摘 要：《生活飲用水衛(wèi)生標準》（GB5749-2006）中規(guī)定生活飲用水中菌落總數(shù)的限值僅為100CFU/mL，而總大腸菌群和耐熱大腸菌群的限值更是局限至不得檢出。[1]故此，為保證檢測結(jié)果的合理可信，需要對人、機、料、法、環(huán)、測六大要素進行質(zhì)量控制。《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750-2006）僅羅列了水中微生物的檢測原理、檢測步驟和結(jié)果報告方式，并未提及具體的質(zhì)控手段，本文作者借助十多年來生活飲用水中微生物的檢測經(jīng)歷，結(jié)合行業(yè)主管部門的指導(dǎo)意見及同行之間的交流經(jīng)驗，總結(jié)出了關(guān)于加強生活飲用水中微生物檢測質(zhì)量控制的六大要素關(guān)鍵內(nèi)容，為提升生活飲用水中微生物的檢測水平奠定了理論基礎(chǔ)，可作為生活飲用水中微生物新進人員的培訓(xùn)資料或操作規(guī)范。

關(guān)鍵詞：生活飲用水中微生物；六大要素；質(zhì)量控制

引言

《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750-2006）涉及生活飲用水中微生物的項目包括菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲。[2]其中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲未要求在無菌室內(nèi)操作，且質(zhì)控手段（加標回收）相對單一，故本文著重對菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌檢測過程中的質(zhì)量控制手段進行闡述。

菌落總數(shù)的檢測方法為平皿計數(shù)法，方法原理簡單易懂，檢測步驟快捷方便，但對檢測環(huán)境和人員手勢要求較苛刻；總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌有多種方法可選，分別為濾膜法和多管發(fā)酵法，其中總大腸菌群還可用酶底物法進行檢測。這三個項目剛好與菌落總數(shù)相反，它們的方法原理相對晦澀，且檢測步驟繁瑣復(fù)雜，不過對檢測環(huán)境和人員手勢的要求反倒沒菌落總數(shù)要求那么苛刻。

為了更直觀的理解方法和更快捷的完成檢測過程，同時為了保證檢測結(jié)果的準確性，本文將就以下六大要素關(guān)鍵內(nèi)容進行逐一分析：

1 確保人員能力符合CMA和CNAS要求

《檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定評審準則》（簡稱CMA）中規(guī)定檢驗檢測機構(gòu)對所有從事抽樣、檢驗檢測、簽發(fā)檢驗檢測報告以及操作設(shè)備等工作的人員，應(yīng)具有相應(yīng)的教育、培訓(xùn)、經(jīng)驗和/或可證明的技能，并確保以上人員勝任工作且受到監(jiān)督，能夠按照檢驗檢測機構(gòu)管理體系要求工作，應(yīng)規(guī)定對檢驗檢測質(zhì)量有影響的所有管理、操作和核查人員的職責、權(quán)力和相互關(guān)系，必要時，指定關(guān)鍵管理人員的代理人。[3]

而《檢測和校準實驗室能力認可準則》（簡稱CNAS）更是明確規(guī)定了實驗室技術(shù)管理者中應(yīng)至少包括一名在申請認可或已獲認可的微生物檢測范圍內(nèi)具有微生物專業(yè)或與微生物密切相關(guān)的本科以上學(xué)歷和三年以上微生物檢測的工作經(jīng)歷的成員，由他/她負責指導(dǎo)或培訓(xùn)檢驗人員常規(guī)微生物實驗；實驗室應(yīng)指定生物安全責任人和生物安全監(jiān)督員，從事微生物檢測的關(guān)鍵檢測人員應(yīng)至少具有微生物或相關(guān)專業(yè)?？埔陨系膶W(xué)歷，或者具有10年以上微生物檢測工作經(jīng)歷，授權(quán)簽字人應(yīng)具有相關(guān)專業(yè)本科以上學(xué)歷，并具有3年以上相關(guān)技術(shù)工作經(jīng)歷，如果不具備上述條件，應(yīng)具有相關(guān)專業(yè)?？埔陨系膶W(xué)歷和至少10年的微生物相關(guān)領(lǐng)域檢測工作經(jīng)歷。[4]

以上兩個準則的要求說明生活飲用水中微生物檢測的質(zhì)量控制首先要從人開始抓起，要確保從事微生物檢測或數(shù)據(jù)把關(guān)的人滿足相應(yīng)的條件，具備相應(yīng)的資格。有些實驗室重理化輕微生物，經(jīng)常讓一人分飾多角，兼顧理化和微生物項目，實際上，這樣做違背了相關(guān)準則的要求，必須專業(yè)對口或經(jīng)驗豐富，并確保不斷通過培訓(xùn)和考核維系相關(guān)的檢測能力。

