王愛(ài)民，焦海濤，吳建龍，王學(xué)文，李建輝

(1承德市中心醫(yī)院，河北承德067000；2承德醫(yī)學(xué)院)

胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)變化及其臨床意義

王愛(ài)民1，焦海濤2，吳建龍1，王學(xué)文1，李建輝1

(1承德市中心醫(yī)院，河北承德067000；2承德醫(yī)學(xué)院)

目的 探討表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、c-Met、Ki-67在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選取胃癌組織88例份、正常胃黏膜組織46例份，采用免疫組化一步法檢測(cè)EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)，并分析三者表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織EGFR陽(yáng)性表達(dá)率為86.36%(76/88)、c-Met陽(yáng)性表達(dá)率為82.95%(73/88)、Ki-67高表達(dá)率為94.32%(83/88)，正常胃黏膜組織分別為19.57%(9/46)、17.39%(8/46)、21.74%(10/46)，二者比較P均<0.05。胃癌組織EGFR、c-Met陽(yáng)性表達(dá)和Ki-67高表達(dá)兩兩互呈正相關(guān)關(guān)系(P均<0.05)。結(jié)論 胃癌組織EGFR、c-Met和Ki-67表達(dá)均升高，三者在促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用。

胃癌；表皮生長(zhǎng)因子受體；c-Met；Ki-67；免疫組織化學(xué)

據(jù)2011年統(tǒng)計(jì)，我國(guó)胃癌的發(fā)病率為31.21/10萬(wàn)、病死率為22.08/10萬(wàn)[1]，分別居所有惡性腫瘤的第2、3位[2]。近年來(lái)，隨著診療手段的不斷進(jìn)步，早期胃癌患者預(yù)后有了較大改善，但晚期胃癌患者預(yù)后仍較差，5年生存率僅為15%左右[3]。故尋找預(yù)測(cè)胃癌發(fā)生、發(fā)展的分子生物學(xué)標(biāo)記物具有重要意義[4,5]。本研究觀察了表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、c-Met和Ki-67在胃癌組織中的表達(dá)變化?，F(xiàn)分析結(jié)果，并探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年10月～2012年7月承德市中心醫(yī)院手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本88例份。所有標(biāo)本經(jīng)組織病理檢查證實(shí)。根據(jù)2010年美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)《惡性腫瘤TNM分期》(第7版)標(biāo)準(zhǔn)TNM分期為T2N1M0期，Lauren分型為腸型；患者男52例、女36例，年齡(58.0±4.8)歲。同期選擇正常胃黏膜組織標(biāo)本46例份，患者男26例、女20例，年齡(54.0±6.7)歲。胃癌患者及正常胃黏膜者性別、年齡具有可比性。所有病例臨床病理資料及隨訪記錄齊全。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 胃癌組織和正常胃黏膜組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化一步法。取手術(shù)切除的胃癌組織、正常胃黏膜組織，10%中性甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。切片經(jīng)80 ℃烤箱烤片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫苯，雙蒸水沖洗；高壓抗原修復(fù)，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，鼠抗人多克隆一抗4 ℃孵育過(guò)夜，羊抗鼠/兔IgG聚合物二抗37 ℃孵育20 min，DAB顯色5～10 min，蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，隨機(jī)選取5個(gè)400倍視野，顯微鏡下觀察。結(jié)果判定：① EGFR、c-Met表達(dá)：采用Volm雙評(píng)分法[6]。陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。陽(yáng)性細(xì)胞所占比例：≤10%為0分，>10%～≤25%為1分，>25%～≤50%為2分，>50%為3分；染色強(qiáng)度：未著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，褐色或棕黃色為3分。二者之和≥1分為陽(yáng)性。②Ki-67表達(dá)：胃癌組織Ki-67陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀、灶狀或彌漫分布；正常胃黏膜組織Ki-67陽(yáng)性表達(dá)局限于黏膜層的腺體頸部。根據(jù)Lee等[7]分類方法，以Ki-67指數(shù)(Ki-67 LI)20%作為截?cái)嘀?，Ki-67 LI>20%為Ki-67高表達(dá)，Ki-67 LI≤20%為Ki-67低表達(dá)。Ki-67 LI=Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。分析胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和正常胃黏膜組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)比較 胃癌組織及正常胃黏膜組織EGFR陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.36%(76/88)、19.57%(9/46)，c-Met陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.95%(73/88)、17.39%(8/46)，Ki-67高表達(dá)率分別為94.32%(83/88)、21.74%(10/46)；二者比較P均<0.05。

