縱 帥，徐萍萍，顧 兵，郝婷婷，寇艷波，徐銀海

(1 徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院， 江蘇 徐州 221002； 2 徐州市中心醫(yī)院，江蘇 徐州 221002； 3 徐州醫(yī)科大學(xué)感染與免疫實(shí)驗(yàn)室，江蘇 徐州 221004)

·論著·

徐州地區(qū)116株MRSA耐藥性分析與分子流行病學(xué)調(diào)查

縱 帥1，徐萍萍2，顧 兵1，郝婷婷1，寇艷波3，徐銀海1

(1 徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院， 江蘇 徐州 221002； 2 徐州市中心醫(yī)院，江蘇 徐州 221002； 3 徐州醫(yī)科大學(xué)感染與免疫實(shí)驗(yàn)室，江蘇 徐州 221004)

目的 了解耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)感染現(xiàn)狀和耐藥機(jī)制，為臨床合理用藥提供依據(jù)。方法 收集徐州地區(qū)2012—2015年各類標(biāo)本中分離的金黃色葡萄球菌(SA)，用頭孢西丁紙片擴(kuò)散法初篩MRSA菌株，擴(kuò)增mecA基因進(jìn)行確認(rèn)，K-B法檢測(cè)MRSA對(duì)藥物的敏感性，E-test法測(cè)定萬古霉素的最低抑菌濃度(MIC)，采用多重PCR進(jìn)行葡萄球菌染色體mec(SCCmec)基因分型。結(jié)果 2012—2015年210株SA共檢出MRSA 116株，其中mecA基因陽性114株，MRSA總檢出率為55.24%。MRSA對(duì)萬古霉素、奎奴普丁/達(dá)福普汀、替考拉寧和利奈唑胺的敏感率均為100%，對(duì)氯霉素和呋喃妥因的耐藥率最低，分別為15.52%、1.72%，MRSA對(duì)10種抗菌藥物的耐藥率>80%；MRSA對(duì)青霉素類、氨基糖苷類、紅霉素、喹諾酮類、磺胺類、利福平、四環(huán)素、克林霉素的耐藥率高于甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(MSSA)。2012—2015年萬古霉素對(duì)MRSA的MIC均為1.0 μg/mL，MIC90均為1.5 μg/mL，2015年發(fā)現(xiàn)1株MRSA的萬古霉素MIC為2.0 μg/mL。116株MRSA分型結(jié)果顯示，SCCmecII型11株(9.48%)，SCCmecIII型85株(73.28%)，SCCmecIV型4株(IVa和IVb型各2株，均為1.72%)，未分型MRSA 16株(13.79%)，未檢出SCCmecI和V型。結(jié)論 MRSA呈嚴(yán)重的多重耐藥，對(duì)萬古霉素MIC無漂移，臨床MRSA分離株以SCCmecIII型為主，臨床應(yīng)采取感染控制措施，控制MRSA感染。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌； MRSA； 耐藥性； 最低抑菌濃度； MIC； 葡萄球菌染色體mec盒； SCCmec

[Chin J Infect Control，2017，16(2)：104-108]

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureu, MRSA)是目前引起醫(yī)院感染最重要的革蘭陽性菌之一，文獻(xiàn)[1]報(bào)道，甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(methicillin-sensitiveStaphylococcusaureus,MSSA)獲得外源性mecA產(chǎn)生耐藥成為MRSA，存在于葡萄球菌染色體mec盒(SCCmec)的mecA基因編碼新的青霉素結(jié)合蛋白PBP2a，降低其與β-內(nèi)酰胺類抗生素的親合力，而產(chǎn)生耐藥。SCCmec還可攜帶除mecA基因外的其他耐藥基因，造成多藥耐藥(multidrug-resistance， MDR)。SCCmec目前主要分為8型，基因型與MRSA的流行背景有關(guān)，不同SCCmec型別的菌株結(jié)構(gòu)、耐藥性和流行特點(diǎn)不同，不同地區(qū)的SCCmec基因型分布可能不同。本研究對(duì)徐州地區(qū)的MRSA進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，明確本地區(qū)MRSA的耐藥表型和分子流行病學(xué)特征，為臨床提供相關(guān)依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 菌株來源 210株金黃色葡萄球菌(SA)分離自本地區(qū)4所三級(jí)綜合性醫(yī)院2012—2015年臨床送檢的痰、血和分泌物等標(biāo)本，經(jīng)培養(yǎng)、分純和微生物全自動(dòng)鑒定系統(tǒng)鑒定，除去同一患者分離的重復(fù)菌株，初步鑒定為MRSA后-80 ℃保存。質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 29213，購(gòu)自國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心，MRSA陽性對(duì)照菌株為北京大學(xué)人民醫(yī)院王輝教授饋贈(zèng)。

