徐 利，申長清，蔡文仙

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科，山東 濟(jì)寧 272000)

抗CCP抗體檢測在診斷小兒JIA中的應(yīng)用價值

徐 利，申長清，蔡文仙

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科，山東 濟(jì)寧 272000)

目的 探討環(huán)瓜氨酸(CCP)抗體檢測在診斷小兒幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)中的臨床應(yīng)用價值。方法 以2014年3月至2015年6月在濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院接受治療的50例JIA患兒為觀察對象，同時選取50例非JIA兒童作為對照組。觀察兩組抗CCP抗體陽性和血清炎癥細(xì)胞因子水平的差異，分析抗CCP抗體陽性率和血清炎癥細(xì)胞因子水平的相關(guān)性。結(jié)果 JIA組患兒抗CCP抗體陽性率為90.00%，明顯高于對照組(16.00%)，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=54.958，P<0.05)；JIA組患兒的C反應(yīng)蛋白(CRP)、血沉(ESR)、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、白細(xì)胞介素-18(IL-18)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)等炎癥細(xì)胞因子水平明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別為41.878、33.074、36.034、21.288、22.911，均P<0.05)；抗CCP抗體陽性率與CRP、ESR、IL-18和IL-6等炎癥細(xì)胞因子水平均呈正相關(guān)(r值分別為0.452、0.389、0.364、0.415，均P<0.05)，而與WBC水平無明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。結(jié)論 JIA患兒抗CCP抗體陽性率較高，且與血清炎癥細(xì)胞因子水平明顯正相關(guān)，可作為臨床鑒別監(jiān)測的指標(biāo)。

環(huán)瓜氨酸；幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎；炎癥細(xì)胞因子；相關(guān)分析

小兒幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(juvenile idiopathic arthritis，JIA)是小兒時期一種常見的結(jié)締組織病，以慢性關(guān)節(jié)炎為主要特點(diǎn)，可伴有全身多系統(tǒng)損害。長期的JIA病變可以導(dǎo)致脊柱、關(guān)節(jié)等部位畸形，其是導(dǎo)致幼兒殘疾以及失明的重要原因。臨床上對JIA的診斷主要依靠臨床癥狀以及MRI或者CT等影像學(xué)檢查，但早期JIA患者并不表現(xiàn)出明顯癥狀，且影像學(xué)檢查多無陽性發(fā)現(xiàn)，臨床應(yīng)用存在一定的局限性[1-2]。

血清學(xué)指標(biāo)檢測具有簡便、經(jīng)濟(jì)、可反復(fù)測量等優(yōu)點(diǎn)，類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF)以及細(xì)胞炎癥因子如白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-8等是反應(yīng)JIA對幼兒患者結(jié)締組織慢性損傷的重要因素，通過RF等細(xì)胞因子的檢測可以為提高JIA早診斷的真陽性率提供參考，同時為糖皮質(zhì)激素以及免疫抑制劑如環(huán)磷酰胺的治療結(jié)局提供預(yù)后參考。但相關(guān)研究證實(shí)單純RF或者聯(lián)合IL-6在評估JIA的治療轉(zhuǎn)歸中預(yù)后價值的靈敏度以及特異度的作用不佳，難以在臨床廣泛推廣[3-4]。環(huán)瓜氨酸(cyclic citrulinated peptide，CCP))抗體是以IgG型為主的抗體，對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等結(jié)締組織病具有較為理想的早期診斷評估價值[5-6]，但在JIA中的臨床探討不足。本次研究重在探討抗CCP抗體在小兒JIA中的表達(dá)變化，進(jìn)而有利于對早期診斷及治療預(yù)后的評估。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2014年3月至2015年6月在濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院接受治療的50例JIA患兒為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≤12周歲者；②確診為JIA；③無免疫系統(tǒng)疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；②合并感染性疾病者；③患兒家屬拒絕參與本項(xiàng)研究者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入研究對象50例，其中男28例，女22例，年齡3～11歲，平均7.35±2.38歲；病程3個月～4年，平均1.39±0.75年。對照組為體檢排除JIA的兒童，共納入50例，男25例，女25例，年齡3～12歲，平均7.42±2.81歲。兩組患兒的年齡、性別比較均無明顯差異(均P>0.05)，具有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患兒家屬均知情同意。

1.2方法

所有對象均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血標(biāo)本2mL，離心分離血清。采用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清IL-18和IL-6，分析試劑及定標(biāo)試劑均購自德國羅氏公司，分析儀器為美國雅培公司生產(chǎn)的i2000全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀。

采肘靜脈血2mL血樣在室溫下靜置30min后，4 000r/min離心10min分離血清，4℃保存待測，以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，靜置15min后混勻，對比稀釋為7個濃度，取出板條，除了對照孔外每個孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，劑量為100μL/孔，采用封板蓋封住，室溫反應(yīng)120min，使用PBS液體洗滌3次，除了空白對照孔，每孔加入檢測液(100μL)，室溫孵育1h，PBS洗滌3次，加入底物(50μL/孔)，避光孵育25min，加入終止液5min后測定450nm處吸光度。CCP抗體購自南京凱基生物科技有限公司，配套試劑購自羅氏檢測公司，嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行操作。

