劉志華 吳 鴻

(河南省中醫(yī)院腦病科，河南 鄭州 450002)

腦血疏口服液對(duì)腦出血大鼠血腫體積及神經(jīng)功能的影響

劉志華 吳 鴻1

(河南省中醫(yī)院腦病科，河南 鄭州 450002)

目的 探討腦血疏口服液對(duì)腦出血(ICH)模型大鼠血腫體積及神經(jīng)功能的影響。方法 77只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為ICH對(duì)照組(n=35)、ICH實(shí)驗(yàn)組(n=35)及假手術(shù)組(n=7)，ICH對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組使用Ⅳ型膠原酶造模，術(shù)后12 h給予ICH實(shí)驗(yàn)組腦血疏口服液灌胃1 ml/kg，其他兩組給予同等劑量的生理鹽水灌胃。治療后將ICH對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組分為1、2、4、7、14 d 5個(gè)亞組，每組7只，采用Longa法對(duì)兩組不同時(shí)間的神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)估，并測(cè)量腦血腫體積的變化。結(jié)果 治療后7 d和14 d，ICH實(shí)驗(yàn)組大鼠Longa評(píng)分顯著低于ICH對(duì)照組(均P<0.05)，治療后4～14 d ICH實(shí)驗(yàn)組大鼠血腫體積顯著小于ICH對(duì)照組(均P<0.05)。結(jié)論 腦血疏口服液治療ICH大鼠療效確切，能顯著促進(jìn)血腫的吸收，恢復(fù)大鼠神經(jīng)功能。

腦血疏口服液；腦出血

腦出血(ICH)是一種原發(fā)性非外傷性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血的急性腦血管病，起病急驟、發(fā)展迅速、致死和致殘率高，發(fā)病30 d內(nèi)的死亡率高達(dá)約46%，存活的患者也大多存在不同程度的神經(jīng)功能損傷癥狀，其中超過80%的患者在發(fā)病6個(gè)月內(nèi)生活不能自理，超過50%的患者終生殘疾，生存質(zhì)量受到極大影響，也給家庭造成了沉重的負(fù)擔(dān)〔1〕。迄今為止，ICH的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，其病理改變既包括了血腫對(duì)周圍組織的機(jī)械壓迫和血腫的占位效應(yīng)對(duì)腦組織造成的直接破壞，也包括了血腫的繼發(fā)性損傷〔2〕。因?yàn)槌鲅杆?，機(jī)械壓迫和占位效應(yīng)已經(jīng)產(chǎn)生損傷，因此對(duì)ICH的治療不能解決血腫對(duì)腦組織的直接損傷作用，但是普遍認(rèn)為對(duì)于ICH的繼發(fā)性神經(jīng)損傷的治療能取得較好療效〔3〕。目前，ICH的治療主要依靠甘露醇等脫水劑，缺乏神經(jīng)保護(hù)藥物，療效不甚理想。腦血疏口服液是根據(jù)中醫(yī)名著《醫(yī)林改錯(cuò)》和《金匱要略》中的方劑調(diào)整而成〔4〕，具有活血、化瘀的作用。本研究應(yīng)用腦血疏口服液治療ICH模型大鼠，觀察其對(duì)神經(jīng)功能和血腫體積影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 SD雄性大鼠77只，體重200～250 g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司〔合格證號(hào):SCXK(滬)2009-0005,清潔級(jí)〕。動(dòng)物飼喂在實(shí)驗(yàn)室(生物安全防護(hù)水平為BSL-1)，實(shí)驗(yàn)室溫度恒定(24.2±1.1)℃，相對(duì)濕度50%～70%，維持12 h光照節(jié)律，自由攝食、飲水。所有大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為ICH對(duì)照組(n=35)、ICH實(shí)驗(yàn)組(n=35)及假手術(shù)組(n=7)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 Ⅳ型膠原酶購自美國(guó)Sigma公司，腦血疏口服液購自山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20070059)，10%水合氯醛購自成都科龍化工試劑廠，生理鹽水和4%多聚甲醛購自美國(guó)Hyclone公司，1 μl微量注射器購自上海醫(yī)用激光儀器廠，大鼠腦立體定位儀購自深圳瑞沃德生命科技有限公司，高速冷凍切片機(jī)購自沈陽龍首電子儀器有限公司，倒置顯微鏡及電子成像系統(tǒng)購自日本Olympus公司。

