孔評(píng)石

(江蘇省第二中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南京210017)

·質(zhì)量控制·

抗肺炎支原體IgG定性測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控物濃度的選擇和批間連續(xù)質(zhì)控延續(xù)方法的建立

孔評(píng)石

(江蘇省第二中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南京210017)

目的建立抗肺炎支原體IgG定性測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控物濃度的選擇方法和批間連續(xù)質(zhì)控的延續(xù)方法。方法選擇系列質(zhì)控血清中S/CO值減去精密度測(cè)定中得到的3倍批間CV與該S/CO值的乘積仍大于1.0者用來(lái)監(jiān)測(cè)試驗(yàn)重復(fù)性，選擇S/CO處于1.5左右的質(zhì)控血清以判斷試劑盒測(cè)定下限的有效性。使用新舊兩個(gè)批號(hào)試劑盒同時(shí)檢測(cè)系列質(zhì)控血清得到線性回歸的直線方程，計(jì)算得到換算因子，用以將新批號(hào)試劑測(cè)定值換算至原批號(hào)試劑測(cè)定值，繼續(xù)使用原質(zhì)控圖。結(jié)果通過(guò)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蜻x擇合適濃度的質(zhì)控物用以判斷檢測(cè)重復(fù)性和試劑盒測(cè)定下限的有效性。能夠得到不同批號(hào)間質(zhì)控測(cè)定的換算因子用以有效延續(xù)質(zhì)控圖。結(jié)論通過(guò)上述方法能夠有效選擇抗肺炎支原體IgG定性測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控物濃度，并建立批間連續(xù)質(zhì)控的延續(xù)方法。

肺炎支原體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；室內(nèi)質(zhì)控

室內(nèi)質(zhì)控是保證臨床檢驗(yàn)質(zhì)量的基本要求，定量檢測(cè)現(xiàn)通常采用Levey-Jennings質(zhì)控圖及Westgard質(zhì)控法則進(jìn)行室內(nèi)控制。實(shí)際工作中不同的試劑生產(chǎn)廠家間或同一廠家不同批間的定性酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定試劑盒在檢測(cè)同一份樣本的吸光度值或S/CO值常會(huì)出現(xiàn)較大差異，導(dǎo)致試劑盒更換時(shí)室內(nèi)質(zhì)控?zé)o法繼續(xù)，從而使得定性ELISA檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控成為難題[1，2]。通常定性ELISA檢測(cè)的質(zhì)控依賴試劑盒本身自帶的陰性、陽(yáng)性質(zhì)控血清進(jìn)行控制，但是因?yàn)樵噭┖兄性O(shè)定的陽(yáng)性對(duì)照物濃度較高，在監(jiān)測(cè)試驗(yàn)測(cè)定下限變化時(shí)靈敏度不足，所以需要選用外部對(duì)照物，即靠近陰陽(yáng)臨界的弱陽(yáng)性質(zhì)控物來(lái)控制，但具體到各實(shí)驗(yàn)室的多種定性ELISA檢測(cè)項(xiàng)目，究竟采用多少濃度的質(zhì)控血清較為合適，有待建立指導(dǎo)規(guī)則；而對(duì)于用不同批號(hào)試劑進(jìn)行連續(xù)的室內(nèi)質(zhì)控的問(wèn)題，同樣需要建立合適的規(guī)則來(lái)解決。

抗肺炎支原體IgG(MPG)檢測(cè)是臨床上診斷支原體肺炎的重要依據(jù)之一，本室開(kāi)展的定性MPG檢測(cè)為臨床提供診斷支持。作為定性實(shí)驗(yàn)的MPGELISA檢測(cè)同樣面臨著上述的質(zhì)控上的難題，即試劑盒配套陽(yáng)性質(zhì)控濃度過(guò)高和更換試劑盒時(shí)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)需要修正的問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的準(zhǔn)確性要求必須保障嚴(yán)格的質(zhì)量控制，為此我們通過(guò)查證文獻(xiàn)，結(jié)合試劑盒具體情況，建立了MPG-ELISA定性檢測(cè)弱陽(yáng)性質(zhì)控物的選擇方法及其室內(nèi)質(zhì)控在試劑不同批間連續(xù)進(jìn)行的方法。

室內(nèi)質(zhì)控通過(guò)試劑盒檢測(cè)系列質(zhì)控血清，通常的ELISA測(cè)定批間變異(CV%)需控制在15%左右，以往的研究[3-6]表明可選擇S/CO值減去在精密度測(cè)定中得到的3倍批間CV與該S/CO值的乘積(3SD)大于1.0的質(zhì)控血清作為監(jiān)測(cè)試驗(yàn)重復(fù)性的質(zhì)控物使用，同時(shí)選擇S/CO值處于1.5左右的質(zhì)控血清用來(lái)判斷試劑盒每次測(cè)定時(shí)檢測(cè)下限的有效性。

