盧玉鳳,陳 華,哈春芳,白治苗,王 瑞，李望舒

·論 著·

卵巢型內(nèi)膜異位癥患者圍手術(shù)期卵巢儲備功能評估及影響因素分析

盧玉鳳1,陳 華2,哈春芳2,白治苗3,王 瑞3，李望舒3

目的 通過檢測卵巢型內(nèi)膜異位癥(內(nèi)異癥)患者圍手術(shù)血清抗苗勒氏管激素(AMH)水平，評估患者的卵巢儲備功能，并探討影響卵巢型內(nèi)異癥患者卵巢儲備功能的因素。方法 選取有手術(shù)指征的卵巢型內(nèi)異癥患者60例為實驗組，子宮肌瘤患者30例組為對照組。采用ELISA 法分別檢測上述患者術(shù)前、術(shù)后1個月、3個月、6個月血清中AMH含量的表達，評估卵巢型內(nèi)異癥患者卵巢儲備功能，探討卵巢型內(nèi)異癥患者的年齡、單雙側(cè)卵巢型內(nèi)異癥、臨床分期、腫瘤大小及卵巢腫瘤手術(shù)對卵巢儲備功能的影響。結(jié)果 實驗組和對照組患者術(shù)前血清中AMH的表達與年齡均呈負相關(guān)性(P<0.05)；雙側(cè)卵巢型內(nèi)膜異癥患者血清中AMH表達明顯低于單側(cè)卵巢型內(nèi)異癥和對照組患者(P<0.05)；Ⅰ～Ⅱ期卵巢型內(nèi)異膜癥血清中AMH的表達高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)；卵巢型內(nèi)膜異癥直徑>8 cm患者血清中AMH表達明顯低于直徑<8 cm者血清中AMH表達(P<0.05)；卵巢型內(nèi)膜異癥患者行腫瘤剝除手術(shù)后1個月，AMH的表達低于術(shù)后3個月、6個月(P<0.05)。結(jié)論 卵巢型內(nèi)異癥患者的卵巢儲備功能與年齡、雙側(cè)卵巢是否受累、臨床期別、腫瘤直徑及卵巢腫瘤剝除手術(shù)有關(guān)；卵巢儲備功能正?；颊呤中g(shù)后短期內(nèi)卵巢儲備功能下降，但術(shù)后很快恢復(fù)。

卵巢型內(nèi)異癥；抗苗勒管激素;卵巢儲備功能；ELISA法

具有活性的子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))出現(xiàn)在子宮體以外的部位時，稱為子宮內(nèi)膜異位癥(EMT，內(nèi)異癥)。內(nèi)異癥在臨床行為學(xué)上具有類似惡性腫瘤的特點，如種植、侵襲及遠處轉(zhuǎn)移等。當(dāng)異位內(nèi)膜侵犯卵巢皮質(zhì)并在其內(nèi)生長，反復(fù)周期出血，形成單個或多個囊腫型病變，稱卵巢型內(nèi)異癥。相關(guān)研究表明，因其受到疾病本身的影響，卵巢型內(nèi)異癥會影響女性激素水平，一定程度上造成卵巢儲備功能下降[1]。AMH是目前研究發(fā)現(xiàn)最新的，最有臨床使用價值評價卵巢儲備功能的指標(biāo)[2]，它在生殖領(lǐng)域?qū)β殉卜磻?yīng)性的評價及促排卵方案的選擇上已有廣泛應(yīng)用，然而，在臨床上對卵巢型內(nèi)異癥患者的卵巢儲備功能(Ovarian reserve)進行評估的應(yīng)用卻很少，這也成為近年來在婦科領(lǐng)域研究的熱點。本研究旨在運用AMH對卵巢型內(nèi)異癥患者的卵巢儲備功能進行評價，探討年齡、卵巢型內(nèi)異癥本身及卵巢腫瘤剝除手術(shù)對卵巢型內(nèi)異癥患者卵巢儲備功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本研究選取2014年9月-2015年9月就診于寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院有手術(shù)指征的卵巢型內(nèi)異癥患者，年齡25～45歲，行手術(shù)治療后病理檢查確診為卵巢型內(nèi)異癥，并根據(jù)ASRM修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法(1997)分為Ⅰ～Ⅳ期。選取60例卵巢型內(nèi)異癥患者為實驗組，同期因子宮肌瘤行子宮肌瘤剝除術(shù)患者30例為對照組。上述患者行手術(shù)治療后1個月、3個月、6個月檢測AMH的表達水平。按三維經(jīng)陰道B超提示的卵巢型內(nèi)異癥大小，分為腫瘤直徑<8 cm組和腫瘤直徑>8 cm組，腫瘤<8 cm組患者43例，腫瘤>8 cm組17例，如為雙側(cè)異位囊腫，按直徑最大的囊腫劃分。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn):術(shù)前月經(jīng)周期正常，半年內(nèi)無激素類藥物治療史，無卵巢手術(shù)、盆腔手術(shù)史，無內(nèi)分泌疾病及全身性疾病史，術(shù)后病理證實均為卵巢型內(nèi)異癥、子宮肌瘤。術(shù)中無中轉(zhuǎn)開腹，所獲得的血清標(biāo)本量足以完成檢測,標(biāo)本無溶血或脂血。術(shù)后隨訪患者依從性較好。

