侯衛(wèi)華，李從洋，段尚林，胡學(xué)信，劉艷峰

(解放軍第152中心醫(yī)院病理科，河南 平頂山 467000)

腎上腺皮質(zhì)腺瘤組織中Calretinin、Melan-A和Inhibin α的表達(dá)及意義

侯衛(wèi)華，李從洋，段尚林，胡學(xué)信，劉艷峰

(解放軍第152中心醫(yī)院病理科，河南 平頂山 467000)

目的 探討Calretinin、Melan-A和Inhibin α在腎上腺皮質(zhì)腺瘤(ACA)組織中的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組化MaxVision兩步法檢測30例ACA、4例腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生、30例腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤(ABP)、8例正常腎上腺組織中Calretinin、Melan-A和Inhibin α的表達(dá)。結(jié)果 Calretinin陽性率：ACA 70.0%、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生100.0%、ABP 13.4%、正常腎上腺皮質(zhì)75.0%、正常腎上腺髓質(zhì)0.0%；Melan-A陽性率：ACA 53.3%、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生50.0%、ABP 3.3%、正常腎上腺皮質(zhì)25.0%、正常腎上腺髓質(zhì)0.0%；Inhibin α陽性率：ACA 83.3%、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生100.0%、ABP 6.7%、正常腎上腺皮質(zhì)100.0%、正常腎上腺髓質(zhì)0.0%。Calretinin、Melan-A和Inhibin α在ACA組織中的表達(dá)顯著高于ABP，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(0.05)。三者或兩兩聯(lián)合檢測敏感性最高的是Calretinin與Inhibin α(76.7%)、特異性最高的是Melan-A與Inhibin α(95.0%)、準(zhǔn)確性最高的是Calretinin與Inhibin α(83.3%)。結(jié)論 Calretinin、Melan-A和Inhibin α聯(lián)合檢測在ACA的診斷及其與ABP的鑒別診斷中具有重要價值。

腎上腺皮質(zhì)腺瘤；腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤；Calretinin；Melan-A；Inhibin α

腎上腺腫瘤按照組織起源可分為皮質(zhì)腫瘤和髓質(zhì)腫瘤，腎上腺皮質(zhì)腺瘤(adrenal cortical adenoma，ACA)是來源于腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞的良性上皮性腫瘤，發(fā)病率高，其臨床表現(xiàn)取決于腫瘤的激素分泌狀態(tài)，并據(jù)此分為產(chǎn)生皮質(zhì)醇的腺瘤、產(chǎn)生醛固酮的腺瘤、分泌雄激素和雌激素的腺瘤以及無能性腎上腺皮質(zhì)腺瘤，臨床通常依據(jù)臨床表現(xiàn)及相關(guān)激素水平檢測來確定腫瘤類型，但部分ACA是影像學(xué)體檢偶然間發(fā)現(xiàn)的無功能性腎上腺腫塊。該病的病變特點是瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的脂質(zhì)，形成巢、索狀并伴豐富的血管和竇隙樣結(jié)構(gòu)。腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤(adrenal benign phaeochromocytoma，ABP)是腎上腺髓質(zhì)起源的最常見良性腫瘤，瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)與ACA有很多相似之處，尤其是當(dāng)瘤細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)變性時，呈透明細(xì)胞外觀，貌似ACA，常給鑒別診斷帶來一定困難。傳統(tǒng)的組織化學(xué)技術(shù)包括嗜鉻反應(yīng)和銀染都不是特異性的，多已棄用。近年來隨著免疫組化的廣泛開展，用于腎上腺腫瘤的免疫標(biāo)記種類繁多，本研究旨在通過檢測腎上腺皮、髓質(zhì)組織中Calretinin、Melan-A和Inhibin α的表達(dá)，探討其在原發(fā)性ACA診斷及其與ABP的鑒別診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集2003年1月至2015年6月解放軍第152中心醫(yī)院病理科腎上腺手術(shù)存檔標(biāo)本72例，其中30例ACA、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生4例、ABP 30例、正常腎上腺8例(4例來自成人腎癌根治切除標(biāo)本之腎上腺，4例來自胎兒尸檢標(biāo)本之腎上腺)。30例ACA中，伴Cushing綜合征9例，伴Conn綜合征17例，無功能者4例；年齡10～70歲，平均年齡48歲；男11例，女19，男女比例為11.8；腫瘤最大直徑1～10 cm，平均3.8 cm。

