趙紫平

(甘肅省臨夏中學(xué) 731100)

1 提出問(wèn)題

細(xì)胞骨架是細(xì)胞重要的結(jié)構(gòu)，它是由蛋白質(zhì)絲組成的復(fù)雜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)其組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)可分為微管、微絲和中間纖維，它們對(duì)于細(xì)胞形態(tài)的維持，細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化、物質(zhì)運(yùn)輸、能量轉(zhuǎn)換、信息交流和基因表達(dá)等起到重要的作用。在高中階段，涉及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的基本實(shí)驗(yàn)有細(xì)胞膜的制備、線(xiàn)粒體和葉綠體的觀(guān)察以及DNA和RNA在細(xì)胞中的分布等實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，有利于學(xué)生對(duì)細(xì)胞的整體結(jié)構(gòu)和部分細(xì)胞器有一定的了解。但是如果真正要讓學(xué)生對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有整體的了解，還應(yīng)該開(kāi)設(shè)“細(xì)胞骨架的顯示和觀(guān)察”實(shí)驗(yàn)。然而對(duì)大多數(shù)的普通高中來(lái)說(shuō)，沒(méi)有條件和設(shè)備來(lái)支持完成細(xì)胞骨架的顯示和制備。按照高中對(duì)于實(shí)驗(yàn)要求來(lái)說(shuō)，只要能顯示和觀(guān)察就可以，所以可以進(jìn)行如下的簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)原理

用適當(dāng)濃度的Triton X-100處理細(xì)胞時(shí)，可將細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)溶解抽提，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不受到破壞而得到保存，經(jīng)戊二醛固定處理和考馬斯亮藍(lán)R250染色后，能在光鏡下觀(guān)察到由微絲組成的微絲束為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，就是細(xì)胞骨架。

3 實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 儀器用具 顯微鏡、燒杯、玻璃滴管、容量瓶、試劑瓶、鑷子、剪刀、載玻片、蓋玻片、吸水紙等。

3.2 實(shí)驗(yàn)試劑 6 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)、M-緩沖液、1% Triton X-100液、3%戊二醛、0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染料、1/15 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)，實(shí)驗(yàn)材料可以選洋蔥鱗葉。

3.3 具體步驟 ①取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，用剪刀剪成約1 cm2大小，置于裝有pH 6.8磷酸緩沖液的50 mL燒杯中，使其下沉；②用吸管吸去磷酸緩沖液，用1% Triton X-100液，處理20～30 min；用吸管吸去Triton X-100液，再加入M-緩沖液，反復(fù)洗滌3次，每次10 min，除去Triton X-100；用吸管吸去M-緩沖液，加入3%戊二醛溶液，固定0.5～1 h；用吸管吸去固定液，用6 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)反復(fù)沖洗3次，每次10 min；用吸管吸去6 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)，加入0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染液，染色20～30 min，吸去染液，用蒸餾水洗1～2次；③用鑷子取出標(biāo)本，置于載玻片上，用解剖針攤平，滴一滴蒸餾水，加蓋玻片，制成臨時(shí)裝片。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在顯微鏡下觀(guān)察洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，視野中被染成深藍(lán)色的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，即為細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。