于淼琛，潘立陽(yáng)，朱 鴻

(1、大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連116011；2、大連市疾病預(yù)防控制中心傳染病地方病防制所，遼寧大連116011)

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)乙肝表面抗原剩余試劑再利用評(píng)價(jià)

于淼琛1，潘立陽(yáng)2，朱 鴻1

(1、大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連116011；2、大連市疾病預(yù)防控制中心傳染病地方病防制所，遼寧大連116011)

目的對(duì)雅培i2000化學(xué)發(fā)光儀剩余試劑再利用進(jìn)行評(píng)估。方法將HBsAg的混合剩余試劑，進(jìn)行精密度、正確度、并與新試劑進(jìn)行比對(duì)及相關(guān)性分析。結(jié)果批內(nèi)精密度分別是4.77、5.48，批間精密度分別是8.86、5.78；正確度本室測(cè)定結(jié)果與室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果均相符；相關(guān)系數(shù)r為0.9979；HBsAg兩試劑盒的陽(yáng)性符合率（%）、陰性符合率（%）均為100%。結(jié)論雅培i2000化學(xué)發(fā)光儀剩余試劑可以混合使用，穩(wěn)定性良好，能保證檢測(cè)質(zhì)量。

雅培i2000；剩余試劑再利用；化學(xué)發(fā)光

雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀應(yīng)用臨床以來，重復(fù)性好，故障率低，結(jié)果可靠穩(wěn)定[1-3]，逐步取代了傳統(tǒng)的ELISA方法。但是由于配套試劑均為進(jìn)口試劑，價(jià)格相對(duì)較高，試劑剩余量大，為了節(jié)約成本，本實(shí)驗(yàn)室將相同批號(hào)的剩余試劑混合，并對(duì)其性能進(jìn)行驗(yàn)證評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源標(biāo)本來源于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院患者的無溶血、無乳糜血清。

1.2 儀器與試劑雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。將試劑瓶剩余試劑輕輕充分混勻，倒入另一臺(tái)儀器用完的試劑瓶?jī)?nèi)，輕輕混勻，注意不要產(chǎn)生氣泡，成為一盒新的“混合”試劑。配套校準(zhǔn)品及質(zhì)控品。

1.3 方法

1.3.1 精密度驗(yàn)證依據(jù)EP15-A2[4]，選擇兩個(gè)水平的混合血清（弱陽(yáng)性、陽(yáng)性血清），連續(xù)檢測(cè)20次，計(jì)算批內(nèi)精密度，批內(nèi)精密度≤1/4允許總誤差（TEa）；使用2個(gè)水平的質(zhì)控品（弱陽(yáng)性、陽(yáng)性），每天取出兩個(gè)水平的樣品各一支，在常規(guī)條件下各測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定20天，計(jì)算批間精密度，批間精密度≤1/3允許總誤差（TEa）。

1.3.2 正確度驗(yàn)證用室間質(zhì)評(píng)的質(zhì)控物測(cè)定，判斷測(cè)定結(jié)果與室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果符合性。

1.3.3 比對(duì)試驗(yàn)

1.3.3.1 比對(duì)分析依據(jù)EP9-A2[5]，實(shí)驗(yàn)周期不少于5天，至少做20份病人樣品（如每天至少做4份病人標(biāo)本）。盡可能使50%的實(shí)驗(yàn)樣品分析物的含量在參考區(qū)間外、可報(bào)告范圍內(nèi)。比對(duì)實(shí)驗(yàn)盡量在2個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完成，將樣品按1、2、3、4的順序排列先測(cè)一遍，然后將順序倒過來做第二次測(cè)定。將新試劑盒的結(jié)果與混合試劑盒的結(jié)果作比較。計(jì)算回歸方程：Y=ax+b，a值在1±0.03范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975[6]。

1.3.3.2 符合率選擇10份陰性標(biāo)本（其它標(biāo)志物陽(yáng)性的4份以上）、10份陽(yáng)性標(biāo)本（至少弱陽(yáng)性5份、強(qiáng)陽(yáng)性1份），使用混合試劑盒和新試劑盒分別檢測(cè)HBsAg，計(jì)算兩試劑盒的符合率，評(píng)價(jià)比對(duì)結(jié)果的可接受性。

1.3.4 相關(guān)性分析HBsAg新試劑盒測(cè)定值的平均值為X，混合試劑盒測(cè)定值平均值為Y[6]，用相關(guān)系數(shù)(r)對(duì)相關(guān)性作評(píng)估，若r≥0.975或r2≥0.95，則認(rèn)為X范圍合適，兩試劑的相關(guān)性好，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠。計(jì)算線性回歸方程：Y=aX+b。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證HBsAg檢測(cè)批內(nèi)精密度和批間精密度結(jié)果均合格，見表1。

表1 HBsAg精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2 正確度驗(yàn)證測(cè)定結(jié)果與室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果均一致，判斷結(jié)果符合，見表2。

2.3.1 相關(guān)性分析回歸方程Y=0.1.0069X-0.9967，相關(guān)系數(shù)r=0.9979[7]，見圖1。

2.3.2 定性項(xiàng)目HBsAg兩試劑盒的符合率，陽(yáng)性符合率（%）、陰性符合率（%）均可接受，見表3。

表2 正確度驗(yàn)證結(jié)果

圖1 HBsAg相關(guān)性

表3 HBsAg的符合率

3 討論

雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)試劑用完后，試劑瓶?jī)?nèi)雖有剩余試劑，但儀器不會(huì)再進(jìn)行檢測(cè)，但剩余試劑量卻超過了50%[8]?；瘜W(xué)發(fā)光儀器試劑價(jià)格昂貴，如將剩余試劑棄之不用，將造成極大的浪費(fèi)[9]。為了使剩余試劑在儀器上的分析結(jié)果具有可比性，必須要對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)[10-12]?；旌鲜Ｓ嘣噭┑幕旌显噭┙?jīng)本實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，重復(fù)性及準(zhǔn)確性均可靠。HBsAg新試劑盒和剩余試劑混合試劑盒的比對(duì)結(jié)果，回歸方程良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9979，說明兩試劑盒高度正相關(guān)，且相關(guān)性都良好[13]。

