富國(guó)文 胡禮平 蘭志剛 樊月圓 趙桂英*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,云南昆明 650201; 2.昆明正大有限公司,云南昆明 650301)

微生物快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)飼料原料微生物的實(shí)踐

富國(guó)文1胡禮平2蘭志剛2樊月圓1趙桂英1*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,云南昆明 650201; 2.昆明正大有限公司,云南昆明 650301)

使用微生物快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)飼料主要原料中的微生物，并與微生物標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，微生物快速檢測(cè)試紙條與標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)結(jié)果差異不顯著。試驗(yàn)表明，微生物快速檢測(cè)試紙條可以用于飼料原料中的微生物的檢測(cè)。

微生物 快速檢測(cè)試紙條 飼料原料

食品安全關(guān)系到全國(guó)人民“舌尖上的安全”，在動(dòng)物性食品安全方面，吃上“放心肉”、“安全肉”成為迫切要求，而在保證動(dòng)物性食品安全的一系列環(huán)節(jié)中飼料安全是其中一個(gè)重要組成部分[1]。在飼料生產(chǎn)過(guò)程中，對(duì)原料微生物的檢測(cè)不可或缺。微生物可以使飼料發(fā)生腐敗變質(zhì)，降低營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，干擾動(dòng)物機(jī)體的正常生理功能，嚴(yán)重者會(huì)污染畜產(chǎn)品，引起動(dòng)物發(fā)病死亡，甚至導(dǎo)致人畜共患傳染病的傳播。為了降低微生物對(duì)飼料品質(zhì)的影響，在我國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中將微生物指標(biāo)作為一項(xiàng)重要內(nèi)容。生產(chǎn)中主要采用標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)飼料原料中的微生物，一般需要2～5 d才能完成，既費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。為了方便、快捷的對(duì)飼料原料中的微生物做出檢測(cè)，我們嘗試使用微生物快速檢測(cè)試紙條。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

飼料原料樣品于2016年10月21日采自昆明正大飼料有限公司原料庫(kù)。

1.1.2 儀器與試劑

電子天平、超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、微量移液槍、菌落計(jì)數(shù)器、三角瓶、試管、平皿；微生物快速檢測(cè)試紙條購(gòu)自廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司，其他均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 方法

1.2.1 飼料原料中細(xì)菌總數(shù)與沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)

用電子天平稱(chēng)取各樣品25 g，溶于225 ml滅菌生理鹽水中混合均勻，再取1 ml混懸液進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)謩e制成10-1、10-2、10-3、10-4和10-5濃度的混懸液。將快速檢測(cè)試紙條上層膜不干膠標(biāo)簽部分揭開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取1 ml樣品勻液，均勻滴加到各試紙條上，迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測(cè)試紙條，使樣品勻液均勻吸附，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，36±1℃，培養(yǎng)24 h計(jì)算菌落數(shù)，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.2.2 飼料原料中霉菌的快速檢測(cè)

用電子天平稱(chēng)取各樣品25 g，溶于225 ml滅菌蒸餾水中混合均勻，再取1 mL混懸液進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)謩e制成10-1、10-2、10-3和10-4濃度的混懸液。將快速檢測(cè)試紙條上層膜揭開(kāi)，用無(wú)菌吸管吸取1 ml樣品勻液，均勻滴加到試紙條上，迅速貼好上層膜，使樣品勻液均勻吸附，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，29±1℃，培養(yǎng)48 h計(jì)算霉菌數(shù)，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.2.3 飼料原料與飼料成品中微生物的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)

菌落總數(shù)的測(cè)定按GB/T 13093-2006進(jìn)行，沙門(mén)氏菌的測(cè)定按GB/T 13091-2002進(jìn)行，霉菌總數(shù)的測(cè)定按GB/T 13092-2006進(jìn)行。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

挑選適宜菌落數(shù)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)下各平板的菌落數(shù)后，求同一稀釋度各平板菌落數(shù)的平均值，再根據(jù)稀釋度求得各樣品的菌落數(shù)。用SPSS軟件分析菌落數(shù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料原料中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)結(jié)果

快速檢測(cè)試紙條和標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)飼料原料中細(xì)菌總數(shù)的結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，飼料原料中的細(xì)菌總數(shù)不應(yīng)超過(guò)2×106個(gè)/g。由表1中的檢測(cè)數(shù)據(jù)可以看出，本次檢測(cè)的飼料原料樣品均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，使用快速檢測(cè)試紙條和使用標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)的結(jié)果差異不顯著（P＞0.05 ）。