2 確保儀器設(shè)備符合準則和方法要求

CMA中規(guī)定實驗室應(yīng)具備能正確進行檢驗檢測（包括抽樣、樣品制備、數(shù)據(jù)處理與分析）所需的并且能夠獨立調(diào)配使用的固定、臨時和可移動的抽樣、測量和檢測設(shè)備（包括軟件），以上設(shè)備需進行校準或檢定，當校準產(chǎn)生了一組修正因子時，應(yīng)確保其得到正確應(yīng)用。[3]

CNAS中規(guī)定實驗室應(yīng)配備滿足檢測要求的儀器設(shè)備，如培養(yǎng)箱、水浴鍋、冰箱、均質(zhì)器、顯微鏡等，其中培養(yǎng)箱的配置應(yīng)考慮到用途、控溫范圍、控制精度和數(shù)量的要求。如果溫度直接影響分析結(jié)果或?qū)υO(shè)備的正確性能來說是至關(guān)重要的，實驗室應(yīng)監(jiān)控這類設(shè)備的運行溫度，并保存記錄，保證校準/檢定設(shè)備的修正因子/誤差得到及時更新和正確使用。[4]

《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750-2006）中微生物檢測過程中需要使用高壓滅菌器、電熱干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、天平、離心機、冰箱、水浴鍋等儀器設(shè)備，對溫度、精密度和重現(xiàn)性要求較苛刻，尤其是溫控類的設(shè)備，有些方法要求溫度偏差不能超過±1℃，對儀器性能的要求較高。

結(jié)合準則和方法要求，生活飲用水中微生物檢測的質(zhì)量控制其次要從儀器設(shè)備入手，要確保相關(guān)儀器設(shè)備的性能通過檢定或校準滿足準則和方法要求，并確保在使用過程中有進行監(jiān)控、記錄并修正。尤其是培養(yǎng)箱和冰箱，溫度要求極高，若恒溫達不到方法要求，勢必影響檢測過程，檢測結(jié)果也會因此而變得可疑。

3確保培養(yǎng)基、濾膜等供應(yīng)品符合方法要求

CNAS中規(guī)定實驗室應(yīng)建立和保持有效的適合試驗范圍的培養(yǎng)基（試劑）驗收程序，對于關(guān)鍵培養(yǎng)基和試劑，要求進行技術(shù)性驗收。實驗室采用濾膜法進行總大腸菌群、耐熱大腸菌群以及大腸埃希氏菌的檢測時，需對濾膜的濾效進行驗證。[4]

針對以上規(guī)定，生活飲用水中微生物檢測的質(zhì)量控制還要考慮供應(yīng)品的有效性，要確保關(guān)鍵培養(yǎng)基或試劑符合使用要求，可用標準菌株對每批培養(yǎng)基進行測試驗收，也可用人工污染水樣進行檢測，更好的驗證培養(yǎng)基的適用性。最好做一下全過程無菌測試和有菌培養(yǎng)，這樣能確保培養(yǎng)效果。濾膜的驗收可通過無菌和有菌切換模式及平行檢測進行，確保過濾效果符合方法要求。

4確保檢測方法行之有效符合客戶要求

CMA中規(guī)定實驗室應(yīng)按照相關(guān)技術(shù)規(guī)范或者標準，使用適合的方法和程序?qū)嵤z驗檢測活動。應(yīng)按國家標準、行業(yè)標準、地方標準、國際標準、國外先進標準的次序進行方法選擇，并定期確認能否正確使用所選用的新方法，如果方法發(fā)生了變化，要重新進行確認，檢測方法的偏離須經(jīng)確認，并將該方法偏離進行文件規(guī)定，同時需經(jīng)客戶書面同意。[3]

CNAS中規(guī)定標準方法在引入檢測之前，實驗室應(yīng)證實能夠正確地運用這些方法。當有幾種方法可供選擇，或標準化方法提供多種可選程序時，實驗室應(yīng)有相應(yīng)的選擇規(guī)定。[4]

以上規(guī)定表明，檢測方法要定期進行查新，如發(fā)現(xiàn)方法變化，要進行方法變更或方法偏離驗證，總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌均有多種方法可供選擇，建議在選擇時充分考慮檢測時間和樣品類型的局限性。若水質(zhì)比較好，檢測時間緊迫，可采用簡單直接的濾膜法；或水質(zhì)較差，檢測時間充分，最好采用準確度較高更合理可信的多管發(fā)酵法。

5確保檢測設(shè)施和環(huán)境符合準則和方法要求

CMA中規(guī)定檢驗檢測機構(gòu)的檢驗檢測設(shè)施以及環(huán)境條件應(yīng)滿足相關(guān)技術(shù)規(guī)范或標準的要求，當設(shè)施和環(huán)境條件對結(jié)果的質(zhì)量有影響時，機構(gòu)需監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件，區(qū)域間的工作相互之間有不利影響時，應(yīng)采取有效的隔離措施，對影響工作質(zhì)量和涉及安全的區(qū)域和設(shè)施應(yīng)有效控制并正確標識。[3]