由于檢測(cè)標(biāo)本量大，且2臺(tái)雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀同時(shí)進(jìn)行，在工作結(jié)束后，崗位人員負(fù)責(zé)將今日的剩余試劑混合且做好標(biāo)注，放入另一臺(tái)儀器明日備用。第二天檢測(cè)質(zhì)控合格后，才能進(jìn)行正常標(biāo)本檢測(cè)。如當(dāng)日質(zhì)控失控，應(yīng)查找原因，重新復(fù)測(cè)質(zhì)控品，質(zhì)控合格方能進(jìn)行正常標(biāo)本檢測(cè)；如質(zhì)控還是失控，不能用此混合試劑檢測(cè)標(biāo)本，要棄去此混合試劑。剩余混合試劑放入另一臺(tái)儀器后，儀器掃描條碼后，默認(rèn)為新盒試劑，儀器庫(kù)存為“500TEST”，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)2瓶剩余混合試劑檢測(cè)標(biāo)本量大概為80TEST。

對(duì)于HBsAg剩余混合試劑檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本，用金標(biāo)法復(fù)查，如結(jié)果相符，則可正常審發(fā)報(bào)告，若不相符，則應(yīng)使用新盒試劑重新檢測(cè)；對(duì)于HBsAg剩余混合試劑檢測(cè)弱陽(yáng)性標(biāo)本，則應(yīng)使用新盒試劑重新檢測(cè)，如結(jié)果相符，則可正常審發(fā)報(bào)告，若不相符，則應(yīng)使用患者生化室檢測(cè)血液使用新盒試劑重新檢測(cè)，如有必要，直接檢測(cè)患者血樣HBV-DNA。

根據(jù)配套校準(zhǔn)品說明書，同批號(hào)試劑可定標(biāo)一次，穩(wěn)定期為30d，所以剩余試劑可不需再定標(biāo)[14]。經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，在日常工作中，可將雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上使用的HBsAg試劑剩余混合用于檢測(cè)，其與原裝檢測(cè)試劑的檢測(cè)結(jié)果具有可比性，在嚴(yán)格按說明書保存及規(guī)定有效期內(nèi)使用的前提下，既保證了檢驗(yàn)質(zhì)量，又能有效節(jié)約成本，值得推廣[15]。

[1]張保平，董莉，馮新平，等.雅培ARCHITECT i2000化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定6種腫瘤標(biāo)記物項(xiàng)目的方法學(xué)性能評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(4)：488-490.

[2]Gacouin A，Roussel M，Gros A，et al.Chronic alcohol exposure，infection，extended circulating white blood cells differentiated by flow cytometry and neutrophil CD64 expression：aprospective，descriptive study of critically ill medical patients[J].Ann Intensive Care，2012，2(1)：50.

[3]趙喬妹，張靜，劉英麗，等.不同化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的性能評(píng)價(jià)[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2015，22(4)：345-351.

[4]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP15-A2.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods.[S]. Wayne，PA，USA：CLSI，2000.

[5]National Committee for Clinieal Laboratory Standards.EP9-A2 Method Comparison and BiasEstimation Using patient Samples[S]. Wayne，PA：NCCLS，2002.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].CLSI EP6-A2.2003.

[7]NCCLS.EP6-P-2002 Evalution of the linearity of quantitative analytical methods[S].2002.

[8]劉振杰，鐘偉國(guó)，曹永堅(jiān)，等.關(guān)于全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀HCV剩余試劑再利用的研究[J].職業(yè)與健康，2015，31(8)：1114-1119.

[9]朱波，沈偉，黃家勤，等.ARCHITECT I2000SR化學(xué)發(fā)光儀甲胎蛋白殘留試劑再利用性能評(píng)估[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(24)：3397-3399.

[10]張敏，徐敬然，壽爽，等.SYSMEX CS-5100和SYSMEX CA-7000血凝分析儀檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，8(33)：444-446.

[11]盧志芳，楊先凱，李鳳俠，等.室間不同生化檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果可比性探討[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，32(1)：34-36.

[12]陳海明，王前明，趙元?jiǎng)祝?日立7600全自動(dòng)生化分析儀的分析性能驗(yàn)證[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36(20)：2983-2986.

[13]于淼琛，李士軍，孫國(guó)華，等.生化部分常規(guī)項(xiàng)目干濕化學(xué)檢測(cè)結(jié)果一致性分析[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，38(2)：172-176.

[14]張愛民，張桂芬.雅培i2000全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀剩余試劑檢測(cè)結(jié)果分析[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2015，36(10)：100-102.

[15]彭德珍，林武洲.應(yīng)用質(zhì)控品對(duì)羅氏混合回收試劑穩(wěn)定性的觀察[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(4)：343-344.

R512.6+3，R446.62

A

1674-1129(2017)01-0071-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.01.021

2016-08-10；

2016-11-24)

朱鴻，女，主任技師，主要從事臨床免疫學(xué)方面的研究。