1.2 主要試劑與儀器 VITEK 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定分析系統(tǒng)為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品，MyCycler PCR熱循環(huán)儀、電泳儀和凝膠成像系統(tǒng)均為美國(guó)伯樂(Bio-Rad)公司產(chǎn)品，TaKaRa PCR Amplification Kit和瓊脂糖購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司，GelGreen核酸染料和DL2000 Plus DNA Marker購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司，所有藥敏紙片為英國(guó)OXOID公司產(chǎn)品，E-test試紙條為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3 藥敏試驗(yàn) 紙片擴(kuò)散法(K-B法)檢測(cè)MRSA對(duì)臨床常用的19種抗菌藥物的敏感性，檢測(cè)抗菌藥物為青霉素、苯唑西林、阿莫西林、氧氟沙星、諾氟沙星、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、紅霉素、克林霉素、慶大霉素、四環(huán)素、磺胺甲口惡唑、復(fù)方磺胺甲口惡唑、氯霉素、利福平、呋喃妥因、奎奴普丁/達(dá)福普汀、替考拉寧和利奈唑胺。所有折點(diǎn)判斷采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)2015標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 初步鑒定 采用CLSI 2015版標(biāo)準(zhǔn)推薦的頭孢西丁(30 μg/片)K-B法，紙片抑菌環(huán)直徑≤21 mm判定為MRSA。

1.5 萬古霉素MIC檢測(cè) 選用萬古霉素E-test試劑條對(duì)初步鑒定的MRSA進(jìn)行MIC測(cè)定。根據(jù)MIC測(cè)定結(jié)果，分別統(tǒng)計(jì)出MIC幾何均值、MIC50、MIC90和MIC范圍。

1.6 MRSA確認(rèn)試驗(yàn) 初步鑒定的菌株采用煮沸法提取基因組DNA，利用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定其濃度和純度，用PCR擴(kuò)增mecA基因。PCR反應(yīng)體系為25 μL，內(nèi)含2.5 mmol/L dNTP Mixture 2 μL、250 nmol/L上下游引物各0.5 μL、5 U/μL TakaRa-Taq酶0.25 μL、100 ng DNA模板0.5 μL、10×PCR緩沖液(pH8.3)2.5 μL，余用滅菌蒸餾水補(bǔ)齊。PCR反應(yīng)條件：94℃10 min預(yù)變性；94℃ 30 s，54℃退火45 s，72℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；最后72℃再延伸5 min。PCR產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠(含1%GelGreen)中電泳，電壓5 V/cm，電泳30 min，在凝膠成像系統(tǒng)成像。引物見表1。

1.7 SCCmec基因分型 用多重PCR進(jìn)行SCCmec基因分型，參照Zhang等[2]的方法進(jìn)行。PCR反應(yīng)體積為50 μL，包括2.5 mmol/L dNTP Mixture 4 μL，250 nmol/L上下游引物各0.5 μL，5 U/μL TakaRa-Taq酶 0.5 μL，DNA模板各1 μL，10×PCR緩沖液(pH 8.3)5 μL，余用滅菌蒸餾水補(bǔ)齊。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，52 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃再延伸10 min。PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中電泳，電泳條件同mecA基因。引物見表1。