1.3評價指標(biāo)

觀察兩組患兒抗CCP抗體陽性情況和血清炎癥細(xì)胞因子[C反應(yīng)蛋白(CRP)、血沉(ESR)、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、IL-18和IL-6]水平的差異，分析抗CCP抗體陽性表達(dá)率和血清炎癥細(xì)胞因子水平的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)經(jīng)雙人錄入后，采用SPSS 11.5統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。計數(shù)資料采用例或百分率表示，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。根據(jù)資料類型采用t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析，采用Spearman相關(guān)分析法分析抗CCP抗體陽性表達(dá)率與血清炎癥細(xì)胞因子水平的相關(guān)性，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組抗環(huán)瓜氨酸抗體陽性情況

JIA組患兒抗環(huán)瓜氨酸抗體陽性率為90.0%，明顯高于對照組(16.0%)，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組抗CCP抗體陽性的比較結(jié)果(n)

Table 1 Comparison of positive expression of anti CCP antibody between two groups(n)

2.2兩組血清炎癥細(xì)胞因子水平情況

JIA組患兒的CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細(xì)胞因子水平均明顯高于對照組，兩組比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清炎癥細(xì)胞因子水平的比較結(jié)果±S)

2.3抗環(huán)瓜氨酸與炎癥細(xì)胞因子水平的相關(guān)情況

抗CCP抗體陽性率與CRP、ESR、IL-18和IL-6炎癥細(xì)胞因子水平均呈正相關(guān)(均P<0.05)，而與WBC水平無明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05)，見表3。

表3 抗CCP抗體情況與炎癥細(xì)胞因子水平的相關(guān)性分析結(jié)果

Table 3 The correlation analysis between the expression of anti CCP antibody and the level of inflammatory cytokines

抗CCP抗體陽性率rPCRP(mg/L)0．4520．026ESR(mm/H)0．3890．019WBC(×109/L)0．1580．124IL?18(mg/L)0．3640．037IL?6(mg/L)0．4150．024

3討論

3.1目前關(guān)于幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎病情評估的一般情況

國際風(fēng)濕病學(xué)聯(lián)盟兒科常委專家組2001年將兒童時期不明原因關(guān)節(jié)腫脹持續(xù)6周以上，統(tǒng)一定為JIA，JIA包括以往幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和幼年慢性關(guān)節(jié)炎等異質(zhì)性疾病。近年來相關(guān)研究表明，隨著環(huán)境污染、自身免疫性疾病以及遺傳等因素的誘導(dǎo)，JIA的發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢[7-8]，特別是近3年來JIA的患病率和發(fā)病率可分別達(dá)0.80%和0.34%[9]。JIA患兒可出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形如腕關(guān)節(jié)強(qiáng)直、掌指關(guān)節(jié)半脫位和手指“天鵝頸”樣畸形，肝脾及淋巴結(jié)腫大，胸膜炎及心包炎，病變的長期發(fā)展可以導(dǎo)致患兒重要關(guān)節(jié)部位功能的喪失，且JIA患兒伴發(fā)的虹膜睫狀體炎可導(dǎo)致其失明。由于JIA患兒早期關(guān)節(jié)以及脊柱等部位的損傷表現(xiàn)并不典型，臨床上難以早期通過影像學(xué)進(jìn)行診斷。RF可分為IgM、IgA、IgG、IgD、IgE 5型，其中針對IgG FC片段上抗原表位的一類自身抗體可以對于具有自身結(jié)締組織病以及慢性自身免疫性疾病具有良好的標(biāo)記作用，然而由于正常人群中即可出現(xiàn)部分RF因子的陽性表達(dá)，同時類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、滑膜炎以及各種炎癥反應(yīng)的急性期等均可出現(xiàn)RF的陽性表達(dá)[10-11]，導(dǎo)致RF在JIA病情嚴(yán)重程度的評估以及治療結(jié)局的預(yù)測價值不高。

3.2環(huán)瓜氨酸的背景研究分析

CCP是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者血清中抗filaggrin相關(guān)抗體識別的主要組成性抗原決定簇成分，分子構(gòu)造上主要由19個氨基酸殘基組成的瓜氨酸肽鏈中的2個絲氨酸替換為半胱氨酸，形成與β-轉(zhuǎn)角具有相似結(jié)構(gòu)的二硫鍵結(jié)構(gòu)。CCP抗體對RA具有相當(dāng)高的特異性和敏感性(68%～75%)[12-13]，但與JIA的關(guān)系研究不足，鑒于CCP抗體對于自身結(jié)締組織病以及慢性自身免疫性滑膜炎癥損傷具有較為理想的標(biāo)記作用，本研究創(chuàng)新性地探討了JIA組患兒的CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細(xì)胞因子與CCP的關(guān)系，進(jìn)而為揭示CCP在JIA患兒中的診斷以及預(yù)后作用提供參考。

