管文娟 牛鎖成

(濮陽市人民醫(yī)院心內(nèi)二科，河南 濮陽 457000)

冠心病患者外周血miR-21的表達(dá)及與冠狀動脈病變程度的關(guān)系

管文娟 牛鎖成

(濮陽市人民醫(yī)院心內(nèi)二科，河南 濮陽 457000)

目的 探討冠心病(CHD)患者外周血miR-21的表達(dá)及與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法 行冠脈造影的患者145例中CHD患者77例，其中心絞痛(AP)45例(AP組)及急性心肌梗死(AMI)32例(AMI組)，另外無冠脈病變68例為對照組。采用Gensni評分評價冠脈狹窄程度，應(yīng)用熒光實時定量(qRT-PCR)方法檢測外周血miR-21表達(dá)。結(jié)果 三組血漿中miR-21表達(dá)水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度差異顯著(P<0.05)，其中AMI組、AP組血漿中miR-21表達(dá)水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度顯著高于對照組，AMI組亦顯著高于AP組(P<0.05)；Spearman線性相關(guān)分析顯示，CHD患者miR-21表達(dá)水平與Gensini評分、冠脈狹窄程度呈正相關(guān)性(r=0.895、0.888，均P<0.05)。結(jié)論 CHD患者外周血miR-21高表達(dá)，且與冠脈病變的嚴(yán)重程度具有正相關(guān)性，為CHD臨床診治及預(yù)后提供了理論依據(jù)。

冠心??；miR-21表達(dá)；冠狀動脈病變；Gensini評分

微小RNAs(miRNAs)在心血管疾病的作用早被確認(rèn)，其通過降解靶基因mRNA和抑制靶基因mRNA降解來完成對靶基因表達(dá)的調(diào)控〔1〕，影響細(xì)胞分化、增殖和凋亡、心臟發(fā)育、肥大、心肌重塑、血管生成等幾乎所有生物學(xué)過程,表現(xiàn)為疾病過程中出現(xiàn)異常的miRNAs〔2〕。miR-21是目前在心血管疾病研究較多的miRNA家族成員之一〔3〕，蘇迎等〔4〕報道，腫瘤和心臟應(yīng)激后miR-21的表達(dá)上調(diào)，且miR-21可影響心臟重塑，若沉默其表達(dá)會使心臟損傷惡化；王珺曉等〔5〕發(fā)現(xiàn)冠心病(CHD)患者血漿miR-21較健康人群升高，甚至認(rèn)為miR-21可能成為CHD臨床診斷的生物標(biāo)記物。本研究主要探討CHD患者外周血中miR-21的表達(dá)及其與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度之間相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年1月至2014年1月我院行冠脈造影的患者145例中CHD 77例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥50歲；②符合2007年美國心臟病學(xué)會(ACC)/美國心臟協(xié)會(AHA)制定的CHD診斷標(biāo)準(zhǔn)〔6〕：經(jīng)冠狀動脈造影術(shù)得知3支主要血管中的1支或主要分支管腔冠脈狹窄≥50%者。排除標(biāo)準(zhǔn):急/慢性感染性疾病、合并瓣膜性心臟病、血液系統(tǒng)疾病、周圍血管病變、嚴(yán)重肝/腎功能不全、心律失常、全身免疫性疾病、腫瘤、慢性阻塞性肺疾病等疾病者；此前接受過CHD介入、搭橋、靜脈溶栓等治療者；認(rèn)知障礙者。其中男40例，女37例，平均年齡(60.23±0.72)歲，參考2004年美國心臟病學(xué)會(ACS)的診斷標(biāo)準(zhǔn)及中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會標(biāo)準(zhǔn)〔7〕，依據(jù)患者的典型臨床表現(xiàn)、血清心肌標(biāo)志物水平、特征性心電圖改變及冠脈造影結(jié)果心絞痛(AP)組45例及急性心肌梗死(AMI)組32例，剩下68例無冠脈病變的患者為對照組。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理協(xié)會批準(zhǔn)，患者或家屬簽署知情同意書。三組性別、年齡、藥物治療、危險因素未見統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)〔8〕采用Judkins方法常規(guī)體位投照，選擇右冠狀動脈、左主干、左前降支、左回旋支為主要觀察血管，每支血管選3個體位做冠狀動脈造影，若造影結(jié)果有1支以上(包括1支)血管直徑狹窄≥50%管直徑者診斷為CHD。

