朱月+鐘尉+趙雪梅

摘要：用鄰二氮菲-Fe2+氧化法研究紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基的清除作用，并以多糖對(duì)羥自由基清除率為50%時(shí)所需的多糖濃度為比較參數(shù)，比較了幾種紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基的清除能力。研究結(jié)果表明，6種紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基均有清除作用，且呈明顯的量效關(guān)系。清除能力從大到小依次為品種紫冠玉珠、奧運(yùn)圣火、紫樓閃金、藍(lán)荷、青春、實(shí)生苗，且清除能力差異顯著。

關(guān)鍵詞：紫斑牡丹葉片；多糖；羥自由基；清除能力

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2016）11-0341-02

紫斑牡丹（Paeonia suffruticosa）別稱甘肅牡丹、西北牡丹，原產(chǎn)于中國(guó)，為毛茛科（Ranunculaceae）芍藥屬（Paeonia）植物，紫斑牡丹是中國(guó)牡丹家族中的重要成員之一，因花瓣基部有一個(gè)明顯的色斑得名。主要分布在甘肅、青海、陜西、寧夏等省（自治區(qū)）[1]。經(jīng)過多年的選育、引種、馴化，紫斑牡丹表現(xiàn)出良好的適應(yīng)性，在許多地區(qū)已引種栽培成功[1]。

2006年赤峰學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院趙雪梅副教授從甘肅省蘭州市引入11個(gè)紫斑牡丹品種，并帶領(lǐng)課題組成員圍繞引種栽培管理與生長(zhǎng)發(fā)育觀測(cè)[1]、抗寒性指標(biāo)測(cè)定[2-4]等方面展開了研究，取得了階段性成果。

紫斑牡丹不但具有很好的觀賞價(jià)值，而且隨著引種馴化不斷成功，種植栽培面積不斷擴(kuò)大，許多學(xué)者對(duì)紫斑牡丹的藥用、油用等方面也展開了研究。

目前關(guān)于紫斑牡丹葉片多糖清除羥自由基能力方面的研究報(bào)道較少。本研究以赤峰地區(qū)從甘肅省蘭州市引種的藍(lán)荷、奧運(yùn)圣火、紫冠玉珠、紫樓閃金、青春、實(shí)生苗6種紫斑牡丹葉片為研究材料，提取6種紫斑牡丹葉片多糖，采用鄰二氮菲-Fe2+氧化（Fenton法）體系，研究紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基的清除作用，比較不同品種紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基的清除能力，旨在為紫斑牡丹的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考，從而提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值、藥用價(jià)值、實(shí)用價(jià)值，促進(jìn)紫斑牡丹的產(chǎn)業(yè)化形成。

1 材料儀器與試劑

1.1 材料

紫斑牡丹葉片采摘自赤峰學(xué)院試驗(yàn)基地。

1.2 儀器與試劑

飛利浦迷你攪拌機(jī)、CS101-AB電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠），SHA-C恒溫水浴振蕩器、HHS數(shù)顯式恒溫水浴鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司），DD-5M離心機(jī)、RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），LRH-250A生化培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠），UV-9600紫外可見分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器有限公司）等。

無水乙醇、蒸餾水、苯酚、濃硫酸、葡萄糖、鄰二氮菲、鄰苯三酚、硫酸亞鐵、過氧化氫、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉等，以上試劑均為分析純。

2 方法

2.1 紫斑牡丹葉片多糖的提取[5-7]

將秋季采摘的紫斑牡丹葉片自然干燥，粉碎過篩，收集粉末烘至恒質(zhì)量。以去離子水為溶劑，按1 g ∶30 mL的料液比混勻，在70 ℃恒溫水浴振蕩器中以300 r/min振動(dòng)，浸提 30 min 后，離心，分別收集上清液。再濃縮上清液至一定體積，醇析濃縮的上清液，離心收集沉淀得多糖。

2.2 紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基清除作用的研究[5]

配制不同的紫斑牡丹葉片多糖溶液。按表1構(gòu)建鄰二氮菲-Fe2+氧化法反應(yīng)體系。并將各管混勻于37 ℃恒溫水浴鍋中水浴保溫1.5 h。反應(yīng)結(jié)束后，A1、A2管以空白管調(diào)零，A3管以相對(duì)應(yīng)濃度的樣品空白管調(diào)零，在536 nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度。根據(jù)公式計(jì)算每種紫斑牡丹葉片多糖在不同濃度下對(duì)羥自由基的清除率。計(jì)算清除率為50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的紫斑牡丹葉片多糖濃度。采用Excel和SPSS軟件進(jìn)行生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較每種紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基清除的趨勢(shì)及清除能力的差異性。

清除率=（A3管吸光度-A2管吸光度）/（A1管吸光度-A2管吸光度）×100%。

3 結(jié)果與分析

從圖1至圖6的曲線趨勢(shì)及表2的相關(guān)系數(shù)及清除率為50%時(shí)對(duì)應(yīng)的多糖濃度可知，每種紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基均有清除作用，并且在一定的濃度范圍內(nèi)，隨著紫斑牡丹葉片多糖濃度的增加，對(duì)羥自由基的清除率也增大，二者的相關(guān)系數(shù)均在0.9以上，線性關(guān)系較好。表明紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基清除能力的大小均與多糖的濃度有關(guān)，在一定濃度范圍內(nèi)呈明顯的量效關(guān)系。并且，當(dāng)清除率達(dá)到50%時(shí)，所需的6個(gè)品種紫斑牡丹葉片多糖濃度不同，表明各個(gè)品種紫斑牡丹葉片多糖對(duì)羥自由基的清除能力不同。清除能力從大到小依次為品種紫冠玉珠、奧運(yùn)圣火、紫樓閃金、藍(lán)荷、青春、實(shí)生苗，且品種間的清除能力存在顯著差異（表2、表3）。

紫斑牡丹葉片多糖能有效清除羥自由基，說明具有一定的抗氧化作用，在藥用、醫(yī)療保健等領(lǐng)域具有很好的開發(fā)利用前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙雪梅，成仿云，唐立紅，等. 赤峰地區(qū)紫斑牡丹的引種與抗寒性研究[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33（2）：84-90.

[2]唐立紅，趙雪梅，朱 月，等. 不同品種紫斑牡丹葉片結(jié)構(gòu)與耐寒性的關(guān)系比較[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：283-285.

[3]朱 月，趙雪梅，唐立紅. 低溫對(duì)幾種引種紫斑牡丹葉片可溶性糖含量的影響[J]. 北方園藝，2012（2）：62-64.

[4]唐立紅，趙雪梅，朱 月，等. 自然降溫過程中紫斑牡丹葉片結(jié)構(gòu)與抗寒性關(guān)系的研究[J]. 北方園藝，2012（11）：64-66.

[5]朱 月，畢曉丹，趙雪梅. “洛陽(yáng)紅”牡丹葉片多糖提取條件的研究[J]. 北方園藝，2011（4）：149-151.

[6]朱 月，段蕊曄，畢曉丹. 杏鮑菇多糖提取條件研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（5）：276-278.

[7]王搖琳，趙荷娟，魏?jiǎn)⑺?，? 雙孢蘑菇子實(shí)體多糖的響應(yīng)面法優(yōu)化提取及其純化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，30（5）：1139-1146.