同一質(zhì)控物在不同批試劑的測(cè)定差異主要是由于測(cè)定下限及測(cè)定線性范圍的差異所致。根據(jù)試劑盒對(duì)一定范圍內(nèi)低濃度樣本檢測(cè)結(jié)果呈線性相關(guān)的原理，研究表明[3-6]在更換試劑盒時(shí)，使用新舊試劑盒同時(shí)檢測(cè)上述系列質(zhì)控血清，根據(jù)線性回歸得到直線方程，從而使新批號(hào)試劑盒檢測(cè)結(jié)果(S/CO)在其檢測(cè)線性范圍內(nèi)與舊批號(hào)結(jié)果之間(S/CO)得到一特定換算因子，從而可以順利地將新批號(hào)試劑盒質(zhì)控物測(cè)定值換算至原批號(hào)試劑測(cè)定值，即可繼續(xù)沿用原質(zhì)控圖而不必重新開(kāi)始，使批間質(zhì)控延續(xù)的問(wèn)題得到解決。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 MPG質(zhì)控血清(含量分別為15，25，50，100，200IU/ml)，購(gòu)于廣東亞輝龍生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：201404-1。

1.1.2 MPG檢測(cè)ELISA試劑盒為廣東亞輝龍生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，試劑批號(hào)分別為201403-1和201405-2。

1.1.3 儀器美國(guó)BIO-RAD 680型酶標(biāo)儀；BIORAD 1575型洗板機(jī)等。

1.2 方法

1.2.1 ELISA方法的精密度測(cè)定按MPG-ELISA試劑盒說(shuō)明，按照NCCLS EP5文件[7]進(jìn)行方法的精密度測(cè)定。

1.2.2 室內(nèi)質(zhì)控物濃度的確定首先用ELISA試劑盒測(cè)定上述系列MPG質(zhì)控血清(4孔重復(fù))，從測(cè)定S/CO值與濃度之間的關(guān)系可擬得一線性回歸直線方程y=ax+b。然后選擇計(jì)算得到的S/CO值減去前述精密度測(cè)定中得到的3倍批間CV與該S/ CO值的乘積(3SD)仍大于1的質(zhì)控物作為判斷實(shí)驗(yàn)室測(cè)定重復(fù)性的質(zhì)控物用；同時(shí)選擇S/CO值在1.5左右的質(zhì)控血清用以判斷每次測(cè)定時(shí)試劑盒的測(cè)定下限的有效性。

1.2.3 不同批次MPG試劑盒間檢測(cè)同一室內(nèi)質(zhì)控物在質(zhì)控圖上做圖的延續(xù)：當(dāng)更換新試劑盒時(shí)用新舊批號(hào)試劑盒同時(shí)測(cè)定上述系列質(zhì)控血清及所選用室內(nèi)質(zhì)控血清，從系列質(zhì)控血清的測(cè)定S/CO與其濃度之間的關(guān)系得到一新的線性回歸直線方程y2=a2x2+b2。當(dāng)上述選定MPG質(zhì)控帶入計(jì)算可得新試劑盒的y2與舊試劑盒試劑y1之間的換算關(guān)系。從而可將新批號(hào)試劑測(cè)定同一濃度質(zhì)控血清所得的S/CO換算回舊試劑所測(cè)的S/CO值，即可仍在原圖作圖。

2 結(jié)果

2.1 測(cè)定方法的精密度見(jiàn)表1。

表1 MPG ELISA測(cè)定方法的精密度

2.2 MPG-ELISA室內(nèi)質(zhì)控物濃度的選擇重復(fù)4孔測(cè)定上述系列(含量分別為0，15，25，50，100，200 IU/ml)質(zhì)控血清所得結(jié)果及回歸直線方程見(jiàn)表2。

為盡可能適應(yīng)方法學(xué)的測(cè)定線性范圍，以取前6個(gè)點(diǎn)所得回歸直線的相關(guān)系數(shù)最好，從而得到直線方程y=0.0376x-0.1008，如圖1。

表2 系列MPG質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果(S/CO)及回歸直戲方程

圖1 質(zhì)控物濃度與S/CO的直線回歸

分別以血清濃度15、25、50、100、200IU/ml代入方程，計(jì)算S/CO值為0.463、0.839、1.779、3.659、7.419。選擇其中S/CO大于1.0的三個(gè)控制物帶入計(jì)算，根據(jù)前面精密度評(píng)價(jià)中50IU/ml質(zhì)控物批間CV為7.59%，可知該質(zhì)控物得值1.779－3×1.779× 7.59%=1.374，大于1.0，因此可作為室內(nèi)質(zhì)控使用。而100IU/ml和200IU/ml的質(zhì)控物雖然能滿足該方法測(cè)定線性范圍的要求可以作為室內(nèi)質(zhì)控評(píng)價(jià)測(cè)定重復(fù)性使用，但二者離Cut-Off值距離更遠(yuǎn)一些。而50IU/ml質(zhì)控物的S/CO值接近1.5，離Cut-Off值較近，兼具有判斷試驗(yàn)重復(fù)性和檢測(cè)下限兩種功能，因而可以確定為較理想的定性質(zhì)控濃度。2.3不同試劑盒間室內(nèi)質(zhì)控圖作圖的延續(xù)按照以上對(duì)系列質(zhì)控血清精密度測(cè)定的評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)可以擬合該批試劑的直線回歸方程。在更換新試劑盒后按前述方法測(cè)定系列質(zhì)控血清再次得到類似的回歸直線方程，見(jiàn)表3。

