●孫彥聰

超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用

●孫彥聰

目的：探討超高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用。方法：對超高效液相色譜法在頭袍他美醋含量、有關(guān)物質(zhì)、聚合物及體內(nèi)藥代動力學(xué)和生物等效性研究的應(yīng)用情況進行綜述，并對未來發(fā)展趨勢進行探討。結(jié)果：超高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于頭袍他美醋藥物分析工藝研究、質(zhì)量控制過程、體內(nèi)藥代動力學(xué)、生物等效性研究中。結(jié)論：隨著新型固定相、檢測器的研究以及聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，超高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用前景廣闊。

超高效液相色譜法；抗生素；藥物分析

超高效液相色譜法是藥物分析中常用的一種色譜分析方法，它采用規(guī)則均勻的顆粒(通常直徑在10μm以下)作為固定相，通過高壓輸液泵輸送流動相，利用樣品中不同的組分被流動相攜帶移動的速度不同從而被分離檢出。超高效液相色譜法自1985年被收錄于《中國藥典》后，經(jīng)過三十年的發(fā)展，在藥品檢驗過程中的作用日益顯著，已成為藥品檢驗中最為重要的分析方法。對此，本文將基于筆者相關(guān)文獻研究，并主要以以頭抱他美醋這一抗生素為研究對象探討超高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應(yīng)用情況，并對未來發(fā)展趨勢進行探討?，F(xiàn)報道如下：

1 超高效液相色譜技術(shù)的原理優(yōu)點

超高效液相色譜的分離原理與高效液相色譜技術(shù)相同，但相對來說，超高效液相色譜技術(shù)的性能較好且具有更高的速度、靈敏度和分辨率。超高效液相色譜技術(shù)在線速度較大或者高壓下環(huán)境下依然可以實現(xiàn)良好的效果，對樣品進行高效的分離。超高效液相色譜技術(shù)使用的粒徑為1.7N，m，它比粒徑為5N，m的色譜柱提高了三倍的長度。與此同時，其柱不變，就可以使得分析是在提高3倍流速下進行的，大大縮短了分析時間。超高效液相色譜技術(shù)主要是通過減少顆粒的粒徑的方法，讓顆粒的色譜峰變窄，從而可以提高檢測的靈敏度。超高效液相色譜法與高效液相色譜法相比大大地提高了分辨率，更有利于對雜質(zhì)樣品進行離子化，有助于對基質(zhì)雜質(zhì)進行分離，提高檢測靈敏度。

2 超高效液相色譜法在頭抱他美醋藥物分析中的應(yīng)用

與經(jīng)典色譜分析方法相比分析耗時短，分離效率大為高。隨著高靈敏檢測器的開發(fā)和廣泛應(yīng)用，檢測靈敏度大為提高，為實現(xiàn)藥品的快速、高效、準(zhǔn)確的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。超高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于頭抱他美醋藥物分析工藝研究、質(zhì)量控制過程、體內(nèi)藥代動力學(xué)、生物等效性研究中。

2.1 含量、有關(guān)物質(zhì)

頭抱他美醋是以3一乙酞氧基一7一氨基頭抱烷酸為原料，與氨嚎厲乙酞氯經(jīng)過縮合后，再水解得到頭抱他美，頭抱他美與特戊酸嗅甲醋發(fā)生醋化反應(yīng)生成頭抱他美醋。生產(chǎn)合成工藝較為繁瑣，反應(yīng)過程受到反應(yīng)溫度、酸堿度、時間影響，導(dǎo)致底物的分解、副反應(yīng)的發(fā)生，致使所得產(chǎn)品的含量、雜質(zhì)種類、聚合物情況復(fù)雜?！吨袊幍洹分宣}酸頭抱他美醋采用等度洗脫法進行有關(guān)物質(zhì)檢查，王建等學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)改用梯度洗脫法，采用極性更大的流動相洗脫2min后逐步調(diào)整不同極性的流動相比例，至乙睛一甲醇一水一磷酸鹽緩沖液(540二142.5二250二25)維持巧min，大量在《中國藥典》條件下不能出峰的極性小的雜質(zhì)得到充分的洗脫和檢出。此外進行檢測對鹽酸頭抱他美醋，7一ADCA、頭抱他美酸、AE活性醋等合成過程中的中間產(chǎn)物，酸堿破壞、氧化破壞、高溫等分解產(chǎn)物等雜質(zhì)在233nm波長處均有相似的紫外吸收，使用二極管陣列檢測器檢測靈敏度更高。

