戚紅霞

(上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院消化內(nèi)科， 上海 靜安區(qū) 200432)

CD133 β-catenin及hTERT在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床關(guān)聯(lián)性

戚紅霞

(上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院消化內(nèi)科， 上海 靜安區(qū) 200432)

目的：研究CD133、β-catenin及hTERT在胃癌表達(dá)及其臨床關(guān)聯(lián)性。方法：采用免疫組織化學(xué)法分別檢測從2015年2月至2016年3月，我院病理科收集的60例胃癌(A組)、60例癌前病變(B組)以及40例慢性非萎縮性胃炎(C組)組織標(biāo)本中CD133、β-catenin及hTERT表達(dá)情況，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示：CD133、β-catenin及hTERT在胃癌以及癌前病變中的陽性率均顯著高于胃炎，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而胃癌中陽性率又顯著高于癌前病變。A、B組的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)顯著高于C組，而A組又顯著高于B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0. 05)；腫瘤組織中CD133蛋白、β-catenin蛋白以及hTERT蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而在浸潤深度T3+T4中表達(dá)高于T1+T2中。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。經(jīng)相關(guān)性分析可得，CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān)。結(jié)論：CD133、β-catenin及hTERT的表達(dá)有胃癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移均存在密切相關(guān)，可作為臨床上早期診斷胃癌以及預(yù)后的參考指標(biāo)。

胃 癌； 免疫組織化學(xué)； β-連環(huán)蛋白； 人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶

本文通過研究CD133、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)及人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)在胃癌表達(dá)及其臨床關(guān)聯(lián)性，目的在于為臨床早期診斷胃癌提供新的參考指標(biāo)，并為胃癌早期治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：收集從2014年7月至2016年6月，我院手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診的胃癌標(biāo)本60例記為A組，其中男39例，女21例，年齡45～79歲，平均年齡59.8±5.1歲；其中發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移26例，未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移34例；浸潤深度為T1+T2的32例，T3+T4的28例，腺癌高中分化39例、低分化21例。另取同期內(nèi)鏡室活檢病理明確的60例癌前病變標(biāo)本(慢性萎縮性胃炎伴有大腸型化生或者輕、重度不典型增生)記為B組，其中男37例，女23例，年齡30～82歲，平均年齡57.2±5.1歲。同時再取40例慢性非萎縮性胃炎標(biāo)本記為C組，年齡35～76歲，平均年齡55.7±5.1歲。其中男24例，女16例，三組標(biāo)本在年齡、性別等基本資料對比無明顯差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法：采用免疫組織化學(xué)法分別檢測三組CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)情況，具體方法如下：所有標(biāo)本均進(jìn)行石蠟切片脫蠟，并使用PBS代替Ⅰ抗作為陰性對照，其中兔抗CD133和兔抗hTERT試劑均購于武漢博士德生物工程有限公司，兔抗βcatenin購自abcam。且按照1：100比例稀釋后進(jìn)行。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。采用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，待其脫水至透明后，應(yīng)用顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)[1]：①CD133結(jié)果判定：胞膜上出現(xiàn)CD133染色為棕黃色物質(zhì)為陽性細(xì)胞，隨機(jī)選取4個不同高倍視野下200個細(xì)胞，按照陽性染色細(xì)胞百分率分為0分：無陽性細(xì)胞；1分：百分率≤5%；2分：百分率5%～10%；3分：百分率10%～15%；4分：陽性率＞15%。陽性細(xì)胞≥10%的為CD133陽性，＜10%為CD133陰性。②β-catenin結(jié)果判定：以正常黏膜的表達(dá)情況作為對照，β-catenin主要定位于細(xì)胞膜，微量定位于細(xì)胞漿。染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為分別觀察細(xì)胞膜、細(xì)胞漿和細(xì)胞核的著色情況，將染色出現(xiàn)的范圍記為0-3分：0分為細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均未著色，1分為細(xì)胞膜染色為主，2分為細(xì)胞質(zhì)染色為主，3分為異質(zhì)性染色(細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)混合染色)或細(xì)胞核染色。將染色強(qiáng)度記為0-3分，無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，暗褐色為3分。得分=染色范圍X染色強(qiáng)度。免疫組化陽性表達(dá)信號為棕黃色細(xì)小顆粒狀，分別從細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核三方面判斷β-catenin在細(xì)胞內(nèi)的分布特征：若＜7O%癌細(xì)胞細(xì)胞膜陽性表達(dá)或＞10%癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核陽性表達(dá)則取結(jié)果為陽性(異常表達(dá))。而≥70%的細(xì)胞膜陽性表達(dá)且≤10%的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核出現(xiàn)陽性表達(dá)為陰性(正常表達(dá))。③hTERT結(jié)果判定：以切片中細(xì)胞核、細(xì)胞漿出現(xiàn)明確的棕黃色或淡黃色顆粒為陽性細(xì)胞，隨機(jī)選取4個不同高倍視野下200個細(xì)胞，按照陽性染色細(xì)胞百分率分為0分：百分率＜10%；1分：百分率10%～25%；2分：百分率25%～50%；3分：百分率＞50%。此外，根據(jù)染色強(qiáng)度分為0分：無色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。得分=染色范圍×染色強(qiáng)度。0 ～2分為陰性，＞2分為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件分析。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，計量資料以均數(shù)±標(biāo)注差(±s)表示，其比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組病理學(xué)分析