1.3 分組：根據(jù)不同年齡分為4組，即25～30歲組、31～35組、36～40歲組、41～45歲組;根據(jù)病理類型分為單側(cè)卵巢型內(nèi)異癥組、雙側(cè)卵巢型內(nèi)異癥組及子宮肌瘤組(對照組)；根據(jù)卵巢型內(nèi)異癥分型，分為Ⅰ期組、Ⅱ期組、Ⅲ期組和Ⅳ期組；根據(jù)腫瘤直徑分為>8 cm組和<8 cm組。

1.4 方法

1.4.1 標(biāo)本采集及檢測方法:所有患者分別于術(shù)前、術(shù)后1個月、3個月、6個月靜脈采血5 mL，室溫靜置 30 min后3 000 r/min離心10 min，取血清2 mL，-70 ℃凍存待測。血清中 AMH 水平通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒測定(CUSABIO公司)，測定范圍為 0.375～150 ng/mL，批內(nèi)及批間差異分別<15.00% 及15% 。

1.4.2 檢測步驟:用純化的待測物質(zhì)抗體包被微孔板，往包被單抗的微孔中依次加入待測物質(zhì)，與HRP標(biāo)記的待測物質(zhì)抗體結(jié)合，洗滌，加底物TMB顯色，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物質(zhì)濃度。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段AMH水平的表達：卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH在不同年齡段4組中的表達分別為(3.21±0.57)、(2.35±1.19)、(1.62±0.96)、(1.43±0.47)ng/mL，子宮肌瘤患者血清中AMH在4組中的表達分別為(4.62±0.28)、(3.47±0.31)、(3.06±1.17)、(1.79±0.39)ng/mL，4組間 AMH水平兩兩比較，25～30歲組高于36～40歲組、41～45歲組，31～35歲組與41～45歲組血清中AMH表達比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同年齡段卵巢型內(nèi)異癥患者與子宮肌瘤患者血清中AMH表達相比較，25～30歲、31～35歲、36～40歲組患者血清中AMH表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；41～45歲組患者血清中AMH表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 2組患者血清中AMH表達與年齡的關(guān)系

2.2 單雙側(cè)卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH表達的比較：雙側(cè)卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH為(1.54±0.59)ng/mL，與對照組子宮肌瘤組患者血清中的(2.97±0.95)ng/mL比較明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；單側(cè)卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH為(2.67±0.81)ng/mL，與子宮肌瘤組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；單側(cè)卵巢型內(nèi)異癥與雙側(cè)卵巢型內(nèi)異癥血清中AMH水平表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=9.27，P<0.05)，見表2。

