謝 健魏 丹沈 超童曉云王雅莉李 曉

和春芳1石安華2陳文玲2劉 濤1趙 淳1

（1.云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，云南 昆明 650000；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650000）

·研究報告·

活血通脈顆粒對兔頸動脈粥樣硬化干預(yù)作用的實驗研究*

謝 健1魏 丹2沈 超2童曉云2王雅莉1李 曉1

和春芳1石安華2陳文玲2劉 濤1趙 淳1

（1.云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，云南 昆明 650000；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650000）

目的觀察活血通脈顆粒對兔頸動脈粥樣硬化（CAS）模型中頸動脈病變的影響。方法 將96只清潔級新西蘭大白兔隨機(jī)抽取10只為正常對照組，其余86只喂高脂飼料，11周后造模成后56只隨機(jī)分為模型組、自然消退組、普通飼料活血通脈顆粒低、中、高劑量組、普通飼料辛伐他汀組、高脂飼料活血通脈顆粒中劑量組、高脂飼料辛伐他汀組8組，分別連續(xù)給藥5周，各組經(jīng)耳緣靜脈采血，全自動生化分析儀測定血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。取兔頸動脈組織行HE染色，觀察其病理改變。結(jié)果正常組頸動脈內(nèi)皮光滑，未見斑塊和脂質(zhì)沉積，模型組內(nèi)皮明顯增生，斑塊內(nèi)含有大量泡沫細(xì)胞，粥樣斑塊分布廣泛。普通飼料活血通脈顆粒組較模型組內(nèi)皮增生程度明顯減輕，斑塊內(nèi)含較少泡沫細(xì)胞。普通飼料高劑量組整個動脈管壁層次尚清晰。模型組TC、TG、HDL-C、LDL-C與正常組比較均有明顯升高（P<0.01）。給藥5周后，活血通脈顆粒低、中、高劑量組和辛伐他汀組血脂4項與自然消退組比較，明顯下降（P<0.05）；普通飼料活血通脈顆粒中、高劑量組和辛伐他汀組與活血通脈顆粒低劑量組比較，明顯下降（P<0.05）；普通飼料活血通脈顆粒高劑量組與普通飼料辛伐他汀比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論活血通脈顆?？赡芤种祁i動脈粥樣硬化形成的作用。

活血通脈顆粒 頸動脈粥樣硬化 血脂 兔

隨著人口老齡化加快，頸動脈粥樣硬化發(fā)病率不斷上升。目前研究表明，10%~20%腦血管疾病是由于頸動脈因廣泛硬化、斑塊形成、管腔狹窄及阻塞使腦血流量減少而形成的［1］。動脈粥樣硬化（CAS）造成的慢性腦功能損害和急性腦血管病具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高及復(fù)發(fā)率高等特點［2-3］。因此，防治CAS的研究已成為降低心腦血管發(fā)病率及死亡率的關(guān)鍵。本文研究通過觀察活血通脈顆粒對頸動脈粥樣硬化家兔血脂4項血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇 （HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）檢測，探討活血通脈顆粒對防治CAS形成的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥進(jìn)一步防治CAS提供實驗數(shù)據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級新西蘭大白兔96只，雌雄不限，（2.20±0.4）g，昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供，合格證號：SCXK（滇）2011-0004?；A(chǔ)兔料合格證號：SCXK（滇）2011-0005。環(huán)境溫度20～26℃，室內(nèi)濕度40～60℃。

1.2 儀器 20℃冰箱（海爾電器有限公司），SC-3614低速離心機(jī)（中佳公司，）Finesse E+切片機(jī)（Thermo公司），CS-V1型攤片烤片機(jī)（孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司），BM-Ⅷ生物組織包埋機(jī) （孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司），TS-12A生物組織自動脫水機(jī)（孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司），BX51光學(xué)顯微鏡 （Olympus）公司，AB204-S電子分析天平 （Mettler-Toledo）公司產(chǎn)品，DHP-360型電熱恒溫培養(yǎng)箱 （北京市永光明醫(yī)療儀器廠），手術(shù)剪、刀片、手術(shù)鑷、5mL注射液，20ml注射液，普通采血管。

