展翼翼 達(dá)春麗 劉春玲

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肺內(nèi)科二病區(qū)，新疆 烏魯木齊 830001)

肺腺癌中CD44v6和組織蛋白酶D的表達(dá)及臨床意義

展翼翼 達(dá)春麗1劉春玲

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肺內(nèi)科二病區(qū)，新疆 烏魯木齊 830001)

目的 應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)肺腺癌中CD44v6和組織蛋白酶(Cath)-D的表達(dá)，探討其意義。方法 64例確診為肺腺癌并行根治手術(shù)患者的術(shù)后標(biāo)本作為觀察組，未見(jiàn)明顯異常的肺組織23例作為對(duì)照組。兩組中CD44v6和Cath-D的檢測(cè)應(yīng)用免疫組化SP法。結(jié)果 觀察組中CD44v6和Cath-D表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，觀察組中CD44v6和Cath-D表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管累犯密切相關(guān)，Cath-D表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的大小密切相關(guān)，二者均與性別、年齡、分化程度及胸膜累犯無(wú)相關(guān)性；二者無(wú)明顯相關(guān)性。結(jié)論 肺腺癌中CD44v6和Cath-D高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤發(fā)展；二者高表達(dá)提示腫瘤處于進(jìn)展?fàn)顟B(tài)。

肺腺癌；CD44v6；組織蛋白酶(Cath)-D；免疫組化

肺癌約占所有新發(fā)癌癥的12.6%，肺腺癌是肺癌中最常見(jiàn)的類型，常經(jīng)過(guò)非典型腺瘤樣增生發(fā)展到原位腺癌，再發(fā)展為微小或區(qū)域性浸潤(rùn)性腺癌，最終形成典型的浸潤(rùn)性腺癌，在此過(guò)程中伴隨著多種基因和蛋白調(diào)控和表達(dá)的異?！?〕。細(xì)胞黏附分子是一類存在于細(xì)胞表面、介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間相互黏附的糖蛋白，CD44v6是黏附蛋白中的一種能夠有效促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移灶形成的糖蛋白〔2,3〕。組織蛋白酶(Cath)-D是一種蛋白水解酶，能溶解細(xì)胞外基質(zhì)、基底膜和結(jié)締組織，對(duì)腫瘤擴(kuò)散有一定作用〔4,5〕。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)肺腺癌中CD44v6和Cath-D的表達(dá)，觀察其臨床及病理學(xué)的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年7月至2014年12月我院確診為肺腺癌并行根治手術(shù)的患者64例為觀察組，其中男30例，女34例；年齡38～77歲，平均(58.4±9.1)歲。術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)HE切片和免疫組化染色證實(shí)，并符合國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)(IASLC)/美國(guó)胸科學(xué)會(huì)(ATS)/歐洲呼吸學(xué)會(huì)(ERS)國(guó)際多學(xué)科分類中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。未見(jiàn)明顯異常的肺組織23例作為對(duì)照組，其中男12例，女11例；年齡39～70歲，平均(56.5±8.2)歲。兩組性別、年齡均無(wú)明顯差異，具有可比性。

1.2 CD44v6和Cath-D的檢測(cè) CD44v6和Cath-D蛋白均為濃縮液，按不同比例進(jìn)行稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最佳配比濃度用于正式實(shí)驗(yàn)。CD44v6和Cath-D的檢測(cè)均基于術(shù)后的石蠟切片，應(yīng)用免疫組化SP法，行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，做好質(zhì)量控制工作，努力減少誤差。

1.3 CD44v6和Cath-D結(jié)果的判讀 CD44v6的陽(yáng)性部位為細(xì)胞膜，Cath-D的陽(yáng)性部位為細(xì)胞質(zhì)，以染成棕黃色色為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，選擇上皮細(xì)胞集中的3個(gè)400倍視野的區(qū)域進(jìn)行觀察，計(jì)算陽(yáng)性率取平均值，以<5%定為陰性，以≥5%定為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組中CD44v6和Cath-D表達(dá)陽(yáng)性率的比較 兩組CD44v6和Cath-D表達(dá)的陽(yáng)性率差異顯著。見(jiàn)表1。

表1 兩組中CD44v6和Cath-D表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

組別nCD44v6Cath-D觀察組6435(54.69)32(50.00)對(duì)照組234(17.39)3(13.04)χ2/P值9.5159/0.002010.3035/0.0013

2.2 觀察組中CD44v6和Cath-D陽(yáng)性率在不同臨床病理特征中的比較 CD44v6和Cath-D表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管累犯密切相關(guān)，Cath-D表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的大小密切相關(guān)，二者均與性別、年齡、分化程度及胸膜累犯無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)表2。

2.3 觀察組中CD44v6和Cath-D表達(dá)的相關(guān)性 CD44V6和Cath-D無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。