表1 飼料原料中細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)結(jié)果

2.2 飼料原料中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)結(jié)果

快速檢測(cè)試紙條和標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)飼料原料中沙門(mén)氏菌的結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，飼料原料中不得檢出沙門(mén)氏菌。本次檢測(cè)中，使用快速檢測(cè)試紙條在豆粕和羽毛粉中檢出沙門(mén)氏菌，而使用標(biāo)準(zhǔn)方法則沒(méi)有檢出，說(shuō)明在沙門(mén)氏菌的檢測(cè)方面，快速檢測(cè)試紙具有更好的檢測(cè)效果。

表2 飼料原料中沙門(mén)氏菌檢測(cè)結(jié)果

2.3 飼料原料中霉菌總數(shù)的檢測(cè)結(jié)果

快速檢測(cè)試紙條和標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)飼料原料中霉菌總數(shù)的結(jié)果見(jiàn)表3。根據(jù)《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，豆粕中霉菌總數(shù)不應(yīng)超過(guò)5×104個(gè)/g，乳清粉中霉菌總數(shù)不應(yīng)超過(guò)1×103個(gè)/ g，魚(yú)粉中霉菌總數(shù)不應(yīng)超過(guò)3×103個(gè)/g，肉骨粉中霉菌總數(shù)不應(yīng)超過(guò)2×104個(gè)/g。由表3中的檢測(cè)數(shù)據(jù)可以看出，本次檢測(cè)的飼料原料樣品均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，使用快速檢測(cè)試紙條和使用標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)的結(jié)果差異不顯著（P＞0.05 ）。

表3 飼料原料中霉菌總數(shù)檢測(cè)結(jié)果

3 討論

飼料原料中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是微生物生長(zhǎng)的天然培養(yǎng)基，一旦條件適合微生物就會(huì)大量繁殖，直接導(dǎo)致飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解，甚至?xí)陲暳现挟a(chǎn)生具有強(qiáng)烈毒性和致癌性的毒素，因此，加強(qiáng)對(duì)飼料原料中微生物的控制對(duì)確保飼料安全具有重要作用[2]。飼料中含有的微生物種類(lèi)繁多，主要包括細(xì)菌、霉菌、酵母菌等[3]，長(zhǎng)期以來(lái)主要采用微生物標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法檢測(cè)飼料原料中的微生物，但該方法存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的問(wèn)題，因此，近年來(lái)開(kāi)發(fā)快速檢測(cè)方法成了研究的熱點(diǎn)。生物傳感器法、基因芯片法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法、生物阻抗法、快速檢測(cè)儀法等多種檢測(cè)方法被相繼報(bào)道，但由于技術(shù)不成熟、對(duì)設(shè)備和技術(shù)要求高或價(jià)格昂貴等原因，均并未得到廣泛應(yīng)用[4]。微生物快速檢測(cè)試紙條具有使用方便、檢測(cè)速度快、檢測(cè)準(zhǔn)確度高和價(jià)格便宜等特點(diǎn)，在食品微生物的檢測(cè)方面被廣泛使用。

為了研究試紙條是否也適用于飼料原料中微生物的檢測(cè)，我們將微生物快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比。從對(duì)比的結(jié)果可以看出，微生物快速檢測(cè)試紙條與標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法檢測(cè)的結(jié)果差異不顯著，其中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)結(jié)果還要優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，也就是說(shuō)微生物快速檢測(cè)試紙條適用于飼料中微生物的快速檢測(cè)。

[1] 魏淑英.飼料中微生物衛(wèi)生指標(biāo)現(xiàn)狀的調(diào)查及控制[D].青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[2] 劉漢武.飼料安全與飼料微生物的檢測(cè)[J]. 內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟(jì)，2010，209（7）：68-70.

[3] 李亞莉，楊天龍，廖奇，等.淺談微生物對(duì)飼料的影響[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2016，（2）：57-59.

[4] 劉小芳，王衛(wèi)國(guó).飼料中有害微生物快速檢測(cè)技術(shù)新進(jìn)展[J].糧食與飼料工業(yè)，2014，（1）：35-38.

富國(guó)文（1980-），男，遼寧西豐人，碩士研究生學(xué)歷，云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，實(shí)驗(yàn)師，主要從事養(yǎng)豬生產(chǎn)方面研究工作。

趙桂英

云南省2015年工業(yè)發(fā)展專(zhuān)項(xiàng)資金中有關(guān)技術(shù)改造省級(jí)財(cái)政補(bǔ)貼項(xiàng)目