2.2 胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)的關(guān)系 胃癌組織EGFR陽(yáng)性表達(dá)與c-Met陽(yáng)性表達(dá)、Ki-67高表達(dá)均呈正相關(guān)(r分別為0.463、0.524，P均<0.05)，c-Met陽(yáng)性表達(dá)與Ki-67高表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.429，P<0.05)。

3 討論

近年來(lái)，隨著內(nèi)鏡等診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，大量早期胃癌得以發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療，明顯改善了患者的總體生存率及近期預(yù)后，但對(duì)于進(jìn)展期胃癌患者，即使積極、正規(guī)治療近期預(yù)后仍不理想。因此，尋找早期檢測(cè)胃癌的特異性分子生物學(xué)標(biāo)記物具有重要意義。

EGFR是一種分子量約為180 kDa的跨膜糖蛋白，具有配體誘導(dǎo)的酪氨酸蛋白激酶活性，一旦與表皮生長(zhǎng)因子(EGF)結(jié)合，即可啟動(dòng)細(xì)胞核內(nèi)的相關(guān)基因，促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖、抑制細(xì)胞凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多種腫瘤組織中EGFR高表達(dá)[8～10]，其高表達(dá)者預(yù)后差、腫瘤轉(zhuǎn)移可能性大[11]。c-Met是一種由c-Met原癌基因編碼的蛋白產(chǎn)物，亦具有酪氨酸激酶活性，與多種癌基因產(chǎn)物和調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)，參與細(xì)胞信息傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架重排的調(diào)控，是細(xì)胞增殖、分化的重要調(diào)節(jié)因子。目前認(rèn)為，c-Met與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在胃癌組織中c-Met高表達(dá)，其高表達(dá)與胃癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12，13]。Peng等[14]經(jīng)Meta分析發(fā)現(xiàn)，胃癌組織c-Met表達(dá)越高，患者生存時(shí)間越短。表明c-Met高表達(dá)參與胃癌的發(fā)展與侵襲，可導(dǎo)致患者病情惡化，預(yù)后不良。Ki-67是一種具有非組蛋白特點(diǎn)的核蛋白，存在于具有增殖活性的細(xì)胞核中，由第10號(hào)染色體長(zhǎng)臂所屬基因轉(zhuǎn)錄、翻譯而成。該蛋白與細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)，是目前評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖的蛋白之一。有研究證實(shí)，胃癌組織Ki-67陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常胃黏膜組織[15]，表明Ki-67高表達(dá)可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織EGFR、c-Met陽(yáng)性表達(dá)率及Ki-67高表達(dá)率均高于正常胃黏膜組織，表明EGFR、c-Met和Ki-67可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。目前，對(duì)EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系尚未明確。本研究發(fā)現(xiàn)，隨EGFR表達(dá)增加，c-Met表達(dá)亦呈增加趨勢(shì)，二者呈正相關(guān)關(guān)系，由此推測(cè)EGFR、c-Met在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能具有協(xié)同作用；EGFR與Ki-67、c-Met與Ki-67表達(dá)同樣呈正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明三者對(duì)胃癌的發(fā)展具有協(xié)同作用，但目前關(guān)于三者相互影響的具體機(jī)制尚不明確。

綜上所述，胃癌組織EGFR、c-Met、Ki-67表達(dá)升高，三者在促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用。

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(稿件編號(hào)：2016-09-22)

承德市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃(201601A018)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.08.024

R735.2

B

1002-266X(2017)08-0075-02