□ 趙光遠(yuǎn) 包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心

酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

□ 趙光遠(yuǎn) 包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心

現(xiàn)如今，食品安全問題已經(jīng)成為人們關(guān)注的重點(diǎn)話題。近年來，由于在各種原因的共同作用下，導(dǎo)致各種食品質(zhì)量安全問題經(jīng)常發(fā)生，甚至出現(xiàn)了食品中毒情況，從中可見食品安全問題對(duì)人及食品業(yè)產(chǎn)生的影響是巨大的。酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）可以在食品微生物、食品毒素及殘留農(nóng)藥及轉(zhuǎn)基因食品檢驗(yàn)中應(yīng)用，且應(yīng)用前景廣泛。本文主要探討了酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用，以期保證今后的食品安全。

酶聯(lián)免疫技術(shù)；食品檢驗(yàn)；ELISA原理

在長期農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，農(nóng)藥濫用及不合理使用問題，不僅導(dǎo)致出現(xiàn)嚴(yán)重的生態(tài)環(huán)境問題，還造成農(nóng)藥殘留導(dǎo)致的食品安全問題成為社會(huì)突出問題。農(nóng)藥殘留對(duì)人體產(chǎn)生的毒性作用，不僅會(huì)影響生理活性酶功能，還會(huì)對(duì)人體系統(tǒng)功能產(chǎn)生潛在危害，甚至?xí)?dǎo)致人體的免疫功能降低，從而出現(xiàn)致癌、致畸、致突變[1]。食品中出現(xiàn)的農(nóng)藥殘留，除了以往使用的GC-MS及GC等方法外，免疫學(xué)技術(shù)近年來也獲得了深入發(fā)展，其中應(yīng)用最為廣泛的就是以固相載體吸附抗原或抗體為基礎(chǔ)的酶聯(lián)免疫分析技術(shù)。

1 ELISA原理

ELISA原理是將特異抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)與酶學(xué)催化反應(yīng)進(jìn)行結(jié)合，以酶促反應(yīng)所具有的放大作用來顯示初級(jí)免疫反應(yīng)。ELISA是通過合適的載體，酶標(biāo)固相抗原與未知抗原競爭限定量標(biāo)記抗體結(jié)合位點(diǎn)，從而形成一種抗體復(fù)合物。在底物參與下，復(fù)合物上長的酶催化底物被水解或氧化還原為另一種物質(zhì)[2]。由于酶所具有的講解底物與顯色關(guān)系呈正比，通過肉眼可以觀察，進(jìn)而確定其是否存在未知抗原或未知含量。

2 ELISA在農(nóng)藥殘留檢測中應(yīng)用的技術(shù)要點(diǎn)

2.1 半抗原的設(shè)計(jì)

多數(shù)農(nóng)藥都是小分子物質(zhì)，本身不對(duì)機(jī)體產(chǎn)生刺激，并不產(chǎn)生針對(duì)農(nóng)藥抗原決定簇的特異性，需與大分子載體產(chǎn)生藕聯(lián)后才能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生刺激，進(jìn)而產(chǎn)生抗體。因此，需要合成可與載體藕聯(lián)，并能最大程度地對(duì)待測分析結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬的半抗原。有學(xué)者認(rèn)為，理想的半抗原應(yīng)包括待測物特征結(jié)構(gòu)、便于機(jī)體對(duì)特征結(jié)構(gòu)進(jìn)行識(shí)別的連接臂及末端可與蛋白載體產(chǎn)生共價(jià)連接的功能基團(tuán)[3]。因此，半抗原設(shè)計(jì)原則為盡可能保留待測物特征結(jié)構(gòu)，并在恰當(dāng)位置引入合適連接臂及功能基團(tuán)，方便其與大分子載體進(jìn)行藕聯(lián)。這時(shí)他們還強(qiáng)調(diào)連接臂的位置、性質(zhì)及長度、末端功能的半抗原合成體。連接臂長度為3～5個(gè)碳，若連接臂太短，則容易導(dǎo)致載體空間位阻對(duì)免疫系統(tǒng)識(shí)別產(chǎn)生影響，且半抗原立體機(jī)構(gòu)也容易導(dǎo)致載體局部化學(xué)環(huán)境的影響而出現(xiàn)變化；若太長，則可能導(dǎo)致半抗原出現(xiàn)折疊臂。一般可以引入非極性連接臂的使用，特殊情況下也可以使用極性連接臂。功能基團(tuán)可以在引入連接臂時(shí)帶入，進(jìn)而對(duì)待測物結(jié)構(gòu)直接進(jìn)行修飾進(jìn)而產(chǎn)生。