表1mecA 及SCCmec基因PCR擴(kuò)增引物及其產(chǎn)物大小

Table 1 PCR amplification primer and size of products ofmecA and SCCmecgenes

目的基因引物序列(5’-3’)產(chǎn)物長(zhǎng)度(bp)mecAF:GTAGAAATGACTGAACGTCCGATAA310R:CCAATTCCATGTTTCGGTCTAASCCmecIF:GCTTTAAAGAGTGTCGTTACAGG613R:GTTCTCTCATAGTATGACGTCCSCCmecIIF:CGTTGAAGATGATGAAGCG398R:CGAAATCAATGGTTAATGGACCSCCmecIIIF:CCATATTGTGTACGATGCG280R:CCTTAGTTGTCGTAACAGATCGSCCmecIVaF:GCCTTATTCGAAGAAACCG776R:CTACTCTTCTGAAAAGCGTCGSCCmecIVbF:TCTGGAATTACTTCAGCTGC493R:AAACAATATTGCTCTCCCTCSCCmecIVcF:ACAATATTTGTATTATCGGAGAGC200R:TTGGTATGAGGTATTGCTGGSCCmecIVdF:CTCAAAATACGGACCCCAATACA881R:TGCTCCAGTAATTGCTAAAGSCCmecVF:GAACATTGTTACTTAAATGAGCG325R:TGAAAGTTGTACCCTTGACACC內(nèi)標(biāo)基因mecA147F:GTGAAGATATACCAAGTGATT147R:ATGCGCTATAGATTGAAAGGAT

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用WHONET 5.6軟件和SPSS 11.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，MIC均值比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 MRSA檢出率 經(jīng)頭孢西丁紙片初篩試驗(yàn)，2012—2015年210株SA共檢出116株MRSA，檢出率為55.24%；4年分別檢出MRSA 23、25、33、35株，檢出率分別為57.50%、52.08%、56.90%、54.69%，4年間檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.35，P=0.95)。見表2。

表2 2012—2015年分離的SA中MRSA檢出情況

Table 2 Detection of MRSA among SA isolated in 2012-2015

年份SA株數(shù)MRSA株數(shù)檢出率(%)χ2P2012402357.500.350.952013482552.082014583356.902015643554.69合計(jì)21011655.24

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 MRSA對(duì)萬古霉素、奎奴普丁/達(dá)福普汀、替考拉寧和利奈唑胺的敏感率為100%；MRSA對(duì)氯霉素和呋喃妥因的耐藥率最低，分別為15.52%和1.72%，MRSA對(duì)檢測(cè)的10種抗菌藥物的耐藥率>80%。MRSA對(duì)青霉素類、氨基糖苷類、紅霉素、喹諾酮類、磺胺類、利福平、四環(huán)素、克林霉素的耐藥率高于MSSA，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。見表3。

表3 MRSA和MSSA對(duì)20種抗菌藥物的耐藥率(%)

Table 3 Resistance rates of MRSA and MSSA to 20 kinds of antimicrobial agents(%)

抗菌藥物MRSA(n=116)MSSA(n=94)χ2P青霉素100.0081.9122.830.00苯唑西林100.000.00210.000.00阿莫西林94.8315.96134.060.00慶大霉素85.3411.70112.890.00萬古霉素0.000.00--替考拉寧0.000.00--奎奴普丁/達(dá)福普汀0.000.00--利奈唑胺0.000.00--四環(huán)素82.7625.5369.440.00氯霉素15.528.512.350.13紅霉素87.0747.8737.650.00克林霉素69.8339.3619.580.00環(huán)丙沙星88.7921.2897.540.00氧氟沙星93.9712.77140.200.00諾氟沙星90.5214.89120.930.00左氧氟沙星88.795.32144.840.00呋喃妥因1.720.00-0.50*復(fù)方磺胺甲口惡唑60.3428.7220.890.00磺胺甲口惡唑56.9029.7915.430.00利福平38.796.3829.660.00

*：采用Fisher 精確概率法

2.3 萬古霉素對(duì)MRSA的MIC 2012—2015年萬古霉素對(duì)MRSA 的MIC50均為1.0 μg/mL，MIC90均為1.5 μg/mL；2012—2014年MIC 范圍為(0.5～1.5)μg/mL，2015年MIC 范圍為(0.5～2.0)μg/mL。2015年發(fā)現(xiàn)1株MRSA的萬古霉素MIC為2.0 μg/mL；2012—2015年萬古霉素對(duì)MRSA的MIC幾何均值分別為1.15、1.09、1.24和1.26 μg/mL，4年幾何均值總體比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.35，P=0.18)。見表4。

表4 2012—2015年萬古霉素對(duì)MRSA的MIC(μg/mL)

Table 4 MICs of vancomycin to MRSA strains in 2012-2015(μg/mL)

年份MIC范圍MIC的幾何平均值MIC50MIC9020120.5～1.51.151.01.520130.5～1.51.091.01.520140.5～1.51.241.01.520150.5～2.01.261.01.5