1.2 免疫組化法檢測Calretinin、Melan-A和Inhibin α蛋白表達(dá) 所有標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片，免疫組化采用MaxVision兩步法，操作步驟按說明書進(jìn)行。使用已知陽性切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，對照切片與研究標(biāo)本在同一條件下進(jìn)行染色。結(jié)果判定：Calretinin(多克隆)、Melan-A(A103)和Inhibin α(R1)均表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。染色陽性是指細(xì)胞質(zhì)呈淺黃色至棕褐色。綜合判斷高倍鏡下陽性細(xì)胞百分率評分和染色強(qiáng)度評分。按染色強(qiáng)度評分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽性細(xì)胞百分率評分：高倍鏡下隨機(jī)選取5個視野陽性細(xì)胞數(shù)之平均數(shù)為該例陽性細(xì)胞數(shù)結(jié)果，≤5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度得分和陽性細(xì)胞百分率得分相加，0分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性(++)，6～7分為強(qiáng)陽性(+++)，后三者均按陽性計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用頻率或百分?jǐn)?shù)表示，并采用Fisher確切概率法進(jìn)行比較；按照臨床流行病學(xué)診斷試驗研究評價計算方法，對不同免疫標(biāo)志物單獨檢測和聯(lián)合檢測時的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性進(jìn)行計算和比較，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Calretinin、Melan-A和Inhibin α在不同腎上腺組織中的表達(dá) Calretinin陽性率：ACA 70.0%、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生100.0%、ABP 13.4%、正常腎上腺皮質(zhì)75.0%、正常腎上腺髓質(zhì)0.0%；Melan-A陽性率：ACA 53.3%、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生50.0%、ABP 3.3%、正常腎上腺皮質(zhì)25.0%、正常腎上腺髓質(zhì)0.0%；Inhibin α陽性率：ACA 83.3%、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生100.0%、ABP 6.7%、正常腎上腺皮質(zhì)100.0%、正常腎上腺髓質(zhì)0.0%。Calretinin、Melan-A和Inhibin α在ACA組織中的表達(dá)顯著高于ABP，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ACA組織中Calretinin、Melan-A和Inhibin α的陽性表達(dá)與患者的年齡、性別、直徑及有無產(chǎn)激素功能無關(guān)(P>0.05)。見表1、2。

2.2 不同免疫標(biāo)志物檢測的臨床診斷價值 Calretinin、Melan-A和Inhibin α單獨用于ACA和ABP的鑒別診斷時敏感性最高的是Inhibin α(83.3%)、特異性最高的是Melan-A(96.7%)、準(zhǔn)確性最高的是Inhibin α(88.3%)。三者或兩兩聯(lián)合檢測敏感性最高的是Calretinin與Inhibin α(76.7%)、特異性最高的是Melan-A與Inhibin α(95.0%)、準(zhǔn)確性最高的是Calretinin與Inhibin α(83.3%)。見表3。

3 討論

Calretinin是一種細(xì)胞內(nèi)鈣結(jié)合蛋白，屬于激動蛋白C超家族，該類蛋白的特征是具有EF手形結(jié)構(gòu)。一般用于標(biāo)記神經(jīng)、間皮及卵巢性索間質(zhì)的腫瘤，文獻(xiàn)報道腎上腺皮質(zhì)腫瘤也可表達(dá)Calretinin[1]。我們檢測了ACA、ABP、腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)狀增生及正常(成人及胎兒)腎上腺皮、髓質(zhì)中Calretinin多克隆抗體的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，Calretinin在ACA、結(jié)節(jié)狀增生和正常腎上腺皮質(zhì)中陽性率明顯增高，其中在ACA中陽性率為70.0%，以中等至強(qiáng)陽性為主，而30例ABP中僅4例弱陽性表達(dá)。與Jorda等[2]報道的較為一致。Zhang等[3]的研究結(jié)果顯示Calretinin在ACC組織中陽性率更高，ACA組織中陽性率為96%，腎上腺皮質(zhì)腺癌組織中陽性率為92%，而20例嗜鉻細(xì)胞瘤無一例陽性。因此，可以認(rèn)為免疫染色中等強(qiáng)度以上的陽性表達(dá)對ACA有很好的提示意義。同時研究表明Calretinin表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小及ACA功能狀態(tài)無關(guān)。

