶100。二抗羊抗多克隆抗體免疫組化試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)底物顯色劑均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司(生產(chǎn)批號(hào)：K132304G)。

1.3 免疫組化法檢測(cè)TRAIL蛋白的表達(dá) 采用SP法進(jìn)行檢測(cè),主要步驟如下:標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定、濃度梯度的乙醇脫水、石蠟包埋、4 μm厚度切片、脫蠟、抗原修復(fù),3%過(guò)氧化氫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,兔血清封閉,滴加一抗4℃過(guò)夜、二抗及鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶復(fù)合物,DAB 顯色、復(fù)染、封固。PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷 陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞為棕黃色，表達(dá)定位在細(xì)胞質(zhì)。每張切片于隨機(jī)選擇5 個(gè)視野(200 倍),細(xì)胞陽(yáng)性率計(jì)數(shù)方法為：無(wú)著色為(-)，<30%計(jì)為+，30%～70%計(jì)為，>70%計(jì)為；并對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞采用Image Pro-plus 5.1免疫組化圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度掃描來(lái)表達(dá)其平均吸光強(qiáng)度,取其平均值代表該片的吸光度(OD)值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 前列腺組織TRAIL蛋白的表達(dá)水平 免疫組化結(jié)果顯示,陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色，主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，兩組均有呈陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞。前列腺癌組TRAIL蛋白的陽(yáng)性率和平均吸光強(qiáng)度均顯著高于良性前列腺增生組(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表1、圖1。

圖1 TRAIL蛋白在不同前列腺組織中的 陽(yáng)性表達(dá)(DAB，×200)

2.2 TRAIL表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 前列腺癌組TRAIL的陽(yáng)性表達(dá)率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度在Ⅰ～Ⅱ期〔16例(88.89%)、0.181±0.051〕和Ⅲ～Ⅳ期之間〔27例(84.38%)、0.179±0.029)，χ2=0.20,P>0.05；t=0.079，P>0.05〕、伴有〔34例(89.47)%、0.182±0.044〕和不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間〔9例(75.00%)、0.181±0.036，χ2=1.59,P>0.05;t=0.065,P>0.05〕均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討 論

TRAIL是腫瘤壞死因子超家族成員之一，為Ⅱ型跨膜蛋白，在人體組織內(nèi)廣泛表達(dá)，具有很強(qiáng)的抗癌活性，能誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞死亡，對(duì)正常的細(xì)胞損傷卻很少。這種選擇性地對(duì)前列腺癌細(xì)胞促進(jìn)凋亡的作用機(jī)制比較復(fù)雜，可能為上調(diào)其受體DR5(TRAIL-R2)的表達(dá)和抑制Akt和胰島素樣生長(zhǎng)因子1等的途徑〔7,8〕。經(jīng)TRAIL治療后，使G2/M期細(xì)胞比例下調(diào)，G0/G1期細(xì)胞比例上升，細(xì)胞生長(zhǎng)周期停滯，凋亡率增加〔9〕。TRAIL還能通過(guò)增強(qiáng)自噬途經(jīng)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的死亡，起到保護(hù)機(jī)體自身的作用〔10〕。TRAIL促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能還能被雷公藤內(nèi)酯和衣霉素等得到增強(qiáng)〔11,12〕。TRAIL治療被預(yù)期成為一種非常有效的治療癌癥的方法，但也存在TRAIL抵抗的問(wèn)題〔13〕。但目前TRAIL 表達(dá)水平與前列腺癌分化、TNM分期及腫瘤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系尚未明確，國(guó)內(nèi)在此方面報(bào)道較少。與TRAIL相結(jié)合的受體有5種，包括誘騙受體和死亡受體各2種。有研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中DcR1 的表達(dá)水平明顯低于前列腺增生組織，且在高分化、中分化、低分化前列腺癌組織中依次降低；而DR4、DR5 受體的表達(dá)水平在前列腺癌組織與前列腺增生組織中無(wú)差異，且與前列腺癌的分化程度無(wú)關(guān)〔14〕；但也有學(xué)者認(rèn)為DR4、DR5、DcR1的表達(dá)率與前列腺癌的各病理分級(jí)、臨床分期之間無(wú)關(guān)〔15〕。TRAIL在前列腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用尚處在爭(zhēng)論之中。因此，研究TRAIL與前列腺癌臨床特征的關(guān)系，對(duì)前列腺癌防治有一定的理論指導(dǎo)意義。

本研究提示TRAIL在前列腺癌組織中過(guò)度表達(dá)，參與了前列腺增生的癌變過(guò)程。推測(cè)，隨著組織發(fā)生惡變，TRAIL促凋亡作用也反應(yīng)性地得到加強(qiáng)，以達(dá)到增強(qiáng)清除惡變細(xì)胞的能力，起到保護(hù)機(jī)體的作用。國(guó)內(nèi)相似的研究也發(fā)現(xiàn)，前列腺增生組織中TRAIL 弱呈陽(yáng)性免疫反應(yīng)，而在前列腺癌組織中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，癌組織的表達(dá)強(qiáng)度高于增生組織；TRAIL在癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度還與癌細(xì)胞的分化有關(guān)，高分化的前列腺腫瘤組織中TRAIL免疫反應(yīng)較強(qiáng),反之，低分化的前列腺癌組織免疫反應(yīng)較弱〔16〕，支持本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果。

本研究還發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織TRAIL的陽(yáng)性表達(dá)水平與TNM 分期無(wú)關(guān)，與骨/淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也無(wú)關(guān)。相似的研究也見(jiàn)于大腸腺癌組織TRAIL的表達(dá)，其陽(yáng)性率與腫瘤組織的浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移等無(wú)關(guān)〔17,18〕。它可能在腫瘤生物學(xué)行為方面扮演關(guān)鍵的角色，包括腫瘤細(xì)胞的增殖、移行、預(yù)后，控制TRAIL通路可能是抑制腫瘤進(jìn)展的有效策略〔19〕。

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〔2015-09-08修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

溫嶺市科技局基金資助項(xiàng)目(2010-1-53)

鮑小招(1967-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事泌尿外科學(xué)臨床研究。

R737.25

A

1005-9202(2017)05-1075-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.016

1 臺(tái)州市中心醫(yī)院病理科 2 溫州醫(yī)學(xué)院附屬溫嶺市醫(yī)院病理科