2.2 聚合物的測定

采用分子排阻色譜法對頭抱他美醋中的高分子量聚合物進行檢查，根據(jù)高分子量聚合物的分子量大小選擇不同孔徑的葡聚糖凝膠色譜柱，藥物分子量較小，隨流動相進人色譜柱后進人滯留于固定相表面的孔穴中，在色譜柱中所走的途徑較長，保留時間也較長。聚合物分子空間尺寸較大、隨流動相進人色譜柱后不會進人固定相表面的孔穴中而直接通過色譜柱，保留時間短。采用超高效液相色譜法，能夠?qū)崿F(xiàn)體積不同的分子的分離和測定。

2.3 體內(nèi)藥代動力學(xué)和生物等效性研究

目前臨床上廣泛采用超高效液相色譜法進行血藥濃度監(jiān)測以及藥物體內(nèi)代謝產(chǎn)物的含量測定，用于體內(nèi)藥代動力學(xué)和生物等效性研究。林茵等學(xué)者選取健康的志愿者16例，所有實驗者禁食1h2后于次日清晨空腹口服鹽酸頭抱他美醋059，分別于用藥前及用藥后定時抽取靜脈血約3ml，分離血清，精密量取待測血漿02ml，加人6%的高氯溶液02ml，振蕩后離心，取上清液作為供試品溶液，注人超高效液相色譜儀，通過測定服藥后不同時間段內(nèi)的血漿中頭抱他美醋活性物的含量分析藥物體內(nèi)代謝過程及時間，為臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持。

3 HPLC及其聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

隨著研究的深入，超高效液相色譜儀的輸液泵、色譜柱、檢測器均有了新的發(fā)展，特別是檢測器的發(fā)展，隨著各個部件的改進，方法的靈敏度不斷提升。如：小角度激光散射檢測器(LALLSPD)可以用于多糖、蛋白質(zhì)類高聚物的高分子質(zhì)量物質(zhì)及分布的快速檢測，且不需要標(biāo)準(zhǔn)品對照。與此同時多種聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展為超高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用帶來了新的生機。如超高效液相色譜一熱噴霧一質(zhì)譜聯(lián)用，用于同一樣品溶液中不同組分的同步分離和測定，極大的提高了檢驗效率，樣品量及流動相的消耗大大下降；超高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用和超高效液相色譜一核磁共振聯(lián)用在藥物雜質(zhì)檢測中，能夠?qū)?zhǔn)分子離子進行多級裂解，從而提供化合物的相對分子量以及豐富的碎片信息，實現(xiàn)結(jié)構(gòu)信息的準(zhǔn)確分析，且分離檢驗過程中不受流動相中的緩沖鹽溶液的干擾。特別是在雜質(zhì)研究和藥物動力學(xué)研究階段，通常雜質(zhì)含量以及血藥、尿液等體液樣本中藥物濃度很低，分析難度大且干擾多，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)能夠快速準(zhǔn)確地測定藥物分析中的痕量物質(zhì)。在體內(nèi)藥物代謝過程臨床用藥監(jiān)測的研究中有著廣闊的發(fā)展前景，監(jiān)測血藥濃度的同時對其相關(guān)的代謝產(chǎn)物進行確證，操作簡便快捷，靈敏度高。

4 討論

抗生素的發(fā)現(xiàn)和使用開啟了人類對抗感染的新篇章，挽救了無數(shù)人的生命。天然抗生素的種類較少且均已產(chǎn)生了耐藥性，人工合成的抗生素已成為主導(dǎo)。每年有數(shù)以萬計的患者死于與之相關(guān)的藥源性疾病，藥品的安全性逐漸引起人們的重視。這些不良反應(yīng)一方面與藥物本身的藥理活性有關(guān)，更主要的是藥品中所存在的毒性雜質(zhì)密切相關(guān)?？股氐姆蛛x、分析是藥物分析中較困難的領(lǐng)域。微生物法、分光光度法、化學(xué)方法所需時間較長、專一性較差，正逐漸被取代。采用超高效液相色譜法進行抗生素類藥物分析具有快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確的特點，隨著今后各種新型固定相、檢測器的研究和開發(fā)，聯(lián)用技術(shù)的不斷發(fā)展，使該方法抗生素類藥物分析中的應(yīng)用不斷加大。

（作者單位：陜西國際商貿(mào)學(xué)院）

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孫彥聰，陜西國際商貿(mào)學(xué)院藥學(xué)B1302班。