張松瑤

（白城醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，吉林 白城 137000）

固相表面熒光光譜法，是將待測(cè)的組分吸附在固體基質(zhì)表面，進(jìn)行定性定量的表面的分析方法。運(yùn)用在藥物分析中，能夠快速準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)出藥物的成分，對(duì)固體樣品的測(cè)定靈敏度高。對(duì)于固相表面熒光分析技術(shù)，以對(duì)三硝基甲苯進(jìn)行定量分析為例，借助固相載體，使得分離技術(shù)能夠應(yīng)用在組分目標(biāo)以及復(fù)雜樣品基體之中，滿(mǎn)足對(duì)痕量組分以及微量組分進(jìn)行分析和監(jiān)測(cè)的需要，提高測(cè)定的選擇性和靈敏度。隨著順序注射和流動(dòng)注射分析廣泛應(yīng)用在樣品預(yù)處理上，采用固相表面熒光技術(shù)能夠提出痕量藥物的定量信息。

1 直接固相表面熒光法

將藥物樣品溶液點(diǎn)加在固體的基質(zhì)上，基本操作包括，在熒光儀上直接測(cè)定殘留在固相基質(zhì)表面的熒光光譜，設(shè)定為目標(biāo)組分，進(jìn)行定量和定性的分析[1]。常用的固相載體，包含濾紙、纖維素、聚氯乙烯等顆粒。采用直接固相表面熒光進(jìn)行樣品的測(cè)定，操作簡(jiǎn)單，分析的費(fèi)用較低，樣品的消耗量小，適用于大批量的樣品監(jiān)測(cè)。對(duì)于生物樣品四環(huán)素的含量，采用固相表面熒光分析的方法，將微量的藥物樣品1-UL放入加樣器中，經(jīng)過(guò)NAOH處理后，將樣品點(diǎn)加在硅膠G板上。能夠準(zhǔn)確地定量分析四環(huán)素的樣品的含量再10.2～1.0 ng之間。經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，常規(guī)固體的基質(zhì)，包括纖維素、硅膠等，表面的卡巴咪嗪是不發(fā)射熒光的，但是相同氨基基團(tuán)的尼龍膜的表面卻能夠發(fā)射強(qiáng)烈的熒光。因此，采用固相表面熒光分析的方法可以用于藥物試劑以及血清樣品的分析。也可以應(yīng)用在薄層色譜分離之后的熒光斑點(diǎn)檢測(cè)之中。例如將絲帕沙星和氟羅沙星在硅膠板上進(jìn)行熒光密度掃描，分離之后得到的檢測(cè)結(jié)果在0.5～85 ng以及0.5～100 ng之間。

2 固相表面熒光法與固相萃取分離富集聯(lián)用

固相表面熒光法與固相萃取分離富集聯(lián)用是進(jìn)行痕量藥物組分分析的方法，傳統(tǒng)的固相萃取操作是對(duì)于目標(biāo)藥物進(jìn)行定量和定性的檢測(cè)，但是固相基質(zhì)表面洗脫不完全的話，可能出產(chǎn)生結(jié)果的誤差，而且大量的洗脫劑會(huì)降解藥物的祖墳，使得藥物分子結(jié)構(gòu)發(fā)生了轉(zhuǎn)變，導(dǎo)致了分析結(jié)果出現(xiàn)了失真[2]。采用固相表面熒光法與固相萃取分離富集聯(lián)用的使用方法，可以避免溶劑效應(yīng)，減少分析過(guò)程中樣品的損失，而且有利于待測(cè)過(guò)程中，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

選擇合適的固相材料是這一方法的關(guān)鍵。在進(jìn)行藥物組分的富集過(guò)程中，對(duì)于固體基質(zhì)表面進(jìn)行室溫的熒光檢測(cè)，例如對(duì)諾氟沙星進(jìn)行樣品富集分離后，對(duì)固相表面熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，可以精確測(cè)定血樣和尿樣中的諾氟沙星含量。此測(cè)定方法，檢出的數(shù)量級(jí)比HPLC-FD法要有所降低。而采用針筒注射器將樣品溶液率進(jìn)行熒光基質(zhì)的檢測(cè)，也能保證靈敏度。

