李孟+蔡煥+石媛娟+李昭霞+付鵬清+楊維

【摘要】目的：了解小鼠腸道菌群改變對動脈粥樣硬化形成的初步影響。方法：將小鼠隨機分成3組：灌胃生理鹽水組、灌胃頭孢曲松鈉組、皮下注射頭孢曲松鈉組，通過對其糞便中G-菌的數(shù)量的監(jiān)測來判斷模型是否建立成功，連續(xù)處理39天后，檢測小鼠血清中TC，TG的含量。結(jié)果：灌胃頭孢曲松鈉組小鼠血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）的含量明顯高于灌胃生理鹽水組與皮下注射頭孢曲松鈉組的小鼠（P<0.05），灌胃生理鹽水組與皮下注射頭孢曲松鈉組的小鼠血清中TC，TG的含量基本一致（P<0.05）。結(jié)論小鼠腸道菌群的變化會導致血清中TC，TG的升高。

【關(guān)鍵詞】腸道菌群；TG；TC；小鼠

人和動物腸道內(nèi)寄居大量不同種類的微生物，以細菌為主。正常情況下，這些微生物不僅沒有害處，還有益處，它們與宿主一直保持著互惠共生的關(guān)系。作為機體的“體外器官”，穩(wěn)定的構(gòu)成是腸道菌群最顯著的特征。人體代謝所需要的酶類有35%以上是由正常微生物群合成，腸道菌群參與宿主的物質(zhì)代謝、促進宿主營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，在維持腸道正常生理功能、調(diào)節(jié)機體免疫以及拮抗病原微生物定植等方面發(fā)揮重要作用，成為保護健康的一道屏障。當腸道內(nèi)細菌種類或數(shù)量發(fā)生改變，可能影響宿主的健康。臨床上，不合理使用抗生素常常是造成腸道菌群失調(diào)的主要原因，在本課題中，研究者通過頭孢曲松鈉誘導小鼠腸道菌群發(fā)生改變，檢測小鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）的變化，繼而為研究腸道菌群失調(diào)導致動脈粥樣硬化的發(fā)生和防治提供一定理論基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1、材料

藥品：頭孢曲松鈉、生理鹽水購自長沙醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院。實驗對象：昆明種小鼠，體重18～22g，均為雌性小鼠，由長沙天勤技術(shù)有限公司提供。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基購自南京建成生物工程研究所。頭孢曲松鈉溶液的配制：頭孢曲松鈉1g與生理鹽水（1000ml）用燒杯混合配制，濃度1：1000，將其置于冷藏室中保存起來，用EP管分裝。

2、方法

取小鼠21只，隨機分為3組：灌胃生理鹽水組、灌胃頭孢曲松鈉組、皮下注射頭孢曲松鈉組，每組7只，置于本校生命科學樓科研中心動物房以普通飼料喂養(yǎng)。在室溫為25℃，相對濕度為50%的條件下飼養(yǎng)，自由進食飲水，適應性飼養(yǎng)I周后開始試驗。

3、建立模型

（1）頭孢曲松鈉誘導小鼠腸道菌群改變的模型建立

灌胃生理鹽水組、灌胃頭孢曲松鈉組、皮下注射頭孢曲松鈉組所用的液體分別是生理鹽水、1：1000的頭孢曲松鈉、1：1000的頭孢曲松鈉，溶液的體積分別是0.5ml、0.5ml、0.5ml，連續(xù)灌胃與皮下注射39天（具體時間為中午12點，每天1次）。

（2）樣品收集與培養(yǎng)：在動物灌胃與皮下注射過程中，糞便樣品收集的時間分別為第0天灌胃、第3天灌胃、第4天灌胃、第5天灌胃、第6天灌胃，糞便樣品的質(zhì)量為0.1g。分別用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)糞便中G-菌的數(shù)量并計數(shù)。

（3）第39天摘除小鼠眼球進行取血，離心分離血清，按照試劑盒說明測量血清中TC，TG的含量。

4、統(tǒng)計學分析

統(tǒng)計學處理采用spss 10.0軟件分析，數(shù)據(jù)用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗，顯著性水平為P<0.05。

二、結(jié)果

1、從表1可見，小鼠腸道菌群變化的模型的成功建立。

2、從表2可見，灌胃頭孢曲松鈉組具有一定地增加小鼠血清中TC，TG的含量的影響。

與灌胃頭孢曲松鈉組比較：1）P<0.05，2）P<0.05。

三、討論

目前對腸道菌群與胃腸道疾病、腫瘤、內(nèi)分泌疾病的研究較豐富，心血管疾病的研究尚處于起步階段，我們?nèi)匀恢跎佟Ｏ嚓P(guān)實驗證明：在實驗中，高膽堿飲食顯著擴大動脈粥樣硬化背景小鼠斑塊面積，膽堿代謝產(chǎn)物很有可能是通過擴大泡沫細胞產(chǎn)生而促進動脈粥樣硬化，進而增加心血管疾病發(fā)病風險的，而應用廣譜抗生素可抑制這種作用。Stepankova等研究發(fā)現(xiàn)，腸道無菌的AS動物模型-APOE基因敲除[ApoE（-/-）]小鼠，其血總膽固醇水平顯著高于灌服腸道共生菌后的[ApoE（-/-）]小鼠，而且前者比后者更易形成AS，提示腸道菌群的變化可能與動脈粥樣硬化相關(guān)，Hooper在Science上提出“人體基因組是極難干預的，因此改變?nèi)梭w腸道微生物構(gòu)成將成為疾病防治上新的突破口”，腸道菌群可能成為心血管疾病治療的一個潛在靶點。人體腸道菌群參與了人體內(nèi)多種代謝過程，越來越多的證據(jù)表明，腸道菌群可能通過參與調(diào)節(jié)人體膽固醇代謝、氧化應激和炎癥等方面，影響著AS的發(fā)生與發(fā)展，因此通過對腸道菌群的有效調(diào)節(jié)來預防或治療動脈粥樣硬化可能成為一種有效的手段。然而，由于腸道菌群自身的復雜性，其與機體相互作用以及引發(fā)動脈粥樣硬化的機制尚未完全闡明，有待更深入的研究以盡早利用腸道菌群及其相關(guān)產(chǎn)品在臨床上防治動脈粥樣硬化。故本文對頭孢曲松鈉誘導小鼠腸道菌群變化來檢測血清中TC，TG指標的含量相關(guān)的研究。本實驗運用頭孢曲松鈉誘導小鼠腸道菌群變化來檢測血清中TC，TG指標的含量。實驗可以看出：灌胃頭孢曲松鈉組具有一定地增加小鼠血清中TC，TG的含量的影響，提示腸道菌群變化可提高機體TC，TG指標的含量，但其作用機理還有待于進一步的研究。

通訊作者：吳高莉

基金項目；長沙醫(yī)學院2016年度大學生研究性學習和創(chuàng)新性實驗計劃項目（18）

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