兩試劑前4點(diǎn)，5點(diǎn)或前6點(diǎn)的相關(guān)性均較好，故可取前6分別得回歸直線方程y1=0.393x2-0.126(201403-1批)和y2=0.0376x1-0.1008 (201405-2批)。取質(zhì)控物含量x＝50IU/ml，得到y(tǒng)1= 1.834和y2=1.779，那么y2/y1=0.970，即作為新的試劑盒對(duì)室內(nèi)質(zhì)控物測(cè)定值(S/CO)與前一批試劑盒的換算因子，用新批號(hào)（201405-2批）試劑測(cè)值乘以該換算因子所得結(jié)果，即可在原質(zhì)控圖上延續(xù)作圖。

表3 不同批號(hào)MPG試劑間回歸直線方程的比較

3 討論

臨床實(shí)驗(yàn)室使用的諸多定性ELISA試劑盒自帶的陰性、陽(yáng)性對(duì)照物僅能監(jiān)測(cè)其試驗(yàn)的有效性，而無(wú)法監(jiān)測(cè)試驗(yàn)靈敏性和檢測(cè)下限的變化，所以需要使用外部弱陽(yáng)性質(zhì)控血清進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，科學(xué)地選擇質(zhì)控物濃度以保證檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。通常要求ELISA測(cè)定的批間變異(CV)在15%左右，故可選擇S/CO值減去精密度測(cè)定中得到的3倍批間CV與該S/CO值的乘積仍大于1的質(zhì)控血清作為判斷試驗(yàn)重復(fù)性的室內(nèi)質(zhì)控用，同時(shí)選擇S/CO處于1.5左右的質(zhì)控血清用以評(píng)價(jià)試劑盒測(cè)定下限的有效性。在本文的設(shè)計(jì)中我們通過(guò)計(jì)算得到了MPG質(zhì)控物的批間變異和直線回歸方程及相關(guān)系數(shù)，確定了50IU/ml作為該定性實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控物，同時(shí)兼具對(duì)檢測(cè)下限的監(jiān)控作用。在日常的MPG測(cè)定中其測(cè)值波動(dòng)表明臨界值附近的樣品有可能被誤判而出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性。因而必須通過(guò)以上規(guī)則合理的選擇質(zhì)控物濃度才能夠更有效地監(jiān)控試驗(yàn)的重復(fù)性及靈敏性，從而保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

室內(nèi)質(zhì)量控制不僅用來(lái)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，而且可以反映實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度[3]，因此室內(nèi)質(zhì)控是質(zhì)量控制的核心。通常定性ELISA測(cè)定以S/CO比值表示結(jié)果，與定量測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)濃度不同，S/CO只是相對(duì)的比值，因而同一濃度質(zhì)控物在使用不同測(cè)定下限的廠家試劑盒或同一廠家但批號(hào)不同的試劑檢測(cè)時(shí)其結(jié)果的差異可能發(fā)生較大變化[8]，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室使用的Levey-Jennings質(zhì)控圖對(duì)定性ELISA測(cè)定的質(zhì)控難以不間斷連續(xù)。為此諸多實(shí)驗(yàn)室通常采取Crubbs氏“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控[9]，但這種質(zhì)控方法有其固有的缺陷，即受前3個(gè)測(cè)定值影響較大，導(dǎo)致出現(xiàn)原先在控的結(jié)果在經(jīng)歷20次后反溯回去又變?yōu)槭Э氐默F(xiàn)象，此外該方法無(wú)法呈現(xiàn)直觀的質(zhì)控圖[10]。我們?cè)诠ぷ髦袇⒖枷嚓P(guān)研究結(jié)果，確認(rèn)同一質(zhì)控物經(jīng)不同批次試劑測(cè)定的差異主要是由于測(cè)定下限及測(cè)定線性范圍的差異所致，以及根據(jù)試劑盒對(duì)一定范圍內(nèi)低濃度樣本檢測(cè)結(jié)果呈線性相關(guān)的原理，在更換新批次MPGELISA試劑盒時(shí)使用新舊兩個(gè)批號(hào)試劑盒同時(shí)檢測(cè)系列質(zhì)控血清，通過(guò)擬合線性回歸所得的直線方程，得到新、舊批號(hào)試劑盒檢測(cè)結(jié)果(S/CO)在其檢測(cè)線性范圍內(nèi)的換算因子，從而可以準(zhǔn)確地將新試劑盒測(cè)定值換算至原試劑測(cè)定值，保持原質(zhì)控圖在批間延續(xù)。

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R446.62，R375+.2

A

1674-1129(2017)01-0068-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.01.020

2016-08-24；

2016-11-08)