表2 觀察組中CD44v6和Cath-D陽(yáng)性率在不同臨床病理特征中的比較〔n(%)〕

臨床特征nCD44v6Cath-D淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)3916(41.03)14(35.90) 有2519(76.00)18(72.00) χ2/P值7.5200/0.00617.9426/0.0048脈管累犯 無(wú)4822(45.83)20(41.67) 有1613(81.25)12(75.00) χ2/P值6.0742/0.01375.3333/0.0209腫瘤大小 <3cm2313(56.52)7(30.43) ≥3cm4122(53.66)25(60.98) χ2/P值0.0487/0.82535.4973/0.0190性別 男3014(46.67)16(53.33) 女3421(61.76)16(47.06) χ2/P值1.4661/0.22600.2510/0.6164年齡 <60歲3315(45.45)18(54.55) ≥60歲3120(64.52)14(45.16) χ2/P值2.3437/0.12580.5630/0.4530分化 高-中3923(58.97)22(56.41) 低2512(48.00)10(40.00) χ2/P值0.7404/0.38951.6410/0.2002胸膜累犯 無(wú)3419(55.88)20(58.82) 有3016(53.33)12(40.00) χ2/P值0.0418/0.83802.2588/0.1239

3 討 論

肺腺癌具有腺樣分化或黏液產(chǎn)生的特點(diǎn)，表現(xiàn)為腺泡樣、乳頭樣、細(xì)支氣管肺泡樣，具有黏液形成的實(shí)性巢或以這些形式混合生長(zhǎng)的惡性上皮性腫瘤。肺腺癌很少位于中央，表現(xiàn)為肺門(mén)周圍的腫塊，很少有空洞，可出現(xiàn)單發(fā)或多發(fā)，大小不一，可以出現(xiàn)明顯的中央灰白色纖維化伴有胸膜皺褶。腺癌可以擴(kuò)散，最初是沿淋巴道或血道播散，之后可以出現(xiàn)氣道播散，部分病例尚可出現(xiàn)胸膜表面播散。在這種擴(kuò)散過(guò)程中，轉(zhuǎn)移相關(guān)基因起重要作用〔6〕。CD44v6是含v6變異體的CD44拼接變異體，可以通過(guò)與透明質(zhì)酸進(jìn)行有效結(jié)合，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞之間及腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的結(jié)合能力，使細(xì)胞表面黏附分子的構(gòu)成和功能發(fā)生改變，可以提高腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)潛能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移〔7,8〕。Cath-D是一種蛋白水解酶，在酸性環(huán)境中產(chǎn)生，其功能有：①作為雌激素依賴的腫瘤標(biāo)志物；②作為增生因子，通過(guò)胰島素樣生長(zhǎng)因子受體起作用；③降解細(xì)胞外基質(zhì)，也可以促進(jìn)基質(zhì)中的生長(zhǎng)因子釋放〔9〕；④激活家族中的其他成員，促進(jìn)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的形成〔10,11〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CD44v6和Cath-D在上皮細(xì)胞癌變過(guò)程中起重要作用。二者參與腫瘤的脈管播散。CD44v6被學(xué)者認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)因子，其作用與上皮型黏附蛋白的作用相反，而與神經(jīng)型黏附蛋白的作用相類似，因此CD44v6也是黏附相關(guān)細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)平衡中的重要因子。在一些腫瘤細(xì)胞中上皮型黏附蛋白的表達(dá)降低，使細(xì)胞之間的附著減弱，腫瘤細(xì)胞從周圍細(xì)胞的附著處脫離，出現(xiàn)浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移〔12〕。此時(shí)與其相對(duì)應(yīng)的腫瘤細(xì)胞黏附分子如CD44v6、N-cadherin等高表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮上的纖連蛋白、膠原蛋白等結(jié)合，或者使異質(zhì)性黏附作用增強(qiáng)，形成轉(zhuǎn)移灶〔13〕。腫瘤形成過(guò)程中Cath-D上調(diào)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行降解，使阻礙細(xì)胞轉(zhuǎn)移的屏障受到破壞，進(jìn)而促進(jìn)轉(zhuǎn)移的發(fā)生〔14,15〕。組織學(xué)的高級(jí)別和脈管侵犯是預(yù)后不良的重要參數(shù)，這兩個(gè)指標(biāo)也被用于臨床分期，因此二者的表達(dá)可能在一定程度上提示預(yù)后，即二者高表達(dá)可能在一定程度上提示預(yù)后不良。本文結(jié)果提示Cath-D高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，此時(shí)腫瘤繁殖加快，細(xì)胞增生活躍，細(xì)胞的異型性增加，腫瘤體積增大，浸潤(rùn)能力增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)CD44v6和Cath-D的表達(dá)與腫瘤分化程度及胸膜累犯的關(guān)系，因此CD44v6和Cath-D在腫瘤細(xì)胞分化過(guò)程中的調(diào)節(jié)作用不強(qiáng)。二者發(fā)揮作用的通路和方式可能有自身的特異性〔16,17〕，其具體機(jī)制有待深入研究。

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〔2015-04-11修回〕

(編輯 苑云杰)

劉春玲(1967-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事肺癌生物免疫治療研究。

展翼翼(1982-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肺癌研究。

R734

A

1005-9202(2017)01-0119-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.052

1 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科