祁小英 青海省樂都區(qū)畜牧獸醫(yī)站 810799

犬糞包蟲抗原檢測調(diào)查及防治

祁小英 青海省樂都區(qū)畜牧獸醫(yī)站 810799

包蟲病或稱棘球蚴病，是由帶科棘球?qū)俸团萸驅(qū)俳{蟲的中絳期（幼蟲）寄生于人和動物而引起的人畜共患寄生蟲病。為了了解樂都區(qū)犬包蟲病的感染情況，用酶聯(lián)免疫吸附試驗對驅(qū)蟲前后的260份犬糞進行了包蟲抗原檢測，檢出陽性4份，陽性率為1.54%。

犬糞；包蟲；酶聯(lián)免疫吸附試驗；防治

1 流行病學

據(jù)報道，包蟲病有棘球蚴病和泡球蚴病兩種，是嚴重危害人畜健康和妨礙畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展的常見地方病。我國是世界上包蟲病流行范圍最廣的國家之一，包蟲病流行區(qū)的面積占我國陸地面積的44.6%，受威脅人口約為8000萬。我國也是世界上包蟲病流行最嚴重的國家之一，按照國際有關(guān)組織的劃分屬于高流行區(qū)。而青海是畜間特高流行區(qū)，牛羊等家畜呈高度感染，犬、狐、狼等犬科動物均易感染棘球絳蟲，野生動物感染也較嚴重。

2 癥狀與病理變化

棘球蚴對人和動物的致病作用為機械性壓迫、毒素作用及過敏反應(yīng)等。癥狀的輕重取決于棘球蚴的大小、寄生的部位及數(shù)量。棘球蚴多寄生于動物的肝臟，其次為肺臟，機械性壓迫可使寄生部位周圍組織發(fā)生萎縮和功能嚴重障礙，代謝產(chǎn)物被吸收后，致使周圍組織發(fā)生炎癥和全身過敏反應(yīng)，嚴重者可致死。

3 包蟲抗原檢測

用酶聯(lián)免疫吸附試驗對犬糞進行檢測。如果待檢樣品中含有包蟲抗原，就會與包被板上的包蟲抗體及第二步加入的包蟲抗體酶標結(jié)合物特異性結(jié)合。間接結(jié)合在包被板上的包蟲抗體酶標結(jié)合物與底物反應(yīng)的顯色狀況即可反映出樣品中是否含有包蟲抗原。

（1）材料與方法。采集新鮮的犬糞進行測試。診斷液由省動物疫控中心提供，深圳康百得生物科技有限公司生產(chǎn)。試驗器械為電子天平、酶標儀、恒溫箱和我移液器等。

（2）試驗操作準備。采集犬糞樣品。用蒸餾水或去離子水將洗滌液按1∶10稀釋，充分混勻待用。用蒸餾水或去離子水將樣品按1∶1稀釋，充分混勻待用。犬糞樣品需要預先低溫（-70℃以下）冷凍7天以上滅活蟲卵。稱取1g糞便加入1mL樣品稀釋液充分攪拌混勻，靜置10分鐘，再3000rpm離心10分鐘，取上清液待檢。

（3）檢測步驟。加樣反應(yīng)。樣品孔中每孔加入100uL待檢樣品；空白對照2孔，每孔僅加入100uL樣品稀釋液；陰性對照2孔，每孔僅加入100uL陰性對照品；陽性對照2孔，每孔僅加入100ul陽性對照品。蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)30分鐘。洗板。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿規(guī)定濃度洗滌液洗板6次，每次均需靜置1分鐘，最后一次甩凈，拍干。加酶反應(yīng)。除空白對照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物100uL,蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗板，拍干。顯色反應(yīng)。按所需用量，臨用前取等體積底物和顯示劑充分混勻后每孔加100uL蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)10分鐘。終止反應(yīng)。加終止液50uL，以空白對照調(diào)零，用酶標儀于450nm波長讀取OD值。

（4）注意事項。試劑盒各組份從冷藏環(huán)境中取出時必須平衡至室溫后方可開封啟用。未使用完的試劑組份及時放回2～8℃密封保存。加試劑前應(yīng)將試劑輕搖、混勻。孵育時必須用封板膜密封板孔，封板膜不可以重復使用。用棄的試劑盒及樣品都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，必須小心使用。采集的犬糞樣品若不能及時檢測，應(yīng)將糞樣低溫（～70℃）凍存，防止腐敗或反復凍融。如犬糞難以溶解，可適當搗碎處理。若沒有低溫冷凍條件，做試驗時一定要做好個人防護，如穿防護服、戴口罩、帽子、手套和腳套等。稱取樣品后的鑷子、剪子和試管架等用火燒烤，一次性防護用品、樣品管等都要焚燒，做無害化處理。

4 結(jié)果分析

（1）檢測結(jié)果表明我區(qū)家養(yǎng)犬有一定程度的棘球蚴感染。驅(qū)蟲前犬糞包蟲抗原檢測感染率為3.75%，驅(qū)蟲后感染率為0.56%，感染率下降了2個百分點，說明藥物驅(qū)蟲對犬包蟲有一定的治療作用。

（2）驅(qū)蟲后10月份檢測犬糞包蟲抗原感染率為零，這與鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站嚴格落實了省動物疫控制定的“月月驅(qū)蟲、犬犬投藥”的要求有關(guān)。犬糞的采集時間對檢測結(jié)果有很大的影響。據(jù)相關(guān)實驗，犬驅(qū)蟲后第二天采集犬糞進行檢測，因為蟲體破裂，感染率會比驅(qū)蟲前更高、更準確。蟲體不成熟，沒有排孕卵節(jié)片，感染率陰性。

（3）上述檢測結(jié)果只能代表小部分地區(qū)的感染強度，要了解全區(qū)的感染情況，今后需加大檢測量。

（4）犬糞抗原ELISA檢測法雖然是診斷包蟲感染的一種方法，但是由于采樣和試劑等因素，對準確、大面積診斷有一定的影響，有待完善。

5 防治措施

根據(jù)家畜棘球蚴病流行病學情況，按照因地制宜、分類指導的原則，采取以控制傳染源為主，以中間宿主防治、切斷傳播途徑等措施相結(jié)合的綜合性防治策略，全面開展家畜棘球蚴病的防治工作，減輕家畜棘球蚴病危害。早期診斷藥物治療可用吡喹酮犬5mg/kg體重，羊用丙硫咪唑驅(qū)蟲等。禁止用感染了棘球蚴的動物肝臟和肺臟等組織器官喂犬。對犬定期驅(qū)蟲，驅(qū)蟲后的犬糞進行無害化處理（深埋或焚燒）。保持畜舍、飼草料和飲水衛(wèi)生，防止犬糞污染。包蟲病控制的焦點在于家畜間的控制，可以對新生羔羊進行羊棘球蚴病基因工程疫苗免疫。對家畜進行定點屠宰，加強檢疫，對感染有棘球蚴的動物組織和臟器進行無害化處理，污染的污物污水不能任意向河渠排放。