1.3 Gensini評分〔9〕按AHA規(guī)定的冠脈血管圖像記錄分段評價標(biāo)準(zhǔn)對冠脈病變程度進行定量評分，記錄Gensini評分及冠脈的狹窄程度。

1.4 miR-21表達(dá)水平檢測 研究對象空腹12 h，經(jīng)左肘靜脈抽取血液樣本2 ml，轉(zhuǎn)到肝素鈉抗凝管。按照Trizol LS試劑盒、RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑盒(美國Invitrogen公司)說明書提取總RNA并進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄引物為：5'-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACGGCATGACA-GTG-3'，miRNA-21引物為:上游5'-ACACTCCAGCTGGGTAGCTTATCAGACTGAT-3'，下游5'ACTGGTGTCGTGGAGTCG-3'，內(nèi)參基因U6 RNA：上游5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3'，下游5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'。設(shè)置反應(yīng)條件為：95℃，15 s，60℃，30 s，共40個循環(huán)，各樣本每次實驗設(shè)3個復(fù)孔，重復(fù)3次，miR-21表達(dá)相對定量采用軟件分析，將內(nèi)參基因和目的基因擴增效率及測得的Ct值輸入GenEx軟件中按照說明操作得到結(jié)果〔10〕。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行單因素方差分析、t檢驗、χ2檢驗及Spearman線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 Gensini評分及冠脈狹窄程度比較 AMI組、AP組血漿中miR-21表達(dá)水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度顯著高于對照組，AMI組亦顯著高于AP組(P<0.05)，見表2。

2.2 外周血中miR-21表達(dá)水平與冠脈病變程度的關(guān)系 CHD患者外周血中miR-21表達(dá)水平與Gensini評分、冠脈狹窄程度呈正相關(guān)性(r=0.895、0.888，P=0.000、0.000)，見圖1。

表2 3組外周血miR-21水平、Gensini評分及冠脈狹窄程度±s)

與對照組相比：1)P<0.05，與AP組相比：2)P<0.05

圖1 miR-21表達(dá)水平與Gensini評分、冠脈狹窄程度相關(guān)性

3 討 論

目前人們越來越關(guān)注miRNA在心血管疾病的診斷與防治中的價值〔11〕，它是一種內(nèi)源性不編碼蛋白質(zhì)單鏈RNA，經(jīng)結(jié)合于靶基因mRNA的3'端非翻譯區(qū)介導(dǎo)其降解或抑制其翻譯，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)的作用，在心血管系統(tǒng)組織細(xì)胞的分化、發(fā)育及凋亡過程中均扮演重要角色〔12〕，在不同組織和疾病表達(dá)譜不盡相同。Olivieri等〔13〕發(fā)現(xiàn)，伴有CHD的老年非ST段抬高型心肌梗死患者循環(huán)中miR-499-5p升高80倍之多，miR-1、miR-21、miR-133a、miR-208a升高3～10倍，Rong等〔14〕發(fā)現(xiàn)漢族2型糖尿病患者血漿中miR-146a的表達(dá)較健康人群顯著增高。李韶南等〔15,16〕認(rèn)為血漿miR-21表達(dá)增加可通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9，參與動脈硬化、破壞斑塊穩(wěn)定性，預(yù)示CHD患者心血管事件風(fēng)險高。但肖靜等〔17〕體外實驗證實，氧化應(yīng)激可促進心臟干細(xì)胞(CPCs)分泌外泌體(exosomes)增加miR-21的表達(dá)并被心肌細(xì)胞攝取，再靶向結(jié)合程序性細(xì)胞死亡因子(PDCD)4抑制心肌細(xì)胞凋亡。本實驗與現(xiàn)有報道結(jié)果相符〔18〕，氧化應(yīng)激是動脈粥樣硬化(AS)、CHD、AMI、心力衰竭、高血壓等心血管疾病的重要機制，活性氧簇可導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚、血管損傷、缺血/再灌注損傷、血管重塑，并參與AS形成及斑塊不穩(wěn)定，因為CHD患者的冠狀動脈供血異常，導(dǎo)致心肌缺血性損傷并誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡，嚴(yán)重時發(fā)生不可逆性損傷，當(dāng)心肌細(xì)胞受損后，可能會因為氧化應(yīng)激激活下游信號通路引起心肌特異性高表達(dá)的miR-21便會釋放到血液中〔19〕。

Gensini評分是從冠狀動脈狹窄發(fā)生部位及狹窄程度對冠脈病變予以不同的量化權(quán)重，并對血管及其嚴(yán)重程度進行評分，在預(yù)測臨床預(yù)后中起重要作用，評分越高則冠狀動脈病變越嚴(yán)重，該方法被廣泛用于CHD的臨床診療〔20〕。臨床上大多數(shù)冠脈病變患者因為冠脈斑塊不穩(wěn)定發(fā)生AMI，miR-21參與AS過程，與炎癥相關(guān)的miRNAs通過調(diào)控炎癥細(xì)胞和炎癥細(xì)胞因子而啟動并影響著炎癥反應(yīng)，并可能通過調(diào)控人可溶性CD配體(SCD40L)等一些炎癥遞質(zhì)影響冠脈內(nèi)斑塊穩(wěn)定性〔15〕。Gensini評分相關(guān)系數(shù)越高，說明miR-21與其具有越高相關(guān)性〔21〕。隨著CHD疾病程度增加，Gensini評分增加，miR-21表達(dá)增加，其機制可能與miR-21發(fā)揮其抗損傷、抗凋亡、保護心肌的作用相關(guān)，因為CHD患者的冠狀動脈供血異常，導(dǎo)致心肌缺血性損傷并誘發(fā)心肌梗死，miR-21表達(dá)增加可以通過調(diào)控內(nèi)皮一氧化氮合成酶(NOS)、熱休克蛋白(HSP)轉(zhuǎn)錄因子(HSF)-1、HSP等靶基因來減輕缺血-再灌注損傷從而減少梗死面積〔22〕；另外，表達(dá)增加的miR-21通過磷酸酶-張力蛋白同源物(PTEN)途徑和PDCD4途徑使抗凋亡基因表達(dá)增加，減少心肌細(xì)胞凋亡，使缺血-再灌注損傷后梗死面積減少，保護心臟〔23〕。

1 Vrijens K,Bollati V,Nawrot TS.MicroRNA as potential signatures of environmental exposure or effect:a systematic review〔J〕.Environ Health Perspect,2015;123(5):399-411.