3.3環(huán)瓜氨酸在幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎中的異常表達(dá)及與血清相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

本研究中JIA組患兒抗CCP抗體陽性率為90.00%，明顯高于對照組的16.00%，上升的CCP可以通過白細(xì)胞介素(IL-1、-6、-8)、腫瘤壞死因子(TNF)、粒-單細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)等，進(jìn)而誘導(dǎo)滑膜成纖維細(xì)胞及關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的慢性炎癥性損傷，特別是對于具有明顯關(guān)節(jié)腔累及、關(guān)節(jié)畸形或者全身多個系統(tǒng)損傷的患者，CCP的上升往往更為明顯。Lange等[14-15]學(xué)者通過分析94例JIA患兒的臨床診斷資料，發(fā)現(xiàn)CCP在多關(guān)節(jié)型患兒早期出現(xiàn)關(guān)節(jié)僵硬、腫痛和局部發(fā)熱等癥狀時，CCP即可上升3～4倍，且隨著JIA患兒末端指關(guān)節(jié)累及程度以及數(shù)量的增加，CCP可進(jìn)一步上升，線性關(guān)系較為明顯。CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細(xì)胞因子是評估JIA患兒慢性結(jié)締組織病的組織損傷程度和體內(nèi)炎癥系統(tǒng)反應(yīng)的重要指標(biāo)，CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6的上升對于早期診斷與JIA的臨床預(yù)后均具有一定的參考價值，CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6越高患兒的病情越為嚴(yán)重。本研究中JIA組患兒的CRP、ESR、WBC、IL-18和IL-6炎癥細(xì)胞因子水平明顯高于對照組，其中CRP可上升3～4倍，而IL-6也可上升至34.28±5.12mg/L，關(guān)節(jié)侵蝕或關(guān)節(jié)腔狹窄破壞等患兒的血清學(xué)IL-18和IL-6的上升程度往往更高，預(yù)后更差。經(jīng)相關(guān)性分析可見，抗CCP抗體陽性率與CRP、ESR、IL-18和IL-6炎癥細(xì)胞因子水平均呈正相關(guān)(均P<0.05)，進(jìn)一步表明CCP對于JIA患兒關(guān)節(jié)損害中以及對治療反應(yīng)的預(yù)測具有潛在的價值；但本研究并未發(fā)現(xiàn)WBC總數(shù)與JIA病情的關(guān)系，提示臨床上不應(yīng)以WBC或者中性粒細(xì)胞作為評估病情預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述，JIA患兒抗CCP抗體陽性率較高，且與血清炎癥細(xì)胞因子水平呈明顯正相關(guān)，可作為臨床治療結(jié)局預(yù)測的重要指標(biāo)，但本研究并未進(jìn)行相關(guān)診斷學(xué)的分析，存在一定的不足。

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[專業(yè)責(zé)任編輯： 孫 新]

Application value of anti CCP antibody in diagnosis of juvenile idiopathic arthritis

XU Li, SHEN Chang-qing, CAI Wen-xian

(Department of Pediatric, Affiliated Hospital of Jining Medical College, Shandong Jining 272000, China)

Objective To study the clinical application value of anti cyclic citrulinated peptide (CCP) antibody expression detection in diagnosis of juvenile idiopathic arthritis (JIA) unique in children. Methods Fifty children with JIA treated in Affiliated Hospital of Jining Medical College from March 2014 to June 2015 were selected as objects, and 50 healthy children were selected in control group. The positive expression of anti CCP antibody and serum inflammatory cytokine levels were observed in two groups, and the correlation between them was analyzed. Results The positive rate of anti CCP antibody in JIA group was 90.00%, which was higher than that (16.00%) in the control group with statistically significance (χ2=54.958,P<0.05). In JIA group levels of C reactive protein (CRP), erythrocyte sedimentation rate (ESR), white blood cell count (WBC), leukocyte mediated IL-18 (IL-18) and leukocyte mediated IL-6 (IL-6) levels were significantly higher than those in the control group, and the differences were statistically significant (tvalue was 41.878, 33.074, 36.034, 21.288 and 22.911, respectively, allP<0.05). The positive rate of anti CCP antibody was positively correlated with the levels of inflammatory cytokines including CRP, ESR, IL-18 and IL-6 (rvalue was 0.452, 0.389, 0.364 and 0.415, respectively, allP<0.05), but there was no significant correlation with WBC level (P>0.05). Conclusion The positive rate of anti CCP antibody in children with JIA is higher, and it is positively correlated with the levels of inflammatory cytokines in serum. It can be taken as an index in clinical differential controlling.

cyclic citrulinated peptide (CCP); juvenile idiopathic arthritis (JIA); inflammatory cytokines; correlation analysis

2016-05-09

徐 利(1979-)，女，主治醫(yī)師，主要從事兒內(nèi)科疾病的臨床診療工作。

蔡文仙，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.11.023

R726.8

A

1673-5293(2016)11-1364-04