表2 單側(cè)、雙側(cè)卵巢型內(nèi)異癥及子宮肌瘤患者AMH水平比較

2.3 不同期別卵巢型內(nèi)異癥患者AMH水平表達的比較:對Ⅰ～Ⅳ期卵巢型內(nèi)異癥患者年齡及血清中AMH表達水平進行比較，Ⅰ期卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH水平表達分別與Ⅲ期、Ⅳ期患者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Ⅱ期卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH水平表達，分別與Ⅲ期、Ⅳ期患者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同期別卵巢型內(nèi)異癥患者AMH水平比較±s)

2.4 不同直徑卵巢型內(nèi)異癥患者AMH水平表達:結(jié)果表明，腫瘤>8 cm的卵巢型內(nèi)異癥患者血清中AMH表達明顯低于腫瘤<8 cm者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.13，P<0.05)，見表4。

表4 卵巢型內(nèi)異癥腫瘤大小AMH水平比較±s)

2.5 卵巢型內(nèi)異癥患者行卵巢腫瘤剝除術(shù)后AMH表達：卵巢型內(nèi)異癥行腹腔鏡手術(shù)剝除術(shù)后，AMH表達水平出現(xiàn)不同程度下降，術(shù)后1個月患者血清中AMH表達水平最低，為(0.72±0.50)ng/mL，與術(shù)前相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；3個月后，患者血清中AMH表達水平較術(shù)后1個月有所上升，但是不能達到術(shù)前水平。術(shù)后3個月、6個月患者血清中AMH表達水平與術(shù)前相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。腹腔鏡下子宮肌瘤剔除患者術(shù)后1個月AMH表達水平也出現(xiàn)暫時性下降，但下降程度不明顯；術(shù)后1個月、3個月、6個月血清中AMH表達水平與術(shù)前比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表5。

表5 2組患者術(shù)前、術(shù)后血清中AMH的表達

3 討論

3.1 年齡與卵巢儲備功能的關(guān)系:研究表明，AMH在血清中表達會隨著年齡的不斷增長而呈現(xiàn)緩慢的下降趨勢[5-6]。在本研究60例卵巢型內(nèi)異癥和30例子宮肌瘤患者中，卵巢型內(nèi)異癥患者和子宮肌瘤患者血清中AMH的表達與年齡呈負相關(guān)性，隨著年齡的增長，AMH出現(xiàn)下降的趨勢，36歲后卵巢型內(nèi)異癥患者的卵巢儲備明顯下降。

3.2 卵巢型內(nèi)異癥本身對卵巢儲備功能的影響:Hernandez Valencia等[7-8]等的相關(guān)研究認為，卵巢型內(nèi)異癥患者卵巢儲備功能下降的原因，還可能是因為EMs患者盆腔內(nèi)可能會產(chǎn)生一些高濃度的細胞因子及由于免疫因素而活化的巨噬細胞以及EMs本身造成的腹腔內(nèi)非細菌性炎癥，會使輸卵管、腸管等盆底組織粘連并造成組織纖維化，使盆底的微環(huán)境發(fā)生改變，導(dǎo)致AMH分泌減少能，從而造成患者卵巢功能發(fā)生下將[9-10]。本次研究還發(fā)現(xiàn)，卵巢型內(nèi)異癥臨床分型也會影響卵巢功能，因臨床期別較高的內(nèi)異癥囊腫壁與卵巢皮質(zhì)粘連程度較高，并伴有纖維化和多囊腔，且與盆腔側(cè)腹膜、子宮、宮旁組織等臨近器官粘連嚴(yán)重，因此對卵巢皮質(zhì)的損害程度較大，造成卵巢儲備下降。卵巢型內(nèi)異癥腫瘤的大小同樣也是影響卵巢儲備功能的因素之一，并且腫瘤越大，卵巢儲備功能越低。