1.3 藥品 活血通脈顆粒：由紅景天、虎杖、三七粉、水蛭、茯苓、隔山消等組成，15 g/包，由云南省中醫(yī)院制劑中心配制。辛伐他汀，商品名舒降之，規(guī)格40 mg/片，由默沙東制藥有限公司生產(chǎn)（產(chǎn)品批號K005133）。

1.4 動物造模、分組、給藥 新西蘭白兔96只，隨機(jī)抽取10只正常空白組，基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，余下86只高脂飼料喂養(yǎng) （84.5%基礎(chǔ)飼料中加入8%豬油，15%蛋黃粉，0.75%膽固醇，其中蛋黃粉由同和生物公司提供，產(chǎn)品批號為20130305，膽固醇由安徽天啟公司提供，產(chǎn)品批號為20140316）每只動物每天投喂1次，每次投喂高脂飼料250 g。分別第9周、第11周后各抽取1只處死，取頸動脈血管進(jìn)行病理學(xué)檢查。光鏡下觀察見內(nèi)膜明顯增厚，伴有大量泡沫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞排列凌亂、不連續(xù)，大量平滑肌細(xì)胞遷移內(nèi)膜，視為造模成功［4-5］。造模成功后剩56只，將模型兔隨機(jī)分為模型組，自然消退組，普通飼料中藥低、中、高劑量組，普通飼料辛伐他汀組，高脂飼料中藥中劑量組，高脂飼料辛伐他汀組8組，每組7只。其中自然消退組，普通飼料中藥低、中、高劑量組，普通飼料辛伐他汀組5組飼養(yǎng)基礎(chǔ)飼料，高脂飼料中藥中劑量組，高脂飼料辛伐他汀組2組飼養(yǎng)高脂飼料。灌胃每日1次，均自由飲水，連續(xù)灌胃5周。根據(jù)臨床用藥劑量，常用實驗動物及人的體表面積比例［6-7］（劑量換算用），每1 kg體質(zhì)量的實驗兔每天給予1.87 mg。等體積蒸餾水灌胃。其成人服用生藥86 g/d，制成顆粒后每袋含生藥23.88 g，每袋重15 g。活血通脈顆粒低劑量組生藥5.5 g/kg每天灌胃給藥（相當(dāng)于人的臨床劑量的2倍），活血通脈顆粒中劑量組生藥11 g/kg每天灌胃給藥（相當(dāng)于人的臨床劑量的4倍），活血通脈顆粒高劑量組生藥22 g/kg每天灌胃給藥（相當(dāng)于人的臨床劑量的8倍）。

1.5 觀察指標(biāo) 觀察實驗兔一般情況，連續(xù)5周每天稱重，觀察精神狀態(tài)，飲食飲水，大小便變化；造模第11周，實驗兔禁食12 h，經(jīng)耳緣靜脈采血1.5 mL，全自動生化分析儀測定TC、TG、HDL-C、LDL-C。

1.6 采集頸動脈標(biāo)本 打開頸部，在無菌條件下取出頸動脈，并且完全剝離，剝離頸動脈外膜的結(jié)締組織，用0.9%的生理鹽水沖洗干凈，水平展開頸動脈內(nèi)膜，肉眼觀察頸動脈內(nèi)膜的變化－粥樣斑塊形態(tài)、分布。取頸動脈組織10%甲醛固定、脫水、常規(guī)石蠟包埋切片，每只實驗兔的頸總動脈取相同的切面，切片厚5 μm，HE染色。光鏡下觀察組織的病理改變，評價頸動脈粥樣硬化程度。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以（s）表示，采用t檢驗，多樣本均數(shù)比較（M）用單因素ANOVA法。數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗，假定方差齊時，用兩兩比較LSD法，假定方差不齊時，用秩和檢驗。P＜0.05為差異有顯著意義。

2 結(jié) 果

2.1 實驗兔一般情況 造模后，第3周開始死亡，第8、9周死亡最多達(dá)13只。造模期間共死亡30只，獲得成功模型兔56只。兔子體重迅速增加，活動較差，反應(yīng)遲緩，第7周后飲食量開始下降?？瞻捉M，生長良好，活動好，反應(yīng)迅速，飲水、二便正常。

2.2 各組血脂4項比較 見表1。實驗前各組兔TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較無明顯差異 （P＞0.05）；11周后，模型組血脂4項明顯升高（P＜0.01）。