表1 Calretinin、Melan-A和Inhibin α在不同腎上腺組織中的表達(dá)

注：ABP與ACA之間免疫標(biāo)志物陽性率比較：Calretinin：χ2=19.817，P<0.001；Melan-A：χ2=18.468，P<0.001；Inhibin α：χ2=35.623，P<0.001

表2 Calretinin、Melan-A和Inhibin α的表達(dá)與ACA臨床病理特征的關(guān)系

表3 Calretinin、Melan-A和Inhibin α及其聯(lián)合檢測在ACA和ABP鑒別診斷中應(yīng)用價值 %(n/n)

Melan-A亦稱T細(xì)胞1識別的黑色素瘤抗原，是從黑色素瘤細(xì)胞系中克隆而來的，共培育出2種單克隆抗體，克隆號為A103和M2-7C10，Melan-A主要用于惡性黑色素瘤和伴有黑色素細(xì)胞分化的腫瘤的診斷和鑒別診斷，此外還常用于具有血管周上皮樣細(xì)胞分化的腫瘤和產(chǎn)類固醇激素的腫瘤，如Leydig細(xì)胞瘤、粒層細(xì)胞瘤的鑒別診斷。Busam等[4]報道了該抗體可與類固醇生成細(xì)胞上的抗原決定簇交叉反應(yīng)，其中在腎上腺皮質(zhì)和性腺A103呈陽性反應(yīng)，該研究顯示，A103表達(dá)于100.0%的腎上腺皮質(zhì)腫瘤，而嗜鉻細(xì)胞瘤和其他上皮性腫瘤均不表達(dá)。Loy等[5]對A103在腎上腺皮質(zhì)腫瘤鑒別診斷中的作用進(jìn)行了廣泛研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，21例腎上腺皮質(zhì)腫瘤均呈陽性(100.0%)，所有的轉(zhuǎn)移癌和嗜鉻細(xì)胞瘤均為陰性。而其他研究沒能達(dá)到100.0%的陽性率[4,6]。本研究結(jié)果顯示，Melan-A在ACA中陽性率僅為53.3%，但與在ABP中陽性率3.3%比較差異仍有統(tǒng)計學(xué)意義，且Melan-A特異性高達(dá)96.7%，可見Melan-A在ACA和ABP的鑒別診斷中仍具有較高實用價值。Melan-A另一種單克隆抗體M2-7C10在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中為陰性[4]，而且Coulie等[7]運用PCR技術(shù)在腎上腺皮質(zhì)中未檢測出Melan-A的mRNA。這些發(fā)現(xiàn)提示A103在腎上腺皮質(zhì)及皮質(zhì)腫瘤中的陽性反應(yīng)僅是一種交叉反應(yīng)，系非特異性染色，正是這種相對恒定的交叉反應(yīng)使其可用于診斷腎上腺皮質(zhì)腫瘤。此外，Melan-A表達(dá)與臨床病理特征間亦無相關(guān)性。