1.3 造模方法 所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，禁食禁水8 h。10%水合氯醛360 mg/kg腹腔注射，待大鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)后，頭部備皮，俯臥位將大鼠頭部固定于立體定位儀上，沿正中矢狀縫縱行切開頭部皮膚，鈍性分離皮下組織，用過氧化氫溶液棉球輕輕擦掉骨膜，充分暴露冠狀縫和前囟，在冠狀縫前1 mm中線右側(cè)3 mm處用牙科鉆鉆開顱骨。ICH組處理方法：將預(yù)先潤(rùn)洗過的微量注射器吸取Ⅳ型膠原酶2 μl緩慢勻速注射進(jìn)腦組織尾狀核內(nèi)，注射時(shí)間約為3 min，留針15 min，緩慢抽出注射器。假手術(shù)組處理方法：進(jìn)針后不注射，留針15 min后抽出注射器。術(shù)后所有大鼠封閉顱骨缺口，縫合頭皮，并給予慶大霉素0.3 ml肌注，預(yù)防感染，并將大鼠送回籠中繼續(xù)飼養(yǎng)。

1.4 治療方法 術(shù)后12 h，ICH實(shí)驗(yàn)組給予腦血疏口服液灌胃，1 ml/kg，2次/d；ICH對(duì)照組及假手術(shù)組給予同等劑量生理鹽水灌胃，2次/d。

1.5 觀察指標(biāo) ICH實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠分別于治療后1、2、4、7、14 d進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)估，然后斷頭處死，測(cè)量血腫體積，每次分組處理，每組7只。

1.5.1 神經(jīng)功能評(píng)價(jià) 術(shù)后12 h、治療1、2、4、7、14 d后，采用Longa法〔5〕對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)估：無神經(jīng)病學(xué)癥狀，0分；左前肢伸展不全，1分；行走時(shí)左側(cè)旋轉(zhuǎn)，2分；行走時(shí)左側(cè)跌倒，3分；行走不能，4分。術(shù)后12 h評(píng)分≥1分說明ICH模型制備成功，評(píng)分<1的大鼠則剔除，按分組原則隨機(jī)抽樣補(bǔ)齊動(dòng)物后重新制備模型。

1.5.2 血腫體積測(cè)量 將處死后的大鼠取出全腦，生理鹽水沖洗后置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h，固定后將大鼠腦組織固定于高速冷凍切片機(jī)上，以注射器進(jìn)針通道為中心行冠狀面連續(xù)切片，層厚0.5 mm，切片用石蠟包埋、蘇木素-伊紅(HE)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察并照相，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)計(jì)算血腫體積，血腫體積=切片厚度(mm)×切片出血灶面積(mm2)×切片數(shù)量〔3〕。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 神經(jīng)功能評(píng)分 術(shù)后12 h ICH組大鼠出現(xiàn)不同程度的左側(cè)肢體功能障礙，且Longa評(píng)分≥1分，而假手術(shù)組大鼠則沒有肢體活動(dòng)異常，提示造模成功。治療后1～14 d ICH實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的Longa評(píng)分均呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，且治療后1～4 d，ICH實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠Longa評(píng)分未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，治療后7 d和14 d ICH實(shí)驗(yàn)組大鼠Longa評(píng)分顯著低于ICH對(duì)照組(均P<0.05)。見表1。

2.2 血腫體積變化 取大鼠腦組織時(shí)，ICH對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠均可在右側(cè)尾狀核處觀察到不同程度的血腫，并伴隨血腫周圍組織腫脹和中線位移等表現(xiàn)。血腫體積隨飼喂時(shí)間增加逐漸減小，治療后1～2 d兩組大鼠血腫體積無統(tǒng)學(xué)差異(P>0.05)，治療后4～14 d ICH實(shí)驗(yàn)組大鼠血腫體積顯著小于ICH對(duì)照組(均P<0.05)。見表1。

