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        牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法

        2017-02-02 03:09:04周麗麗谷杰孫婷婷鄒巖
        關(guān)鍵詞:方法

        周麗麗 ,谷杰 ,孫婷婷 ,鄒巖

        1.長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心,吉林長(zhǎng)春 130021;2.白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠,吉林長(zhǎng)春 130000

        牛髓為牛科野牛屬動(dòng)物黃牛Bos taurus domesticus Gmelin或水牛屬動(dòng)物水牛Bubalus bubalis Linnaeus的骨髓。牛髓,史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》《本草綱目》等古代醫(yī)藥經(jīng)典著作,記載了該品的藥用功效,我國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥著作《中華本草》《中藥大辭典》《中國(guó)動(dòng)物藥資源》中均有記載該藥材,詳細(xì)描述了該品的來(lái)源、原形態(tài)、生境分布、化學(xué)成分、藥理作用、性味、歸經(jīng)、功能主治及用法用量。具有補(bǔ)血益精,止渴,止血,止帶之功效。常用于精血虧損,虛勞羸瘦,消渴,吐衄,便血,崩漏,帶下[1]。

        現(xiàn)代研究表明,牛髓含有蛋白質(zhì)、脂肪、灰分、維生素B1、維生素BZ、尼克酸,其脂肪酸含月桂酸、肉豆酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸等。牛脊髓富含蛋白質(zhì),氨基酸組成比豬肉更接近人體需要,能提高機(jī)體抗病能力,對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育及術(shù)后,病后調(diào)養(yǎng)的人在補(bǔ)充失血、修復(fù)組織等方面特別適宜,寒冬食牛肉可暖胃,是該季節(jié)的補(bǔ)益佳品;牛脊髓有補(bǔ)中益氣,滋養(yǎng)脾胃,強(qiáng)健筋骨,化痰息風(fēng),止渴止涎之功效,適宜于中氣下隱、氣短體虛、筋骨酸軟、貧血久病及面黃目眩之人食用;牛脊髓能安胎補(bǔ)神,能安中益氣、健脾養(yǎng)胃、強(qiáng)筋壯骨。

        目前國(guó)內(nèi)具備批準(zhǔn)文號(hào)的3個(gè)中成藥品種血寶片、血寶膠囊、益血生膠囊處方中均含有該藥材,成藥品種均有完善的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),但處方中牛髓藥材無(wú)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及地方標(biāo)準(zhǔn),無(wú)法控制藥材質(zhì)量,嚴(yán)重制約了該品種的深入開(kāi)發(fā)。且牛髓本身為動(dòng)物鮮用組織,取用保存不當(dāng),極易影響藥材質(zhì)量。企業(yè)急切期待制訂牛髓藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。完善該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),控制藥材質(zhì)量,才能更好地保證中成藥的質(zhì)量、保障人民用藥安全,同時(shí)也可為牛髓藥材的開(kāi)發(fā)和廣泛應(yīng)用提供質(zhì)量保證。由于牛脊骨和腿骨均有髓腔,其中均有骨髓分布,有的企業(yè)以脊骨骨髓入藥,有的企業(yè)以腿骨骨髓入藥,由于基源記載中未規(guī)定骨髓來(lái)源,故二者均需作為研究對(duì)象。該文參照中國(guó)藥典氮測(cè)定法對(duì)其進(jìn)行了氮含量測(cè)定研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建立方法易于操作,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性良好,可作為牛髓藥材蛋白質(zhì)含量的質(zhì)控方法。

        1 儀器與試藥

        FOSS 8400型自動(dòng)定氮儀;硫酸滴定液(0.005 mol/L,F(xiàn)值為 1.011)為購(gòu)買(mǎi)后稀釋 [精密量取硫酸滴定液(0.05 mol/L,F(xiàn) 值為 1.011)100 mL, 置 1 000 mL 量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻];硫酸銨(來(lái)源:天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司,純度:99.95%~100.05%,基準(zhǔn)試劑)硫酸為分析純,消化劑為FOSS公司提供。牛髓藥材為自行購(gòu)買(mǎi),分別購(gòu)自長(zhǎng)春、內(nèi)蒙、延邊、吉林地區(qū)。

        2 測(cè)定方法

        供試品溶液的制備:取本品0.1 g,精密稱(chēng)定,置消化管中,分別加硫酸3 mL,消化劑0.6 g,置消化爐上,420℃消化,至溶液呈澄明的的綠色后,繼續(xù)加熱10 min,放冷,備用。

        測(cè)定法:將盛已消化樣品的凱氏定氮瓶安裝在定氮儀上,加40%氫氧化鈉溶液30 mL,硼酸吸收液30 mL,水30 mL,進(jìn)行自動(dòng)蒸餾和滴定。并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。

        3 方法驗(yàn)證

        3.1 耐用性考察

        供試品溶液制備方法的選擇參考中國(guó)藥典2015年版四部[2]氮測(cè)定法,對(duì)供試品制備條件進(jìn)行篩選:取本品(批號(hào) 20170225)0.1 g,4 份,精密稱(chēng)定,置消化管中,分別加硫酸 10 mL、5 mL、3 mL、2 mL,分別加消化劑 0.6 g,置消化爐上,420℃消化,依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1,顯示測(cè)定結(jié)果與加硫酸量無(wú)顯著差異,不同硫酸用量均能夠完全消化樣品,該法采用加酸量為5 mL。

        表1 供試品溶液制備方法的選擇結(jié)果

        3.2 專(zhuān)屬性考察

        取空白管同法消化、測(cè)定,作為陰性對(duì)照(定氮儀測(cè)定時(shí)自動(dòng)扣除空白)。

        3.3 線性關(guān)系考察

        精密稱(chēng)取硫酸銨0.120 9 g(含氮為25.62 mg),置100 mL容量瓶中,加水溶解,并稀釋至刻度,搖勻,精密量取 1、3、5、7、10、15 mL, 置于全自動(dòng)定氮儀上進(jìn)行蒸餾滴定,以氮含量(mg)為橫坐標(biāo),滴定液消耗量為縱坐標(biāo)計(jì)算回歸方程,結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明氮含量在0.256 2~3.843 0 mg范圍內(nèi),與滴定液消耗體積呈良好的線性關(guān)系。

        表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

        3.4 重復(fù)性考察

        精密稱(chēng)取樣品 0.08、0.10、0.12 g,每個(gè)濃度取 3份,照上述方法獨(dú)立制備9份供試品,分別測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3,結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

        3.5 回收率試驗(yàn)

        精密稱(chēng)取供試品0.05g,共稱(chēng)9份,精密加入硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液(每 1 豪升含氮 0.712 mg)0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL各3份,照上述方法測(cè)定,計(jì)算方法回收率,結(jié)果顯示該方法加樣回收率較好,見(jiàn)表4。

        3.6 樣品測(cè)定

        精密稱(chēng)取供試品0.1 g,照上述方法分別測(cè)定12批牛髓樣品蛋白質(zhì)含量,結(jié)果見(jiàn)表5。

        表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

        表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

        表5 樣品測(cè)定結(jié)果

        4 討論

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,采用全自動(dòng)常量凱氏定氮法,測(cè)定牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量。方法簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確度高,并且樣品中的油脂等其他成分不影響測(cè)定結(jié)果,可作為牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測(cè)定方法。

        [1]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[S].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:403.

        [2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2015年版四部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:88.

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