表1 兩組造模后血脂檢測比較（mmol/L，s）

表1 兩組造模后血脂檢測比較（mmol/L，s）

與空白組比較，*P＜0.01。

別 n TC空白組 7 1.99±0.21模型組 7 30.82±1.44*TG HDL-C LDL-C 0.67±0.08 0.56±0.12 1.29±0.17 1.96±0.16*2.79±0.19*26.64±1.16*

2.3 HE染色頸動脈切片 見圖1?？瞻捉M動脈管腔內(nèi)膜完整光滑，未見動脈粥樣硬化斑塊和泡沫細(xì)胞。模型組內(nèi)膜明顯增厚，管腔變窄且程度不規(guī)則。內(nèi)皮下可見大量泡沫細(xì)胞堆積。

圖1 頸動脈HE染色（×40）

2.4 各組兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較 見表2。給藥5周后，普通飼料活血通脈顆粒組、普通飼料辛伐他汀組TC、TG、HDL-C、LDL-C較自然消退組明顯降低（P＜0.05）；普通飼料活血通脈顆粒中、高劑量組、普通飼料辛伐他汀組血脂4項較普通飼料活血通脈顆粒低劑量組明顯降低（P＜0.05）；普通飼料活血通脈顆粒高劑量組血脂4項較普通飼料辛伐他汀組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；高脂飼料活血通脈顆粒中劑量組血脂4項較普通飼料活血通脈顆粒中劑量組明顯升高（P＜0.05）。

表2 各組兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較（mmol/L，s）

表2 各組兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較（mmol/L，s）

與自然消退組比較，*P＜0.05；與普通飼料活血通脈顆粒低劑量組比較，☆P＜0.05；與普通飼料辛伐他汀比較，△P＞0.05；高脂飼料活血通脈顆粒中劑量組與普通飼料活血通脈顆粒中劑量組比較，▲P＜0.05。

組別 n自然消退組 7普通飼料辛伐他汀組 7普通飼料活血通脈顆粒低劑量組 7 TC TG HDL-C LDL-C 17.96±0.78☆1.55±0.07☆1.71±0.18☆12.83±0.81☆4.93±0.67*☆0.78±0.05*☆0.83±0.21*☆3.39±0.42*☆11.94±0.81*1.05±0.04*1.13±0.17*7.64±0.51*普通飼料活血通脈顆粒中劑量組 7 7.11±0.62*☆0.91±0.03*☆1.17±0.23*☆5.79±0.37*☆普通飼料活血通脈顆粒高劑量組 7 5.02±0.43*△☆0.77±0.07*△☆0.74±0.31*△☆3.57±0.15*△高脂飼料活血通脈顆粒中劑量組 7 13.37±0.58▲1.51±0.10▲1.48±0.22▲9.15±0.31▲高脂飼料辛伐他丁組 7 6.49±0.62 0.86±0.09 1.06±0.23 4.68±0.29

2.5 HE染色頸動脈切片 見圖2。普通飼料活血通脈顆粒組、普通飼料辛伐他汀組比自然消退組細(xì)胞內(nèi)膜增生程度明顯減輕，內(nèi)膜下僅有少量泡沫細(xì)胞。普通飼料活血通脈顆粒高劑量組、普通飼料辛伐他汀組細(xì)胞排列尚規(guī)則，內(nèi)膜下有極少量泡沫細(xì)胞。

圖2 頸動脈HE染色（×40）

3 討 論

中醫(yī)學(xué)素來無“頸動脈粥樣硬化”診斷，但根據(jù)其臨床表現(xiàn)及發(fā)病特點，往往被歸屬于“眩暈”“頭痛”等范疇。趙淳教授（全國第三、四批師帶徒指導(dǎo)老師、云南省榮譽(yù)名中醫(yī)、云南省中西醫(yī)結(jié)合急診、急救醫(yī)學(xué)及心腦血管病知名專家）認(rèn)為飲食不節(jié)、過食肥甘是高脂血癥、早期頸動脈粥樣硬化的主要外因；脾虛失運(yùn)，水谷精微不歸正化，生成脂濁痰濕，注于血液是其發(fā)病的根本病機(jī)。頸動脈粥樣硬化以腎元虧虛為中心，心肝脾功能失調(diào)為基礎(chǔ)，以濕熱、痰濁、淤血阻滯脈絡(luò)為標(biāo)實。根據(jù)趙淳教授治療血瘀證理論經(jīng)驗［8］，運(yùn)用趙淳教授經(jīng)驗方活血通脈方治療頸動脈粥樣硬化，取得了較好的臨床療效［9-10］。謝健等［11］認(rèn)為活血通脈顆粒干預(yù)CAS進(jìn)程。常紅等［12］認(rèn)為通過飲食和生活方式的干預(yù)，可以在在早期預(yù)防和輔助治療動脈粥樣硬化的方面有著西醫(yī)不可比擬優(yōu)勢，其發(fā)展前景非常廣闊。