2.4 MRSA確認(rèn)試驗(yàn) 116株頭孢西丁檢測(cè)為MRSA，其中114株菌mecA基因PCR擴(kuò)增為陽性，在310 bp有目的條帶。見圖1。

M：DL2000 DNA Marke；1：陰性對(duì)照；2：陽性對(duì)照；3—16：臨床菌株mecA基因陽性

圖1 MRSAmecA基因PCR產(chǎn)物電泳圖

Figure 1 PCR product electrophoresis map of MRSAmecA gene

2.5 SCCmec分型結(jié)果 116株MRSA多重PCR分型結(jié)果顯示，SCCmecII型11株(9.48%)，SCCmecIII型85株(73.28%)，SCCmecIV型4株(IVa和IVb型各2株，均為1.72%)，僅內(nèi)標(biāo)基因陽性的未分型MRSA 16株(13.79%)，未檢出SCCmecI和SCCmecV型。見圖2。

M：DL2000 DNA Marker； 1：陰性對(duì)照；2—3：未分型；4—5：SCCmecII型；6—7：SCCmecIII型；8—9：SCCmecIVa型；10—11：SCCmecIVb型

圖2 MRSA SCCmec多重PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖

Figure 2 Agarose gel electrophoresis map of multiplex PCR product of MRSA SCCmec

3 討論

MRSA是目前世界性醫(yī)院感染的重要病原菌，多呈多重耐藥，MRSA感染的治療是臨床十分棘手的難題。本研究210株SA檢出116株MRSA，檢出率為55.24%，2012—2015年檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在國(guó)內(nèi)外處于較高水平[3-4]，高檢出率除與規(guī)范化送檢有關(guān)外，還提示該地區(qū)MRSA感染情況較嚴(yán)重。研究[5]表明，地區(qū)性的持續(xù)性協(xié)同預(yù)防和數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)可以有效阻斷MRSA傳播。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，MRSA對(duì)氯霉素和呋喃妥因的耐藥率最低，分別為15.52%、1.72%，MRSA對(duì)檢測(cè)的10種抗菌藥物的耐藥率>80%，說明多重耐藥情況嚴(yán)重。MRSA對(duì)萬古霉素、奎奴普丁/達(dá)福普汀、替考拉寧和利奈唑胺的敏感率為100%，未發(fā)現(xiàn)耐藥株，可作為MRSA感染初次治療的首選藥物。本研究中MRSA耐藥率高于MSSA，表明MRSA的耐藥情況總體比MSSA更嚴(yán)重，且MRSA感染可導(dǎo)致更高的病死率和更長(zhǎng)的住院時(shí)間[6]，MRSA形成機(jī)制使其更易發(fā)生醫(yī)院感染，因此臨床治療MRSA感染時(shí)要重視藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏結(jié)果合理選用抗菌藥物，同時(shí)根據(jù)患者感染情況制定差異化治療方案[7]，防止或延緩強(qiáng)耐藥株的出現(xiàn)。

萬古霉素仍是目前臨床治療MRSA的最重要抗菌藥物，臨床上將萬古霉素對(duì)MRSA仍敏感但其MIC逐年上升的現(xiàn)象稱 “MIC漂移”。 本研究發(fā)現(xiàn)本地區(qū)2012—2015年萬古霉素MIC未發(fā)生漂移，但隨著萬古霉素使用劑量、時(shí)間、強(qiáng)度和頻度的增加，萬古霉素對(duì)MRSA耐藥壓力選擇增加，不能排除本地區(qū)對(duì)MRSA的敏感性有下降趨勢(shì)。萬古霉素MIC≥1.5 μg/mL稱為高M(jìn)IC。研究[8]表明，高M(jìn)IC與MRSA感染患者治療失敗率和病死率密切相關(guān)，高M(jìn)IC存在潛在的治療失敗風(fēng)險(xiǎn)。臺(tái)灣地區(qū)對(duì)123例MRSA感染患者的研究[9]結(jié)果表明，萬古霉素MIC為2 μg/mL的患者平均住院時(shí)間、醫(yī)療費(fèi)用和病死率均高于MIC<2 μg/mL的患者，因此應(yīng)監(jiān)控高M(jìn)IC MRSA感染者，尤其是萬古霉素MIC為2 μg/mL的，降低其感染病死率。