組別Longa評(píng)分(分)1d2d4d7d14d腦血腫體積(mm3)1d2d4d7d14dICH對(duì)照組3.28±0.512.85±0.712.57±0.782.28±0.631.42±0.7154.83±2.0651.35±2.3848.62±3.3144.61±3.5933.57±4.16ICH實(shí)驗(yàn)組3.14±0.452.71±0.642.14±0.611.51±0.520.71±0.4453.65±2.2749.36±3.8643.75±3.6836.17±3.8821.73±3.74t值0.5450.3881.1492.4942.2491.0181.1612.6034.2245.600P值0.5960.7050.2730.0280.0440.3290.2680.0230.0010.000

3 討 論

ICH的病因主要有高血壓、動(dòng)脈硬化等，主要發(fā)生在40歲以上人群中，其中50歲以上人群是高發(fā)人群；但近年來研究發(fā)現(xiàn)ICH發(fā)病呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)〔6〕。目前的治療方法主要有藥物治療、手術(shù)治療和輔助治療，其中手術(shù)治療雖能及時(shí)清除病灶，但是并不能逆轉(zhuǎn)已經(jīng)受損的神經(jīng)功能，并且手術(shù)造成的出血也可能損傷患者其他腦組織。因此，目前缺乏循證醫(yī)學(xué)的明確證據(jù)，手術(shù)治療方法仍存在爭(zhēng)議；輔助治療包括降血壓、降顱內(nèi)壓、維持水鹽平衡、調(diào)節(jié)體溫等，對(duì)血腫的消除沒有直接作用，僅能保護(hù)神經(jīng)功能不受進(jìn)一步損傷〔7〕。

中醫(yī)治療講究辨證施治，對(duì)中風(fēng)的治療歷史悠久，有針灸和中藥內(nèi)服外敷等，傳統(tǒng)中醫(yī)中沒有將缺血性中風(fēng)和出血性中風(fēng)進(jìn)行有效區(qū)分，二者雖然癥狀相同，卻各具特點(diǎn)，因此以往采取中藥治療并未獲得良好療效〔8〕。腦血疏口服液由《醫(yī)林改錯(cuò)》中的補(bǔ)陽還五湯加上《金匱要略》中的大黃蟅蟲丸調(diào)整而來，主要成分為黃芪、水蛭、牡丹皮、石菖蒲、大黃、牛膝、川芎等〔4〕。本研究將其應(yīng)用于Ⅳ型膠原酶致ICH大鼠治療，結(jié)果顯示腦血疏口服液治療ICH大鼠療效顯著，有助于血腫吸收，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明ICH后繼發(fā)性的腦水腫引起的占位效應(yīng)是影響患者預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素，早期由于血凝塊收縮，血液中的液體成分外滲導(dǎo)致水腫發(fā)生，隨后由于出血導(dǎo)致的凝血酶活化，促進(jìn)細(xì)胞毒性水腫形成，并影響血腦屏障功能，進(jìn)一步導(dǎo)致血管源性水腫〔9〕，凝血酶的活化在這一過程中發(fā)揮了重要作用。現(xiàn)有研究表明黃芪提取物黃芪苷對(duì)于凝血酶激活途徑中的凝血酶受體基因的表達(dá)具有顯著的抑制作用，可以從源頭上阻斷這一病理改變的進(jìn)展，減輕腦出血后繼發(fā)性水腫造成的損傷〔10〕。此外，水蛭素也具有特異性凝血酶抑制劑的功能，與黃芪苷發(fā)揮協(xié)同作用，有效控制了繼發(fā)性水腫對(duì)腦神經(jīng)功能造成的損傷〔11〕。腦血疏口服液中的其余幾位藥材還具有益氣、活血、化瘀的功能，其中大黃、石菖蒲組成的中藥灌腸應(yīng)用于治療高血壓性ICH患者也取得了良好的療效〔12〕，提示本方劑組方合理，療效確切。

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〔2015-11-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

劉志華(1966-)，男，主任醫(yī)師，主要從事神經(jīng)內(nèi)科方面的研究。

R743

A

1005-9202(2017)01-0047-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.021

1 河南省中醫(yī)院中心試驗(yàn)室