鄧卓峰，周崢，齊娟

(1武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心，武漢 430015；2江漢大學(xué)；3武漢大學(xué)口腔醫(yī)院)

舌癌組織腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6表達(dá)變化及臨床意義

鄧卓峰1，周崢2，齊娟3

(1武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心，武漢 430015；2江漢大學(xué)；3武漢大學(xué)口腔醫(yī)院)

目的 探討腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)在舌癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇65例舌癌患者的癌組織及癌旁正常組織，采用免疫組化法檢測(cè)其TRAF6表達(dá)，分析舌癌組織TRAF6表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)47例(72.3%)，癌旁正常組織為13例(20.0%)，二者比較P<0.01。舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者性別、年齡及腫瘤組織分化程度、直徑均無(wú)關(guān)(P均>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)(P均<0.01)。舌癌組織TRAF6陽(yáng)性者5年中位生存時(shí)間為27.00個(gè)月、5年生存率為6.38%，陰性者分別為49.50個(gè)月、27.78%，兩者比較P均<0.05。結(jié)論 舌癌患者癌組織TRAF6高表達(dá)，其表達(dá)變化參與舌癌的進(jìn)展；舌癌組織TRAF6表達(dá)對(duì)判斷患者預(yù)后可能具有重要意義。

舌癌；腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6；臨床病理特征；預(yù)后

舌癌的發(fā)病率及病死率高居口腔癌癥的第一位，其發(fā)生、發(fā)展的分子學(xué)機(jī)制尚未完全闡明[1]。手術(shù)是治療舌癌的主要方法，但由于腫瘤細(xì)胞常侵襲頜面部器官，患者術(shù)后多存在明顯的容貌和功能破壞，嚴(yán)重影響其生存質(zhì)量[2,3]；放化療由于毒副作用較大且特異性較低，難以特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞[4]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)在多種腫瘤組織中高表達(dá)[5，6]。但其在舌癌組織中的表達(dá)變化鮮見報(bào)道。為此，我們進(jìn)行了如下研究?，F(xiàn)分析結(jié)果并報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2000年9月～2010年1月武漢大學(xué)口腔醫(yī)院收治的舌癌患者65例，男39例、女26例，年齡32～64(47.22±4.62)歲。所有患者首次發(fā)病，術(shù)前未接受過(guò)放療、化療及生物免疫性治療，術(shù)后經(jīng)組織病理檢查明確診斷。腫瘤組織分化程度：低分化12例、中分化24例、高分化29例，臨床分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期30例、Ⅲ期16例、Ⅳ期7例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，腫瘤直徑<3 cm 46例、≥3 cm 19例。所有患者臨床資料完整，術(shù)后隨訪均>5年。

1.2 舌癌組織及癌旁正常組織TRAF6表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。分別取舌癌組織及癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣>5 cm)，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片；將石蠟切片脫蠟、水化，PBS沖洗后用蒸餾水浸泡，然后行抗原修復(fù)；滴加過(guò)氧化酶阻斷溶液，室溫孵育15 min以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；滴加動(dòng)物非免疫血清，室溫孵育10 min；滴加1∶100的TRAF6一抗稀釋液(美國(guó)Santa Cruz公司)，室溫孵育1 h；PBS沖洗后滴加羊抗兔IgG二抗(美國(guó)Santa Cruz公司)，室溫孵育10 min；PBS沖洗后滴加鏈霉菌抗生物素—過(guò)氧化物酶溶液，室溫孵育10 min；DAB顯色后自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染后再次自來(lái)水沖洗，乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片。隨機(jī)選擇20個(gè)高倍鏡(×400)視野。采用雙盲法由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師計(jì)數(shù)TRAF6陽(yáng)性表達(dá)。TRAF6陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色沉淀。以陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度綜合判斷結(jié)果[7]：①陽(yáng)性細(xì)胞百分比<1%為0分，≥1%～<10%為1分，≥10%～<30%為2分，≥30%～<60%為3分，≥60%為4分；②無(wú)陽(yáng)性染色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。兩者之和0～2分為陰性，3～7分為陽(yáng)性。分析舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)及5年生存率的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 舌癌組織及癌旁正常組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)比較 舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)47例(72.3%)，癌旁正常組織為13例(20.0%)，二者比較P<0.01。 見插頁(yè)Ⅱ圖5。

2.2 舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者性別、年齡及腫瘤組織分化程度、直徑均無(wú)關(guān)(P均>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)(P均<0.01)，即臨床分期高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TRAF6陽(yáng)性表達(dá)率高于臨床分期低、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。見表1。

表1 舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 舌癌組織TRAF6表達(dá)與患者5年生存率的關(guān)系 舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)者與陰性表達(dá)者5年中位生存時(shí)間分別為27.00、49.50個(gè)月，5年生存率分別為6.38%，27.78%，兩者5年生存率比較P<0.05。見圖1。

圖1 舌癌組織TRAF6表達(dá)與患者5年生存率的關(guān)系

3 討論

TRAF6是腫瘤壞死因子超家族和Toll樣/IL-1受體超家族的重要接頭分子，由530個(gè)氨基酸組成，主要包括兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，即TRAF6結(jié)構(gòu)域(C端)和螺旋卷曲激活結(jié)構(gòu)域(N端)[8]，介導(dǎo)TRAF分子之間形成同源/異源二(多)聚體。研究表明，TRAF6處于多條信號(hào)通路向下游傳導(dǎo)的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，TRAF6激活后可同時(shí)激活NF-κB和MAPK信號(hào)通路[9]。NF-κB信號(hào)通路在舌癌組織中異常激活，靶向下調(diào)NF-κB活性可抑制舌癌細(xì)胞增殖、侵襲，加速舌癌細(xì)胞凋亡[10]。MAPK信號(hào)通路在舌癌組織中亦存在異常激活，MAPK活性下調(diào)可抑制舌癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)舌癌細(xì)胞凋亡[11～13]。盡管如此，目前尚無(wú)NF-κB或MAPK特異性抑制劑用于舌癌治療的報(bào)道，其主要原因可能為單純阻斷一條信號(hào)通路難以達(dá)到對(duì)舌癌的有效治療，必須同時(shí)阻斷NF-κB和MAPK信號(hào)通路才有可能對(duì)舌癌發(fā)揮治療作用。

以往研究發(fā)現(xiàn)，TRAF6在多種腫瘤組織中存在異常高表達(dá)，特異性抑制TRAF6可顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡[14～16]。本研究結(jié)果表明，舌癌組織TRAF6存在異常高表達(dá)；舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者性別、年齡及腫瘤組織分化程度、直徑均無(wú)關(guān)，與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，即臨床分期高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者TRAF6陽(yáng)性表達(dá)率高于臨床分期低、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，舌癌組織TRAF6陽(yáng)性表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)，TRAF6陽(yáng)性表達(dá)者5年生存率明顯低于TRAF6陰性表達(dá)者。上述結(jié)果提示，TRAF6高表達(dá)可能促進(jìn)舌癌的發(fā)生、發(fā)展和侵襲，早期檢測(cè)TRAF6表達(dá)有助于判斷患者預(yù)后。同時(shí)阻斷NF-κB、MAPK等信號(hào)通路有可能是TRAF6的作用機(jī)制。

綜上所述，舌癌組織中TRAF6異常高表達(dá)，其表達(dá)增加可促進(jìn)舌癌的發(fā)生、發(fā)展，早期檢測(cè)TRAF6表達(dá)對(duì)判斷舌癌患者預(yù)后可能具有重要意義。

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