免疫組化染色：CD133組：胞膜上出現(xiàn)CD133染色為棕黃色物質(zhì)為陽性細(xì)胞。4個不同高倍(×400)光學(xué)顯微鏡下計數(shù)200個癌細(xì)胞，陽性細(xì)胞≥10%的為CD133陽性。

圖1 ?胃癌組織中CD133陽性率為81.67%(49/60)；?胃炎組織中CD133陽性率為17.5%(7/40)；?癌前病變組織中CD133陽性率為60.00%(36/60)；?(癌前病變組織與胃炎組織比較：χ2=19.000，p=0.000)

圖2 ?胃癌組織中β-catenin陽性率為73.33%(44/60)；?胃炎組織中β-catenin陽性率為15.0%(6/40)；?癌前病變組織中β-catenin陽性率為61.67%(37/60)；?(癌前病變組織與胃炎組織比較：χ2=24.242，p=0.000)

圖3 ?胃癌組織中hTERT陽性率為61.67%(37/60)；?胃炎組織中hTERT陽性率為10.0%(4/40)；?癌前病變組織中hTERT陽性率為31.67%(19/60)；?(癌前病變組織與胃炎組織比較：χ2=6.362，p=0.012)

2.2 三組CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)情況對比：A、B組的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)顯著高于C組，而A組又顯著高于B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)，見表2。結(jié)轉(zhuǎn)移，在浸潤深度T3+T4中表達(dá)高于T1+T2中。差 異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)，見表3。

表2 三組CD133 β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)對比(n，s))

表2 三組CD133 β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)對比(n，s))

組別 例數(shù) CD133 β-catenin hTERT A組 60 1.442±1.215 3.264±1.842 3.974±1.543 B組 60 0.847±0.835 1.639±1.293 2.338±1.345 C組 40 0.327±0.141 1.442±0.957 1.184±0.922 F -7.529 11.612 14.801 P -0.000 0.000 0.000

表3 CD133蛋白在胃癌中表達(dá)(n，s))

表3 CD133蛋白在胃癌中表達(dá)(n，s))

臨床病理參數(shù) 例數(shù) CD133表達(dá)水平 t P性別 男 39 1.472±1.422 0.181 0.857 21 1.405±1.249年齡 ≤60歲 32 1.463±1.305 0.132 0.896 ＞60歲 28 1.417±1.266淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有 26 2.265±1.147 3.215 0.002 無34 1.187±1.384分化程度 高中分化 39 1.412±1.356 0.166 0.868低分化 21 1.472±1.284浸潤深度 T1+T2 32 0.000±0.000 7.699 0.000 T3+T4 28 1.559±1.274 女

2.4 β-catenin蛋白在胃癌中表達(dá)情況：結(jié)果顯示，腫瘤組織中β-catenin蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在浸潤深度T3+T4中表達(dá)高于T1+T2中。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)，見表4。