Inhibin α是一種二聚體蛋白質(zhì)激素，是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族中的成員，Inhibin α亞單位僅一種分子結(jié)構(gòu)，相對分子質(zhì)量為18 000，位于人染色體2q33。由睪丸的Sertoli細(xì)胞和卵巢粒層細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制垂體促性腺激素的產(chǎn)生和分泌。在許多性索-間質(zhì)腫瘤中表達(dá)，常用于卵巢顆粒細(xì)胞瘤和癌的鑒別診斷。近來研究[8-10]發(fā)現(xiàn)Inhibin α在正常腎上腺皮質(zhì)、皮質(zhì)結(jié)狀增生及皮質(zhì)腫瘤中均表達(dá)，并在腎上腺皮質(zhì)中檢測出Inhibin α的mRNA。本次研究顯示Inhibin α在腎上腺皮質(zhì)結(jié)節(jié)增生及正常腺上腺皮質(zhì)中陽性率均為100.0%，據(jù)我們觀察Inhibin α在正常腎上腺皮質(zhì)的表達(dá)以網(wǎng)狀帶和束狀帶內(nèi)側(cè)為主，球狀帶及束狀帶外側(cè)基本為陰性。在ACA中陽性率為83.3%，以中等強(qiáng)度為主，與Calretinin、Melan-A相比更為敏感，而在ABP中陽性率僅為6.7%，在正常腎上腺髓質(zhì)中均陰性，與國外文獻(xiàn)[6,11]新近報道的結(jié)果較為接近。Inhibin α在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中的表達(dá)與其功能狀態(tài)關(guān)系的研究結(jié)果報道不一，多認(rèn)為在伴有男性化和Cushing綜合征時表達(dá)最強(qiáng)，而伴發(fā)Conn綜合征與無功能者表達(dá)相對較低[10,12]。我們的研究顯示Inhibin α與患者年齡、性別、腫瘤大小以及ACA功能狀態(tài)無關(guān)，這與McCluggage等[13]的研究結(jié)果一致。此外，有研究顯示Inhibin基因R337H TP53突變可導(dǎo)致巴西人及其他某些種族人群腎上腺皮質(zhì)腫瘤的低外顯率分子缺陷。對46例巴西腎皮腺皮質(zhì)腫瘤患兒進(jìn)行研究，檢測其Inhibin基因的遺傳改變。結(jié)果這些患者中有39例是攜帶有Inhibin基因R337H TP53突變的雜合子[14]。表明該突變可能性兒童發(fā)生腎上腺皮質(zhì)腫瘤的因素之一。

綜上所述，Calretinin、Melan-A和Inhibin α在ACA中以細(xì)胞質(zhì)中等強(qiáng)度表達(dá)，具有較高敏感性、特異性及準(zhǔn)確性。當(dāng)遇見不典型病例或鑒別診斷有困難時，聯(lián)合檢測上述指標(biāo)，具有重要參考價值，有助于提高正確診斷率。

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Expressions and Significance of Calretinin,Melan-A and Inhibin α in the Adrenal Cortical Adenoma

HOU Weihua,LI Congyang,DUAN Shanglin,HU Xuexin,LIU Yanfeng

(DepartmentofPathology,the152thHospitalofPLA,Pingdingshan467000,China)

Objective To explore the expressions and significance of Calretinin,Melan-A and Inhibin α in the adrenal cortical adenoma (ACA).Methods The expressions of Calretinin,Melan-A and Inhibin α in 30 cases of ACA,4 cases of adrenal nodular hyperplasia,30 cases of adrenal benign phaeochromocytoma (ABP) and 8 cases of normal adrenal detected by immunohistochemical MaxVision method.Results Calretinin was positive in the 70.0% of ACA,100.0% of adrenal nodular hyperplasia,13.4% of ABP,75.0% of normal adrenal cortical and 0.0% of normal adrenal medulla; Melan-A was positive in the 53.3% of ACA,50.0% of adrenal nodular hyperplasia,3.3% of ABP,25.0% of normal adrenal cortical and 0.0% of normal adrenal medulla; Inhibin α was positive in the 83.3% of ACA,100.0% of adrenal nodular hyperplasia,6.7% of ABP,100.0% of normal adrenal cortical and 0.0% of normal adrenal medulla.The positive expression rate of Calretinin,Melan-A and Inhibin α protein in the ACA was significantly higher than that in the ABP,the difference was statistically significant (P<0.05).Of combined detection of three or two of them,the sensitivity was highest in the Calretinin and Inhibin α (76.7%),the specificity was highest in the Melan-A and Inhibin α (95.0%),the accuracy was highest in the Calretinin and Inhibin α (83.3%).Conclusion The combined detection of Calretinin,Melan-A and Inhibin α has the important practical value in the diagnosis of ACA and the differential diagnosis of ACA and ABP.

adrenal cortical adenoma; adrenal benign phaeochromocytoma; Calretinin; Melan-A; Inhibin α

侯衛(wèi)華(1979-)，男，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理研究。E-mail：hou.wh@163.com

10.3969/j.issn.1673-5412.2017.01.004

R736.6;R730.23

A

1673-5412(2017)01-0015-05

2016-03-13)