CNAS中規(guī)定實驗室的建設(shè)、總體布局和設(shè)施應(yīng)能滿足從事檢驗工作的需要，并以能獲得可靠的檢測結(jié)果為重要依據(jù)，且符合所開展微生物檢測活動生物安全等級的要求。實驗室總體布局應(yīng)減少和避免潛在的污染和生物危害，與辦公室或其它生產(chǎn)區(qū)要有效隔離，應(yīng)配備滿足要求的生物安全柜，適用時，應(yīng)限定在某個工作區(qū)域?qū)ｉT使用的物品如防護服、移液器、離心管等，應(yīng)識別出可能存在的危險因子并有妥善處理廢棄樣品和廢棄物的設(shè)施和制度。[4]

從以上規(guī)定可以看出，檢測設(shè)施和環(huán)境與生活飲用水中微生物檢測的質(zhì)量控制息息相關(guān)，有些實驗室場地有限，無菌室操作間未嚴格按照“單方向工作流程”原則進行建設(shè)，存在潛在的交叉污染，甚至有些還將一些雜物堆放在無菌室內(nèi)，傳遞箱也長期敞開，通風系統(tǒng)長期不進行維護清理，一次性手套、鞋套和帽子重復(fù)使用，防護服未按限制區(qū)域進行使用，準備室未合理布局，滅菌器、培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等無菌要求高的設(shè)備與帶菌設(shè)備未分開放置，已滅菌待用的培養(yǎng)基、瓶皿與未滅菌已用的物品未分開存放。這些隨意的行為帶來了極大的染菌機率，要想保證檢測結(jié)果的合理準確，必須注重每一個步驟的無菌處理或操作?？赏ㄟ^沉降菌試驗和全過程無菌試驗來驗證檢測環(huán)境和設(shè)施是否符合要求，如果設(shè)施和環(huán)境不滿足準則或方法要求，必須重建或者改善。如果人員無菌操作意識不夠，必須重新培訓(xùn)并加強監(jiān)督，直到檢測設(shè)施和環(huán)境確保滿足準則和方法要求為止。

6確保檢測過程符合質(zhì)控計劃和質(zhì)量監(jiān)督要求

CMA中規(guī)定實驗室應(yīng)有質(zhì)量控制程序和質(zhì)量控制計劃，以監(jiān)控檢測結(jié)果的準確性和可靠性，內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控可采用人員比對、方法比對、儀器比對、空白試驗、平行樣試驗、加標回收試驗、留樣再測等方式去驗證檢測過程，還可參加實驗室間比對或?qū)嶒炇议g平行試驗或權(quán)威實驗室的確證試驗以及權(quán)威機構(gòu)開展的實驗室能力驗證。[3]

CNAS中規(guī)定針對微生物定量檢測項目，應(yīng)定期使用有證標準物質(zhì)/標準樣品（如菌落總數(shù)標準物質(zhì)、大腸菌群標準物質(zhì)等）進行監(jiān)控，或使用質(zhì)控樣品開展內(nèi)部質(zhì)量控制活動。針對微生物定性檢測項目，需定期使用標準物質(zhì)/標準樣品、質(zhì)控樣品或標準菌種人工污染的樣品開展內(nèi)部質(zhì)量控制。[4]

為確保檢測能夠順利完成，必須加入多種質(zhì)控手段以保證檢測結(jié)果的合理可信，做菌落總數(shù)檢測時必須帶入空白試驗以及平行樣試驗，可安排不同的檢測人員對同一樣品進行人員比對檢測，也可同一檢測人員使用不同方法對同一樣品進行方法比對，或檢測完后一式兩份放入不同培養(yǎng)箱培養(yǎng)進行儀器比對。對定性類的項目，每次檢測都接種標準菌種進行同步分析，對定量類的項目，可通過檢測愛德士或環(huán)凱的有證標準物質(zhì)提升自身的技術(shù)水平，還可通過參加實驗室間比對或能力驗證活動來驗證實驗室微生物的檢測能力。

總結(jié)

總之，在生活飲用水微生物檢測過程中，需對人、機、料、法、環(huán)、測六大要素進行質(zhì)量控制，只要這六大要素在檢測過程中得到了極大重視和有力控制，檢測數(shù)據(jù)的準確性就得到了有力保障，檢測結(jié)果的出具才會合理可信。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.GB5749-2006生活飲用水衛(wèi)生標準[S].北京：中國標準出版社，2007.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.GB/T5750-2006生活飲用水標準檢驗方法[S].北京：中國標準出版社，2007.

[3] 中國認證認可監(jiān)督管理委員會.檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定評審準則[S].

[4] 中國合格評定國家認可委員會.CNAS-CL09檢測和校準實驗室能力認可準則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S].

作者簡介：楊育兵，男，籍貫梅州，從事微生物檢測已有十多年，已取得水處理與水分析工程師和化學(xué)檢驗高級技師證書。