肖懷清 倪一鳴

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院心胸外科，浙江 杭州 310006)

DC-CIK聯(lián)合化療對(duì)肺癌患者Toll樣受體4及腫瘤標(biāo)志物的影響

肖懷清1倪一鳴

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院心胸外科，浙江 杭州 310006)

目的 探討DC-CIK聯(lián)合化療對(duì)肺癌患者Toll樣受體(TLR)4及腫瘤標(biāo)志物的影響。方法 206例肺癌患者根據(jù)入院時(shí)間先后順序分為觀察組和對(duì)照組各103例，對(duì)照組采用紫杉醇+順鉑化療，觀察組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上加用DC-CIK免疫細(xì)胞治療，比較兩組患者近期療效、外周血細(xì)胞角蛋白19血清片段211(CYFRA211)、外周血單個(gè)核細(xì)胞最終TLR4 mRNA的表達(dá)量、鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCC-Ag)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA)125等指標(biāo)。結(jié)果 觀察組緩解率、疾病控制率均明顯高于對(duì)照組(62.14% vs 47.57%,89.32% vs 68.93%)(χ2=4.411,12.961；P<0.05)；觀察組TLR4 mRNA表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(t=4.090,P<0.05)；CYRAR211、SCC-Ag、CEA、CA125等含量均明顯低于對(duì)照組(t=13.881,17.416,22.786,8.201；P<0.05)。結(jié)論 DC-CIK聯(lián)合化療有助于降低肺癌患者血清TLR4表達(dá)及腫瘤標(biāo)志物濃度，提高治療效果。

肺癌；DC-CIK； TLR4；腫瘤標(biāo)志物

肺癌的病理類型多為鱗癌和小細(xì)胞肺癌〔1〕。早期中央型肺癌手術(shù)切除效果較好，但是由于肺癌發(fā)病隱匿，大多數(shù)肺癌在確診時(shí)已達(dá)中晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)。紫杉醇+順鉑化療是肺癌化療的經(jīng)典方案，治療效果較好。Toll樣受體(TLR)4是連接固有免疫及適應(yīng)性免疫的重要橋梁，表達(dá)于多種免疫細(xì)胞〔2〕。肺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4 mRNA的表達(dá)量與臨床病理相關(guān)，DC-CIK對(duì)免疫調(diào)控有一定的作用〔3〕。本文探討DC-CIK聯(lián)合化療對(duì)肺癌患者TLR4及類腫瘤標(biāo)記物的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2014年1月我院胸外科收住的206例確診肺癌的患者為研究對(duì)象，根據(jù)入院時(shí)間先后順序分為觀察組和對(duì)照組各103例。觀察組男53例，女50例；年齡45～82〔平均(62.14±5.63)〕歲；病理類型：腺癌35例，鱗癌57例，大細(xì)胞癌7例，其他4例。對(duì)照組男54例，女49例；年齡46～81〔平均(63.25±5.53)〕歲；病理類型：腺癌37例，鱗癌57例，大細(xì)胞癌6例，其他3例。兩組患者性別、年齡、病理類型等資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)有咳嗽、咳痰、咯血、胸悶等呼吸系統(tǒng)癥狀，伴或不伴胸內(nèi)轉(zhuǎn)移或胸外表現(xiàn)；(2)纖維支氣管鏡或胸膜穿刺病理學(xué)檢查提示癌細(xì)胞病變；(3)患者所處病情階段宜首選化療；(4)報(bào)請(qǐng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均被告知研究事項(xiàng)且均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有心、肺、肝、腎等嚴(yán)重臟器功能不全；(2)肺癌進(jìn)展晚期，預(yù)期壽命<3個(gè)月；(3)有糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)等嚴(yán)重代謝系統(tǒng)疾病；(4)由于各種原因不能使用紫杉醇+順鉑化療的患者；(5)對(duì)DC-CIK過(guò)敏或不耐受。

1.3 方法 所有患者入院后完善常規(guī)檢查，給予全身化療。第1天靜脈滴注紫杉醇135 mg/m2，第2～4天靜脈滴注順鉑40 mg/m2。每21 d重復(fù)一個(gè)周期，共治療4個(gè)周期?；熯^(guò)程中，針對(duì)患者出現(xiàn)的不良反應(yīng)給予對(duì)癥處理，如止吐、止瀉、抗過(guò)敏、護(hù)肝、護(hù)腎等。觀察組加用DC-CIK細(xì)胞免疫治療：患者保持清淡飲食，用血液循環(huán)機(jī)采集患者單個(gè)核細(xì)胞100 ml，37℃恒溫培育2 h，接下來(lái)的6 d內(nèi)分別加入重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(GM-CSF，廈門特寶生物工程股份有限公司)、白細(xì)胞介素-4(IL-4，Peprotech 公司)、重組人干擾素-γ(IFN-γ，上海凱茂生物醫(yī)藥有限公司)、鼠抗人CD3單克隆抗體(古巴分子免疫學(xué)中心)誘導(dǎo)DC和CIK細(xì)胞成熟。在培養(yǎng)14 d后，分2次將DC-CIK細(xì)胞回輸給患者。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 TLR4 mRNA表達(dá) 采用RT-PCR法檢測(cè) TLR4 mRNA 的表達(dá)。提取總RNA進(jìn)行紫外定量，鑒定 RNA 的質(zhì)量后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。使用25 μl PCR 體系，β-actin 為內(nèi)參，通過(guò)擴(kuò)增TLR4 mRNA 和 β-actin、循環(huán)、電泳等程序，最后置于凝膠成像分析儀觀察結(jié)果〔4〕。嚴(yán)格按各試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.4.2 腫瘤標(biāo)記物 化療前、療程結(jié)束1 w后采集空腹靜脈血4 ml，3 000 r/min離心10 min(離心半徑3 cm)。取血清，采用日立7600型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清血細(xì)胞角蛋白19血清片段211(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)、鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCC-Ag)等腫瘤標(biāo)志物含量。采用化學(xué)發(fā)光法，試劑購(gòu)自北京晶美生物工程有限公司。