SA獲得外源性基因mecA成為MRSA，因此把mecA基因作為MRSA的分子標(biāo)志，作為鑒定MRSA的“金標(biāo)準(zhǔn)”[10]。近年發(fā)現(xiàn)，MRSA形成除與mecA基因有關(guān)外，某些MRSA還表達(dá)mecA同源性基因mecB和mecC[1，11]，MRSA形成機(jī)制復(fù)雜。本研究經(jīng)頭孢西丁紙片擴(kuò)散法116 株SA鑒定為MRSA，其中114株攜帶mecA基因，兩種方法符合率為98.28%，另2株經(jīng)頭孢西丁紙片擴(kuò)散法(K-B法)、苯唑西林MIC法和PBP2α膠乳凝集法檢測(cè)均鑒定為MRSA，提示 MRSA存在除mecA外的其他耐藥機(jī)制。

SCCmec是一種攜帶mecA基因的可移動(dòng)遺傳元件，根據(jù)其復(fù)合體組成不同可將SCCmec分為11個(gè)亞型[12]，其中SCCmecI—V型是常見的類型。本研究根據(jù)SCCmec各亞型的特異性片段設(shè)置引物，通過多重PCR擴(kuò)增常見的5種SCCmec基因型，多重PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果除內(nèi)標(biāo)基因外，每株細(xì)菌僅擴(kuò)增出一個(gè)特異性片段，提示本研究所有分型菌株均只攜帶SCCmec的1個(gè)亞型，其中SCCmecIII型占73.28%，為最主要型別，SCCmecII基因型占9.48%，另有4株為SCCmecIV。116株MRSA菌株中100株(86.21%)屬SCCmecII-IV型，與國(guó)內(nèi)某些地區(qū)研究[13]結(jié)果相似，但基因型存在明顯的地區(qū)性差異，如杭州地區(qū)SCCmec基因分型以Ⅱ型為主，III型次之[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，SCCmecII型基因和SCCmecIII型基因分子結(jié)構(gòu)長(zhǎng)，攜帶多種耐藥基因[11]，與多重耐藥相關(guān)，是主要的MRSA型別。本組MRSA對(duì)多數(shù)抗菌藥物耐藥率均>50%，除氯霉素和呋喃妥因外，MRSA耐藥率均高于MSSA(均P<0.01)，進(jìn)一步提示MRSA嚴(yán)重的多重耐藥可能與攜帶mecA及其他耐藥基因相關(guān)。

本組研究檢測(cè)了徐州地區(qū)MRSA的耐藥表型，萬古霉素MIC漂移情況和SCCmec基因型，對(duì)確定本地區(qū)MRSA優(yōu)勢(shì)菌株的分子流行病學(xué)特征、臨床治療和感染控制均具有重要意義。

[1] Hiramatsu K, Ito T, Tsubakishita S, et al. Genomic basis for methicillin resistance inStaphylococcusaureus[J]. Infect Chemother, 2013, 45(2): 117-136.

[2] Zhang K, McClure JA, Elsayed S, et al. Novel multiplex PCR assay for characterization and concomitant subtyping of staphylococcal cassette chromosomemectypes I to V in methicillin-resistantStaphylococcusaureus[J]. J Clin Microbiol, 2005, 43(10): 5026-5033.

[3] 申桂娟，陸軍，祝進(jìn)，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的臨床分布與耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24(2): 282-284.

[4] Grema H, Geidam Y, Gadzama G, et al. Methicillin resistantStaphyloccusaureus(MRSA): a review[J]. Adv Anim Vet Sci, 2015, 3(2): 79-98.

[5] Jurke A, Kock R, Becker K, et al. Reduction of the nosocomial methicillin-resistantStaphylococcusaureusincidence density by a region-wide search and follow-strategy in forty German hospitals of the EUREGIO, 2009 to 2011[J]. Euro Surveill, 2013, 18(36): pii=20579.

[6] de Kraker ME, Wolkewitz M, Davey PG, et al. Clinical impact of antimicrobial resistance in European hospitals: excess mortality and length of hospital stay related to methicillin-resistantStaphylococcusaureusbloodstream infections[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2011, 55(4): 1598-1605.

[7] Gould IM, David MZ, Esposito S, et al. New insights into methicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA) pathogenesis, treatment and resistance[J]. Int J Antimicrob Agents, 2012, 39(2): 96-104.

[8] Jacob JT, DiazGranados CA. High vancomycin minimum inhibitory concentration and clinical outcomes in adults with methicillin-resistantStaphylococcusaureusinfections: a meta-analysis[J]. Int J Infect Dis, 2012, 17(2): e93-e100.