表4 β-catenin蛋白在胃癌中表達(dá)(n，s))

表4 β-catenin蛋白在胃癌中表達(dá)(n，s))

臨床病理參數(shù) 例數(shù) β-catenin表達(dá)水平 t P性別 男 39 3.468±2.038 0.172 0.864 21 3.374±1.987年齡 ≤60歲 32 3.164±2.148 0.492 0.625 ＞60歲 28 2.894±1.781淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有 26 4.332±2.013 3.899 0.000 無34 2.478±1.669分化程度 高中分化 39 3.275±2.173 0.369 0.714低分化 21 3.482±1.874浸潤深度 T1+T2 32 2.148±1.537 4.741 0.000 T3+T4 28 4.322±2.008 女

2.5 hTERT蛋白在胃癌中表達(dá)情況：結(jié)果顯示，腫瘤組織中hTERT蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在浸潤深度T3+T4中表達(dá)高于T1+T2中。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)，見表5。

表5 hTERT蛋白在胃癌中表達(dá)情況(n，s))

表5 hTERT蛋白在胃癌中表達(dá)情況(n，s))

臨床病理參數(shù) 例數(shù) hTERT表達(dá)水平 t P性別 男 39 4.264±1.587 0.751 0.456 21 3.949±1.475年齡 ≤60歲 32 4.147±1.485 0.294 0.770 ＞60歲 28 4.038±1.375淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有 26 4.471±1.502 2.874 0.006 無34 3.243±1.518分化程度 高中分化 39 3.842±1.342 1.314 0.194低分化 21 4.325±1.389浸潤深度 T1+T2 32 2.341±1.162 5.874 0.000 T3+T4 28 4.305±1.427 女

2.6 CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性分析：經(jīng)相關(guān)性分析可得，CD133、β-catenin及 hTERT蛋白表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān)，見表6。

表6 CD133 β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性分析

3 討 論

近年來，隨著人們生活方式以及飲食習(xí)慣的不斷改變，我國胃癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重威脅人們的生命健康[2]。有研究報道顯示，臨床上首次就診的胃癌患者中，早期診斷率＜10%，其中85%以上患者為中晚期。導(dǎo)致這一結(jié)果發(fā)生的原因較多，但最主要的原因之一是臨床上缺乏特異性、敏感性較高的生物學(xué)指標(biāo)。目前，人們對胃癌及其癌前病變的研究日益重視，并取得一定的進(jìn)展。但胃癌的發(fā)生屬于多基因、多因素以及多階段長期作用的復(fù)雜過程，因此其具體的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。隨著相關(guān)研究的不斷深入，有報道顯示，胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中均伴有不同程度的癌基因異常激活與過度表達(dá)，提示了兩者存在密切相關(guān)[3]。而本文通過研究CD133、β-catenin及hTERT在胃癌表達(dá)及其臨床關(guān)聯(lián)性，旨在尋找一種可有效診斷癌前病變或早期胃癌的診斷指標(biāo)，并為臨床治療提供新思路，進(jìn)一步提高患者臨床預(yù)后以及生存率。