1.4.3 近期療效 治療后，參照WHO“實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)”〔5〕評(píng)價(jià)腫瘤的近期療效。完全緩解(CR)：病變完全消失且維持時(shí)間≥4 w；部分緩解(PR)：腫瘤病灶最大徑與最大垂直徑乘積減少>50%，維持時(shí)間≥4 w；穩(wěn)定(SD)：腫瘤病灶兩徑乘積減少<25%或增大<25%；進(jìn)展(PD):腫瘤病灶兩徑乘積增大>25%或出現(xiàn)新病灶。緩解率為完全緩解、部分緩解占總例數(shù)的百分比，疾病控制率為完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定占總例數(shù)的百分比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，近期療效等計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 近期療效比較 觀察組CR 31例，PR 33例，SD 28 PD 11例；對(duì)照組CR 24例，PR 25例，SD 22例，PD 32例。觀察組緩解率〔64例(62.14%)〕、疾病控制率〔92例(89.32%)〕均明顯高于對(duì)照組〔49例(47.57%)、71例(68.93%)，P<0.05〕。

2.2 TLR4 mRNA表達(dá)量 化療前，兩組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4 mRNA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(觀察組0.52±0.17，對(duì)照組0.51±0.16，P>0.05)；化療后，兩組TLR4 mRNA表達(dá)量均明顯下降(P<0.05)，觀察組TLR4 mRNA表達(dá)水平(0.37±0.13)明顯低于對(duì)照組(0.45±0.15，P<0.05)。

2.3 腫瘤標(biāo)記物 見(jiàn)表1。治療前，兩組血清CYRAR211、SCC-Ag、CEA、CA125等含量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組上述指標(biāo)均明顯降低，觀察組CYRAR211、SCC-Ag、CEA、CA125等含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。

組別CYRAR211SCC-AgCEACA125觀察組治療前9.12±1.248.65±1.3222.14±3.2548.21±5.36治療后3.36±0.521)2)2.45±0.441)2)4.32±0.541)2) 22.36±3.251)2)對(duì)照組治療前9.10±1.328.63±1.4522.08±3.4148.20±5.24治療后4.52±0.671)3.53±0.451)6.45±0.781)26.12±3.331)

與治療前比較：1)P<0.05；與對(duì)照組比較：2)P<0.05

3 討 論

與很多惡性腫瘤一樣，肺癌的起病非常隱匿，大部分患者出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)就已經(jīng)處于中晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)。一般采用化療、放療、靶向治療等綜合治療〔6〕。肺癌的病理類型復(fù)雜，常用的化療方案也較為繁多，但是一直缺乏較為有效的化療方案，五年生存率僅為15%左右〔7〕。

DC-CIK細(xì)胞治療是過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療的一種，主要通過(guò)注射自體經(jīng)體外活化擴(kuò)增的免疫活性細(xì)胞而起到免疫調(diào)節(jié)的作用，保護(hù)自身細(xì)胞并殺傷腫瘤細(xì)胞。DC和CIK細(xì)胞都是機(jī)體免疫活性最強(qiáng)的細(xì)胞，利用這兩種細(xì)胞體外免疫培養(yǎng)會(huì)起到較好的免疫效果〔8〕。岳愷〔9〕研究報(bào)道，與單純化療相比，DC-CIK 聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌可以提高緩解率，延長(zhǎng)生存期。本文研究中觀察組疾病緩解率、疾病控制率均明顯高于對(duì)照組，提示DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療對(duì)肺癌的治療效果明顯優(yōu)于僅化療治療。TLR是一種特征性的模式識(shí)別受體，TLR4是其中最為重要的一種。在體液免疫和細(xì)胞免疫中都會(huì)有不同程度的表達(dá)，TLR4受體mRNA的表達(dá)程度越高，說(shuō)明細(xì)胞對(duì)自身抗體的免疫抵抗越強(qiáng)〔10〕，化療就更難以發(fā)揮效果。本研究中，觀察組治療后TLR4受體mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組，說(shuō)明DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療可以減弱免疫抵抗，增強(qiáng)免疫治療的效果。

CYFRA211 是存在于神經(jīng)內(nèi)分泌組織中的酵母酶，SCC-Ag是一類腫瘤相關(guān)抗原。CEA是具有人類胚胎抗原特異性的酸性糖蛋白。CA125是從生殖源性腫瘤中提取的一類單克隆抗體〔11〕。四種腫瘤標(biāo)志物在肺癌患者體內(nèi)呈特異性高表達(dá)，聯(lián)合檢測(cè)四種標(biāo)志物可以提高對(duì)肺癌的診斷效能〔12〕。本文研究中，觀察組四種腫瘤標(biāo)記物濃度均低于對(duì)照組，提示DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療可降低肺癌患者血清腫瘤標(biāo)記物水平。

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〔2015-10-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

倪一鳴(1956-)，男，博士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要從事心胸外科方面研究。

肖懷清(1980-)，男，主治醫(yī)師，主要從事肺癌、食管癌、縱隔腫瘤研究。

R736

A

1005-9202(2017)01-0123-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.054

1 武警浙江省總隊(duì)醫(yī)院胸外科