2 李虔楨.microRNA相關(guān)基因遺傳多態(tài)性與冠心病臨床關(guān)聯(lián)及預(yù)后研究〔D〕.北京：協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院,2015.

3 Zhang XY,Shen BR,Zhang YC,etal.Induction of thoracic aortic remodeling by endothelial specific deletion of microrna-21 in mice〔J〕.PLoS One,2013;8(3):e59002.

4 蘇 迎,楊水祥.心臟肥大的micro-RNA調(diào)控〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志,2013;7(18):8412-7.

5 王珺曉,李鳳卿,劉建偉,等.冠心病患者血漿微小RNA作為生物標(biāo)記物可能性的研究〔J〕.中華老年心臟血管病雜志,2016;17(6):591-4.

6 陳厚良.多元回歸法分析高敏C反應(yīng)蛋白與冠狀動脈病變程度的關(guān)系及相關(guān)影響因素分析〔D〕.合肥：安徽醫(yī)科大學(xué),2013.

7 張成龍.血漿游離脂肪酸、β2微球蛋白水平與冠心病患者冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析〔D〕.長沙：中南大學(xué),2014.

8 舒榮文,孔慶軍,鐘 勇,等.冠狀動脈造影金標(biāo)準(zhǔn)與臨床常規(guī)診斷冠心病差異性比較研究〔J〕.海軍醫(yī)學(xué)雜志,2015;36(4):311-4.

9 王紅梅,王明生,趙 霞,等.冠心病患者血糖水平與冠狀動脈病變Gensini評分的相關(guān)性研究〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志:電子版,2013;7(17):49-51.

10 鄭傳浩,姚 磊,李 毅.兩種分析miRNA相對表達(dá)量方法的比較研究〔J〕.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2013;10(22):2937-8.

11 Wang F,Chen C,Wang D.Circulating microRNAs in cardiovascular diseases:from biomarkers to therapeutic targets〔J〕.Front Med,2014;8(4):404-18.

12 Loyer X,Mallat Z,Boulanger CM,etal.MicroRNAs as therapeutic targets in atherosclerosis〔J〕.Expert Opin Ther Targets,2015;19(4):489-96.

13 Olivieri F,Antonicelli R,Lorenzi M,etal.Diagnostic potential of circulating miR-499-5p in elderly patients with acute non ST-elevation myocardial infarction〔J〕.Int J Cardiol,2013;167(2):531-6.

14 Rong Y,Bao W,Shan Z,etal.Increased microRNA-146a levels in plasma of patients with diagnosed type 2 diabetes mellitus〔J〕.PLoS One,2013;8(9):e73272.

15 李韶南,劉 震,陳平安,等.循環(huán)microRNA-21及可溶性CD40L與不穩(wěn)定斑塊的關(guān)系〔J〕.臨床心血管雜志,2015;31(12):1283-6.

16 陳西洲.血清炎癥因子在心病斑塊易損程度的預(yù)測價值〔J〕.中國臨床醫(yī)生雜志，2015;43(9):41-3.

17 肖 靜,潘 宇,李曉紅,等.心臟干細(xì)胞來源的exosomes通過傳遞miR-21抗心肌細(xì)胞凋亡〔J〕.中國病理生理雜志,2016;32(8):1533.

18 楊 陽,羅 義,黃建楷,等.冠心病伴嚴(yán)重心律失?；颊哐h(huán)miR-21表達(dá)升高〔J〕.中國循環(huán)雜志,2014;29(Z1):18.

19 張亞琴.MiR-21對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的影響〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2016;45(16):2257-61.

20 彭 濤,李尚喜,劉茂元,等.彩色多普勒超聲及血管造影對頸內(nèi)動脈狹窄或閉塞患者的診斷價值〔J〕.中華醫(yī)學(xué)超聲雜志,2015;12(4):278-82.

21 阮志敏,武力勇,朱國富,等.microRNA-21與冠心病的相關(guān)性研究〔J〕.臨床心血管病雜志,2015;31(1):50-3.

22 彭 曉,王志偉,茍德明.microRNAs與心血管疾病的研究進展〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志,2013;7(14):6608-10.

23 王國芹,萬 征.微小RNA在心肌缺血再灌注損傷中的作用及機制〔J〕.中國心血管雜志,2013;18(5):387-90.

〔2015-03-19修回〕

(編輯 杜 娟)

管文娟(1975-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事心血管病研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)02-0376-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.02.050