本文通過研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn) CD133、β-catenin及 hTERT三組在胃癌(A組)、癌前病變(B組)、慢性非萎縮性胃炎(C組)中的免疫組化陽性率存在明顯區(qū)別，A、B組陽性率顯著高于C組(P＜0.05)，且A組高于B組；同樣在A、B組的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)水平顯著高于C組，而A組又顯著高于B組。這與魏青林等的研究報道相似[4]，提示了CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展，可作為胃癌早期檢測的指標(biāo)。其中CD133屬于跨膜蛋白的一種，盡管目前對于其具體的生物學(xué)功能尚未明確，但隨著研究的不斷深入，近年來陸續(xù)研究報道表明其是一個最有價值的可用于篩選腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物之一，其主要特征是于胃癌胃旁組織以及原發(fā)組織中均有較高的表達(dá)。而β-catenin屬于一種多功能的蛋白質(zhì)，主要作用是參與了調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡等，且在其中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。且有研究報道顯示，β-catenin/TCF4屬于一種經(jīng)典的Wne通路，主要作用于胚胎發(fā)育過程中，且還與多種組織干細(xì)胞進(jìn)行自我更新與分化，與多種人類疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)[5]。hTERT與細(xì)胞端粒酶的活性息息相關(guān)，其中hTERT是構(gòu)成端粒酶復(fù)合物的活性成分催化亞單位，亦是端粒酶活化過程中的一種限制酶，主要是在端粒酶的激活以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵性作用。在本組研究中，CD133、β-catenin及hTERT三組在胃癌患者年齡、性別以及腺癌的分化程度之間無明顯差異，而腫瘤組織中CD133蛋白、β-catenin蛋白以及hTERT蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而在浸潤深度T3+T4中表達(dá)高于T1+T2中。這符合劉陽等的研究報道，表明了CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)與胃癌的轉(zhuǎn)移及浸潤程度存在密切相關(guān)，可作為檢測胃癌的預(yù)后的指標(biāo)之一。另外經(jīng)相關(guān)性分析可得，CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān)。這提示了三者可能存在協(xié)同作用，一起促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展，應(yīng)受到臨床重視，對其作用機(jī)制進(jìn)行更加深入的研究。

[1] Gonzalo V.Telomerase mRNA expression and immunohistochenical detection as a biomarker of malignant transfornation in patients with infalmmatory bowel disease[J].Gastroenterol Hepatol，2010，33(4)：288～296.

[2] 羅茜，王峰，申嫻娟，等.長鏈非編碼RNA在胃癌中的研究進(jìn)展[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，39(8)：578～580.

[3] 潘杰，汪偉民，蔡煒龍，等.下調(diào)gankyrin通過調(diào)節(jié)β-catenin/cyclin D1信號通路抑制胃癌細(xì)胞增殖[J].胃腸病學(xué)，2016，21(5)：282～286.

[4] 魏青林，張丹，楊仕明，等.端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶和Gli1、Gli2在胃癌中的表達(dá)及意義[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2015，37 (9)：902～906.

[5] 王一曌，郭琳，劉乙蒙，等.Rack1與β-catenin在胃癌組織中的表達(dá)與臨床意義[J].中國生化藥物雜志，2016，36 (3)：30～33.

Expression of CD133 β-catenin and hTERT in Gastric Carcinoma and the Clinical Relevance

QI Hongxia

(Jing'an District Central Hospital，Shanghai Jing'an District200432，China)

Objective：To study the expression of CD133，β-catenin and hTERT in gastric carcinoma and the clinical relevance.Methods：CD133 β-catenin and hTERT expression in tissue samples of 60 cases of gastric cancer(group A)，60 cases of precancerous lesions(group B)and 40 cases of chronic non-atrophic gastritis(group C)admitted in our hospital from February 2015 to March 2016 were detected by immunohistochemical method and analyzed.Results：The results of immunohistochemistry showed that the positive rates of CD133，β-catenin and hTERT in gastric cancer and precancerous lesions were significantly higher than those in gastritis，the difference was statistically significant(P＜0.05)，while the positive rate of gastric cancer was significantly higher than that of cancer precancerous lesion.The expression of A，B group CD133，β-catenin beta and hTERT protein was significantly higher than that in group C，while the A group was significantly higher than that in B group，the differences were statistically significant(P＜0.05)；CD133 protein in cancer tissues，β-catenin protein and hTERT protein in higher than that without lymph node metastasis in lymph node metastasis and expression.In the depth of invasion in T3+T4 was higher than that in T1+T2.The difference was statistically significant(P＜0.05).The correlation analysis showed that the expression levels of CD133，β-catenin and hTERT were positively correlated.Conclusion：The expression of CD133，β-catenin and hTERT are closely related to the stomach cancer occurrence，development，invasion and metastasis，which can be used as a clinical reference indexes of early diagnosis and prognosis of gastric cancer.

Gastric cancer； Immunohistochemistry； β-chain protein； Human telomerase reverse transcriptase

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.008

1006-6233(2017)01-0022-06

上海市閘北區(qū)衛(wèi)生科研面上一般項目，(編號：2014MS04)