范才良，雒　茂，李　慧，晏升勇，李陽春

（1.重慶市榮昌區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶榮昌　402460；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌　402460；3.重慶市榮昌區(qū)清江鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶榮昌　402466；4.重慶澳龍生物制品有限公司，重慶榮昌　402460）

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羊棘球蚴病疫苗免疫山羊后的抗體水平檢測(cè)

范才良1，雒茂2，李慧2，晏升勇3，李陽春4

（1.重慶市榮昌區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶榮昌402460；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌402460；3.重慶市榮昌區(qū)清江鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶榮昌402466；4.重慶澳龍生物制品有限公司，重慶榮昌402460）

摘要：棘球蚴病又叫包蟲病，是人和動(dòng)物感染細(xì)粒棘球絳蟲及多房棘球絳蟲幼蟲所致的疾病。本試驗(yàn)采用不同的免疫程序分兩次免疫羊包蟲病疫苗，并于免疫后4、8、12、20、28、42周分別采集血清用間接ELISA法檢測(cè)抗體水平。結(jié)果顯示：首次免疫后4周抗體水平達(dá)到最高并維持一定時(shí)間，第28周抗體水平處于臨界值；兩次免疫的羊在42周時(shí)的抗體陽性率仍達(dá)到88.9%。

關(guān)鍵詞：羊細(xì)粒棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗；羊包蟲；人畜共患?。幻庖咝Ч?/p>

棘球蚴病又叫包蟲病，是人和動(dòng)物感染細(xì)粒棘球絳蟲幼蟲所致的疾病。本試驗(yàn)用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行了不同免疫程序的免疫，然后用間接ELISA法檢測(cè)不同時(shí)期的血清抗體水平，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1　材料與方法

1.1主要藥品羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，疫苗批號(hào)：20140201）；羊棘球蚴（包蟲）ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：120150402）。

1.2主要儀器PhysioCare多導(dǎo)移液器，Concept移液器，LRH-250生化培養(yǎng)箱，Mu1tiskan MK3酶標(biāo)儀，XK96-A/B快速混勻器。

1.3試驗(yàn)動(dòng)物2月齡以上臨床檢查健康，包蟲病抗體檢測(cè)呈陰性的羊30只。

1.4試驗(yàn)分組從榮昌縣銅鼓、吳家鎮(zhèn)三個(gè)養(yǎng)殖戶家中各選取試驗(yàn)羊10只，共30只。試驗(yàn)組1隨機(jī)取三個(gè)養(yǎng)殖戶各5只羊，共15只；試驗(yàn)組2為余下的15只羊。

1.5免疫程序及操作方法試驗(yàn)1、2組每只羊均注射1mL（1頭份）羊包蟲疫苗，并作好記錄。間隔4周后對(duì)試驗(yàn)組2進(jìn)行二次免疫注射，試驗(yàn)組1不再免疫。操作方法：每只試驗(yàn)羊頸部皮下注射1頭份。

1.6被檢血清的采集免疫后4周（二免前）、8、12、20周分別對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行頸部靜脈采血，分離血清、統(tǒng)一編號(hào)后送實(shí)驗(yàn)室冷凍保存?zhèn)錂z。血清采集情況詳見表1、表2。

1.7血清免疫抗體的測(cè)定用間接ELISA法檢測(cè)抗體水平，操作方法參見ELISA試劑盒說明書。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)如下：

1.7.1試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)滿足下列條件，方為有效：標(biāo)準(zhǔn)陽性對(duì)照孔平均OD450nm≥0.6±0.02；標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。

表1　一免后被檢血清采集表　份

表2　二免后被檢血清采集表　份

1.7.2疫苗免疫后抗體水平檢測(cè)結(jié)果判定：樣品OD450nm≤0.3，判為細(xì)粒棘球蚴（包蟲）抗體陰性；樣品OD450nm>0.3，判為細(xì)粒棘球蚴（包蟲）抗體陽性。

2　試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)組1和2的抗體檢測(cè)結(jié)果、抗體陽性率和抗體消長(zhǎng)情況詳見表3～表6和圖1。

表3　試驗(yàn)組1（一免）抗體檢測(cè)結(jié)果

表4　試驗(yàn)組2（二免）抗體檢測(cè)結(jié)果

表5　試驗(yàn)組1抗體檢測(cè)陽性率

3　結(jié)果分析

3.1抗體水平分析由表3可知，進(jìn)行一次免疫的羊在第4周時(shí)抗體水平達(dá)到最高值（0.558），此后抗體水平逐漸下降，第20周時(shí)為0.361，第28周（0.294）已低于臨界值0.3，抗體為陰性，截至第42周抗體水平降為0.254。由表4可知，進(jìn)行二次免疫的羊在第8周時(shí)抗體水平達(dá)到最高值（1.452），第12周～20周時(shí)的抗體水平均在1.0以上，第28周時(shí)為0.890，截至第42周最后一次采血時(shí)其抗體水平已降為0.620。由圖1可知，用該包蟲疫苗進(jìn)行二免后其抗體水平明顯高于一免的抗體水平。