[9] Wang JL, Wang JT, Sheng WH, et al. Nosocomial methicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA) bacteremia in Taiwan: mortality analyses and the impact of vancomycin, MIC = 2 mg/L, by the broth microdilution method[J]. BMC Infect Dis, 2010, 10: 159.

[10] Chowdhury D, Jhora ST, Paul S, et al. Comparison of cefoxitin and oxacillin disc diffusion test for the detection ofmecA mediated methicillin resistance inStaphylococcusaureus[J]. Bangladesh J Med Microbiol, 2013, 7(1): 7-10.

[11] Paterson GK, Harrison EM, Holmes MA. The emergence ofmecC methicillin-resistantStaphylococcusaureus[J]. Trends Microbiol, 2014, 22(1): 42-47.

[12] 楊延成，程航，周人杰，等. SCCmec遺傳元件及其在耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分子分型中的應(yīng)用[J]. 遺傳，2015，37(5): 442-451.

[13] 趙彩蕓，呂媛，李耘，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌SCCmec分型與耐藥性研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21(15): 3102-3105.

[14] 楊永剛，陳瑜，陳曉，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分型及流行現(xiàn)狀[J].微生物學(xué)通報(bào)，2015，42(1): 110-116.

(本文編輯：豆清婭)

Antimicrobial resistance and molecular epidemiology of 116 strains of methicillin-resistantStaphylococcusaureuin Xuzhou area

ZONGShuai1,XUPing-ping2,GUBing1,HAOTing-ting1,KOUYan-bo3,XUYin-hai1

(1TheAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalUniversity,Xuzhou221002,China； 2XuzhouCentralHospital,Xuzhou221002,China； 3InfectionandImmunityLaboratoryofXuzhouMedicalUniversity,Xuzhou221004,China)

Objective To investigate infection status and antimicrobial resistance mechanism of methicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA)，and provide reference for the rational antimicrobial use in clinic. MethodsStaphylococcusaureus(SA) isolated from various specimens in Xuzhou area in 2012-2015 were collected, MRSA strains were preliminarily screened by cefoxitin disk diffusion method, and confirmed by amplification ofmecA gene, antimicrobial resistance of MRSA was determined by Kirby-Bauer method, minimal inhibitory concentration (MIC) was measured by E-test method, genotypes of staphylococcal chromosomal cassettemec(SCCmec) were determined by multiplex PCR. Results A total of 116 strains of MRSA were identified among 210 SA strains in 2012-2015，114 of which were positive formecA gene, the total detection rate of MRSA was 55.24%. Susceptibility rates of MRSA to vancomycin， quinupristin/ dalfopristin, and linezolid were all 100%， resistance rates of MRSA to chloramphenicol and furantoin were both low, which were 15.52% and 1.72% respectively, resistance rates of MRSA to 10 kinds of antimicrobial agents were all>80%; resistance rates of MRSA to penicillins, aminoglycosides, macrolides, quinolones, sulfanilamide, rifampicin, tetracycline, and clindamycin were all higher than methicillin-sensitiveStaphylococcusaureus(MSSA). MICs of vancomycin to MRSA in 2012-2015 were all 1.0 μg/mL，MIC90were all 1.5 μg/mL， one MRSA isolate was with a vancomycin MIC of 2.0 μg/mL in 2015. MRSA typing results of 116 MRSA isolates showed that SCCmecII, SCCmecIII， and SCCmecIV accounted for 9.48%(n=11), 73.28%(n=85)，and 1.72%(Iva,n=2; IVb,n=2) respectively, 13.79%(n=16) of MRSA isolates were nontypeable, SCCmecI and SCCmecV type strains were not found. Conclusion MRSA is seriously multidrug-resistant，the drift has not been discovered in MIC value of vancomycin against MRSA, the major SCCmecgenotype of MRSA is SCCmecIII， infection control measures should be taken to control MRSA infection.

methicillin-resistantStaphylococcusaureus; MRSA; drug resistance; minimal inhibitory concentration; MIC; staphylococcal chromosomal cassettemec； SCCmec

2016-05-30

徐州市科技局資助項(xiàng)目(KC14SH116)

縱帥(1981-)，男(漢族)，江蘇省徐州市人，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥機(jī)制研究。

徐銀海 E-mail：1755789156@qq.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.02.002

R181.3+2 R378.1+1

A

1671-9638(2017)02-0104-05