3.3 卵巢型內(nèi)異癥手術(shù)剝除對卵巢儲備功能的影響:有研究發(fā)現(xiàn)[11-12]，卵巢型內(nèi)異癥其本身具有粘附、侵襲的病理特點，會導(dǎo)致囊腫與周圍組織粘連，腹腔鏡手術(shù)剝除過程中可能將黏附在囊腫壁上的卵巢組織剝除，導(dǎo)致部分卵巢組織丟失，其次，使用雙極電凝止血，會影響卵巢皮質(zhì)的血供，從而降低卵巢的儲備功能。本次研究表明，卵巢型內(nèi)異癥手術(shù)剝除術(shù)后，AMH水平下降會出現(xiàn)一定的下降趨勢，主要為術(shù)后1個月時AMH水平明顯下降，卵巢儲備功能降低；隨著時間的推移，3個月后卵巢儲備功能及卵巢反應(yīng)能力逐漸恢復(fù)，AMH會逐漸上升。本實驗研究結(jié)果與以往報道相符[13]。

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An analysis of the reserve function of ovarian and its influence factors in patients with ovarian endometriosis in perioperative period

LIYufeng1，CHENHua2，HAChunfang2，BAIZhimiao3，WANGRui3，LIWangshu3.

1.GanSuProvincialPeople'sHospital，LanZhou730000，China;2.DepartmentofGynecology,GeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity，Yinchuan，750004

Corresponding author:HA Chunfang，Email：hachunfang@163.com

Objective To test the expression of anti-Müllerian hormone (AMH))in serum of patients with ovarian endometriosis；And to assess the reserve functions of ovarian and to discuss its influencing factors.Methods 60 patients with endometriosis in ovarian type were assigned as experiment groupand 30 patients with uterine fibroids were assigned as control group.ELISA method was used to detect the expression contentof AMH inserum of patients for preoperative and postoperative with 1 month，3 months and 6 months respectively.Assessing the reserve functions of ovarian for patients with endometriosis in ovarian type and discuss its influencing factors.Such asage，single and double side ovarian type，clinical stage and ovarian tumor surgery.Results The result revealed that the expression level of AMH in preoperativeserum of patients with endometriosis in ovarian type were negatively correlated with age，and showed significant difference (P<0.05)；The expression level of AMH in serum of patients with endometriosis in bilateral ovarian type was significantly lower than patients with endometriosis in unilateral ovarian type and patients with uterine fibroidsand the difference was statistically significant (P< 0.05)；The expression of AMH inserum of patients with Ⅰ～Ⅱ period endometriosis in ovarian type was significantly higher than Ⅲ～ Ⅳ period patients (P<0.05)；The expression of AMH in serum of patients with diameter<8 cm endometriosis in ovarian type was significantly higher than diameter> 8 cm patients (P<0.05)；The expression of AMH in serum of patients with endometriosis in ovarian type after tumor removal surgery 1 month obviously lower than 3 month and 6 month，comparing with preoperative，the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion The ovarian reserve function in patients with endometriosisis positively correlatedwith patients' age，bilateral ovaries whether involvement，clinical stage and ovarian tumor removal surgery.The ovarian reserve function decline in normal ovarian reserve function groupin the short term，but the postoperative recover soonafter surgery.

Endometriosisinovariantype；AMH；Ovarianreservefunction；ELISA

10.13621/j.1001-5949.2017.01.0003

國家自然科學(xué)基金資助項目(81160078);寧夏醫(yī)科大學(xué)校級科研項目(XZ2015010)

1.甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院婦科，寧夏 銀川 750004 3.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750004

盧玉鳳(1988-)，女，住院醫(yī)師，碩士研究生，從事婦科腫瘤、婦科內(nèi)分泌方面臨床研究。

哈春芳，Email：hachunfang@163.com

http://www.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20150909.0730.030.html

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2016-06-01 [責(zé)任編輯]李 潔