表6　試驗(yàn)組2抗體檢測(cè)陽性率

圖1　兩個(gè)試驗(yàn)組抗體水平的消長(zhǎng)情況

3.2抗體陽性率分析由表5可知，一次免疫的羊在第4周時(shí)抗體陽性率為88.9%，第8周時(shí)為77.8%，第12周時(shí)為66.7%，第20周時(shí)為55.6%，第28周時(shí)為44.4%，第42周時(shí)抗體降為0。由表6可知，二次免疫的羊在第4周時(shí)抗體陽性率為88.9%，第8周～28周時(shí)的抗體陽性率均為100%，第42周時(shí)抗體陽性率為88.9%。由此可見，二次免疫的保護(hù)效果比一次免疫的保護(hù)效果更好。

3.3包蟲病疫苗的作用原理包蟲病疫苗是使用DNA重組生物技術(shù)，把能表達(dá)棘球絳蟲Eg95蛋白的基因定向?qū)氪竽c桿菌，通過細(xì)菌發(fā)酵表達(dá)Eg95蛋白，經(jīng)破碎純化提取Eg95蛋白而制成的基因工程亞單位疫苗[2]。該疫苗具有產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、不含感染性物質(zhì)、生物安全性高、免疫效果好等特點(diǎn)。生產(chǎn)上于該疫苗中加入了免疫佐劑Qui1 A（皂素的純化物），對(duì)疫苗有免疫增強(qiáng)作用，從根本上解決了免疫效果差的問題[3-4]。

4　包蟲病的危害

4.1對(duì)人的危害包蟲病是人獸共患疾病，對(duì)人的危害很大。一是寄生于肝、肺、骨骼、腦部，產(chǎn)生機(jī)械性壓迫損害引起腹疼、呼吸困難，易發(fā)骨折和癲癇等癥狀；二是在蟲體生長(zhǎng)發(fā)育過程中不斷釋放抗原及毒性物質(zhì)，使機(jī)體產(chǎn)生一系列中毒癥狀；三是當(dāng)包囊破裂或囊液外漏入周圍組織和體腔時(shí)，大量原頭蚴種植于組織器官引起繼發(fā)性包蟲??；四是該病一旦在體內(nèi)發(fā)生可以終身存在，因?yàn)榘x形成囊膜后藥物難以進(jìn)入囊內(nèi)根治，常常需要手術(shù)摘除，如果摘除不完全容易復(fù)發(fā)。該病最終以慢性消耗為主，使患者喪失勞動(dòng)力，長(zhǎng)期經(jīng)受病痛折磨。

4.2包蟲病對(duì)動(dòng)物的危害消耗動(dòng)物體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，造成機(jī)械損傷，飼料利用率下降，導(dǎo)致動(dòng)物生長(zhǎng)緩慢，抵抗力下降，最終影響生產(chǎn)性能和畜產(chǎn)品質(zhì)量。

5　結(jié)論

該包蟲病疫苗對(duì)羊的棘球蚴感染具有很好的免疫保護(hù)效果，且經(jīng)兩次免疫注射后產(chǎn)生的抗體水平更高，抗體持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。因此，生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)在首次免疫后適時(shí)進(jìn)行二次免疫。

參考文獻(xiàn)：

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[4]Frederick R.Improving vaccine performance with adjuvants[J].C1in Infect Dis，2000，30（S3）：266-227.

Detection of the Antibody Levels after Immuned Hydatid Disease Vaccine in Goats

FAN Cai1iang1，LUO Mao2，YAN Shengyong3，et a1.
（1.Anima1 Husbandry and Veterinary Bureau of Rongchang District，Chongqing Rongchang 402460；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460；3.Anima1 Husbandry and Veterinary Station of Qingjiang Town in Rongchang District，Chongqing Rongchang 402466；4.Chongqing Au1eon Bio1ogica1s Co.Ltd.，Chongqing Rongchang 402460，China）

Abstract：Hydatidosis was caused by the 1arvae of E.granulosus and E.multilocularis on the human and anima1s.In this experiment，two different immunization program were conducted（once immunization，twice immunization）after 4、8、12、20、28、42 th weeks，serum antibody 1eve1s were detected by ELISA method.The resu1ts showed that once immunization’s antibody reached to the highest after 4th weeks and maintained a certain time，the antibody 1eve1's critica1 va1ue appeared at 28th weeks.Twice immunization's antibody positive rate was 88.9% at 42th weeks.

Key words：Recombinant hydatid subunit vaccine；Zoonosis；Immune effect

作者簡(jiǎn)介：范才良（1967—），男，四川隆昌人，高級(jí)獸醫(yī)師，從事預(yù)防獸醫(yī)、臨床獸醫(yī)、中草藥研究。

收稿日期：2015-09-25

中圖分類號(hào)：S852.52

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1001-8964（2016）02-0035-03