采用固相萃取分離富集與固相表面熒光聯(lián)用的技術(shù)，是在無(wú)法采用常規(guī)熒光方法的前提下進(jìn)行檢測(cè)的方法。利用該方法對(duì)速尿靈進(jìn)行檢測(cè)，使用尼龍膜將藥物祖墳的樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)，阿米洛利被尼龍膜進(jìn)行富集，速尿靈被保留在濾液中。直接檢測(cè)的結(jié)果顯示熒光發(fā)射強(qiáng)度增強(qiáng)，同濃度的阿米洛利阿米洛利在溶液中檢測(cè)不到熒光反射峰。最終的結(jié)果，阿米洛利的富集倍率可以達(dá)到1500倍，對(duì)于痕量阿米洛利的分析測(cè)定非常適用。

3 在線固相表面熒光分析法

采用在線固相表面分析的方法，具有常規(guī)固相表面熒光分析法不具備的優(yōu)勢(shì)。由于常規(guī)的方法操作中具有不連續(xù)性。分析的結(jié)果往往會(huì)出現(xiàn)重現(xiàn)性，因此，在線化和自動(dòng)化能夠讓流動(dòng)注射和順序注射更加方便地進(jìn)行。顯著提高分析過(guò)程的速度和可靠性。經(jīng)過(guò)監(jiān)測(cè)，對(duì)于氨和尿素的分析監(jiān)測(cè)，能夠保證粒徑均一的固相基質(zhì)能夠填入流通池中，具體操作的裝置被成為在線固相表面熒光檢測(cè)裝置，步驟為：目標(biāo)組分使用原位固相光譜進(jìn)行檢測(cè)，采用自動(dòng)化程度較高的分析方法，分離基體和目標(biāo)組分?？s短分析時(shí)間，降低樣品消耗，實(shí)現(xiàn)固相基質(zhì)材料在流動(dòng)分析系統(tǒng)中的再生和循環(huán)利用，提高分析過(guò)程的自動(dòng)化程度[3]。

4 結(jié) 語(yǔ)

固相基質(zhì)材料的合理選擇，為固相表面熒光分析以及聯(lián)用技術(shù)提供了支持[4]。當(dāng)前，采用的材料包括硅膠、尼龍膜等，對(duì)于藥物組分的分析較為有限。因此，未來(lái)應(yīng)多多開(kāi)發(fā)新型的固相基質(zhì)材料，能夠更好地合成光學(xué)透明度，對(duì)藥物進(jìn)行選擇性吸附。同時(shí)，提高基質(zhì)材料的化學(xué)改性以及進(jìn)行表面的修飾，降低其熒光背景，也是拓展藥物分析領(lǐng)域中固相表面熒光分析方法功能的途徑。采用這種方法運(yùn)用到的檢測(cè)裝置要求能夠完成檢測(cè)、富集和分離，應(yīng)對(duì)復(fù)雜的樣品基體。同時(shí)，發(fā)展在線分析模式，增強(qiáng)增敏分析和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù)也是當(dāng)務(wù)之急。相信隨著在線液流操控技術(shù)以及可更新表面技術(shù)的拓展，更多藥物樣品以及試劑的檢測(cè)，將通過(guò)固相表面熒光分析的方法獲得更為精確的結(jié)果。

[1] 陳 劍.尼龍6納米纖維膜的制備及在水體多環(huán)芳烴快速檢測(cè)中的應(yīng)用[D].揚(yáng)州大學(xué),2016.

[2] 陳 瑤.新型光譜定量分析模型及其在復(fù)雜多相體系中的應(yīng)用研究[D].湖南大學(xué),2015.

[3] 楊 靜.納米材料用于有機(jī)污染物的磁固相萃取和光催化降解[D].南京大學(xué),2014.

[4] 張 普.銀、金納米團(tuán)簇的合成及其在生化分析中的應(yīng)用研究[D].西南大學(xué),2014.