2.2 載體選擇

有無蛋白質(zhì)具有較復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，且蛋白質(zhì)免疫原較好，不僅可以增加半抗原的分子量，而且也可以利用半抗原的強(qiáng)免疫原性誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，從而對(duì)半抗原產(chǎn)生一定的載體效應(yīng)。因此，一般選擇蛋白質(zhì)作為載體。常見的載體一般有牛血清白蛋白、雞蛋清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白等。由于牛血清白蛋白物化性質(zhì)較為穩(wěn)定，很難出現(xiàn)變性，且價(jià)格較低，其在含有有機(jī)溶劑的情況下，就可以和半抗原進(jìn)行藕聯(lián)，藕聯(lián)后也可以保持可溶狀態(tài)。因此，運(yùn)用較為廣泛。

2.3 人工抗原及酶標(biāo)農(nóng)藥抗原合成

若農(nóng)藥分子中不具備連續(xù)的反應(yīng)基團(tuán)，農(nóng)藥分子就需要先經(jīng)過衍生后再利用連接物與載體蛋白連接。農(nóng)藥衍生不能使半抗原分子出現(xiàn)明顯改變，不然抗原性就會(huì)發(fā)生變化。若半抗原存在反應(yīng)功能團(tuán)，就能依據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)采用雙功能交聯(lián)試劑與方法，使半抗原得以與載體藕聯(lián)。如羧基半抗原，一般會(huì)利用混合酸酐法或二亞胺法進(jìn)行。另外，藕聯(lián)反應(yīng)不應(yīng)在高溫、低溫或強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行，且藕聯(lián)物的濃度及理化特性等都將會(huì)影響藕聯(lián)效果。

3 ELISA在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

一般來說，這種技術(shù)在食品檢驗(yàn)中應(yīng)用主要體現(xiàn)在三個(gè)方面：在動(dòng)物性食品檢驗(yàn)中應(yīng)用、在植物性食品檢驗(yàn)中應(yīng)用以及在病原微生物及生物毒素檢驗(yàn)中應(yīng)用。在動(dòng)物性食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用來說，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①在獸藥殘留及違禁藥品檢驗(yàn)中的效果突出。②在水產(chǎn)品檢驗(yàn)中的應(yīng)用。由于水產(chǎn)品本身就是動(dòng)物性食品中的重要組成，且許多水產(chǎn)品自帶毒性。因此，水產(chǎn)品的食品安全一直是困擾水產(chǎn)業(yè)發(fā)展的難題。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在水產(chǎn)品檢驗(yàn)中發(fā)揮了重要作用，并且解決了許多水產(chǎn)品安全問題。在植物性食品檢測中的應(yīng)用來說，由于植物性食品安全問題主要表現(xiàn)在農(nóng)藥殘留后進(jìn)入食品的微量農(nóng)藥及有毒代謝物等。而酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)可以應(yīng)用數(shù)十種農(nóng)藥酶免疫試劑盒，檢測有機(jī)磷、硫化氨基甲酸脂類等殘留農(nóng)藥。

4 結(jié)語

用于食品分析檢驗(yàn)的酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)應(yīng)用明顯，符合食品檢驗(yàn)的準(zhǔn)確、快速及易操作等要求，可以在社會(huì)食品檢測工作中應(yīng)用。

[1]楊萍．酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)分析及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[J]．科技創(chuàng)業(yè)家，2013(21)：219．

[2]張國范．酶聯(lián)免疫分析法在食品農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用[J]．中國醫(yī)藥指南，2013(28)：595-596．

[3]程育春．化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J]．中國實(shí)用醫(yī)藥，2016(15)：53-55．

趙光遠(yuǎn)（1986—），男，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士研究生，工程師。研究方向：食品藥品檢驗(yàn)檢測。