中醫(yī)藥治療CAS在改善癥狀、提高療效積累了豐富的臨床經(jīng)驗，療效確切?；钛}顆粒由紅景天、虎杖、三七、水蛭、茯苓、隔山消等組成。現(xiàn)代藥理和臨床研究發(fā)現(xiàn)，紅景天具有增強(qiáng)免疫功能、保護(hù)心腦血管及抗癌抗抑郁的等功效，沈偉等［13］研究證實紅景天具有抑制動脈粥樣硬化形成，減少斑塊內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）表達(dá)和血管新生的作用?；⒄韧ㄟ^調(diào)節(jié)血脂、抗炎、抑制血小板聚集、抗氧化，降低患冠心病的風(fēng)險，降低總膽固醇和低密度脂蛋白，保護(hù)血管內(nèi)皮，抑制內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌增殖等方面發(fā)揮抗AS的作用［14］。三七有止血、抗血栓、促進(jìn)造血、擴(kuò)血管、降血壓、抗心肌缺血、抗腦缺血、抗心律失常、抗動脈粥樣硬化等作用。茯苓有利尿、提高免疫功能、有降脂作用。全方具有活血化瘀、益氣通脈、解毒豁痰之效，其特點是通補(bǔ)兼施，標(biāo)本兼顧，痰、瘀、毒、虛同治。

本研究通過高脂飼料干預(yù)新西蘭白兔復(fù)制CAS模型，檢測血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，造模成功后飼養(yǎng)高脂飼料血脂4項比飼養(yǎng)普通飼料明顯增高。提示通過飲食和生活方式的改善，可調(diào)節(jié)血脂、穩(wěn)定斑塊作用。藥物治療組與自然消退組相比，血脂明顯改善，說明與自然消退組比藥物治療組加快血脂改善。進(jìn)而觀察病理圖片，說明活血通脈顆粒可調(diào)節(jié)血脂、減少斑塊，保護(hù)血管內(nèi)皮，抑制內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增殖的作用，達(dá)到干預(yù)CAS的目的。普通飼料活血通脈顆粒高劑量組與普通飼料辛伐他汀組相比，數(shù)據(jù)均相似，說明與普通飼料辛伐他汀組相比普通飼料活血通脈顆粒高劑量組降脂效果無明顯差異。謝健等［15］認(rèn)為活血通脈顆粒具有延遲斑塊形成、穩(wěn)定斑塊、治療CAS的目的。故此，活血通脈顆粒具有辛伐他汀相似的預(yù)防頸動脈粥樣硬化的作用。

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Experimental Study on the Intervention Effect of Huoxue Tongmai Granule on Carotid Arteriosclerosis in Rabbits

XIE Jian，SHEN Chao，TONG Xiaoyun，et al. The First Affiliated Hospital of Yunnan Institute of Traditional Chinese Medicine，Yunnan，Kunming 650000，China.

Objective：To discuss the intervention effect of Huoxue Tongmai granule on carotid arteriosclerosis（CAS）in rabbits and the curative effect of lipid regulation，stable plaques in science evaluation，thus providing theoretical basis for clinical medication.Methods：10 rabbits were randomly selected from 96 New Zealand white rabbits，clean level only，as the normal control group，the remaining 86 were fed with high fat forage.11 weeks later，56 model rabbits were randomly divided into model group，natural healing group and normal forage Huoxue Tongmai granule low，medium and high dose group，normal forage simvastatin group，high-fat diet Huoxue Tongmai granule medium dose group，high-fat feedstuff simvastatin group，totally 8 groups with 7 rabbits in each group.After each group was treated continuously for five weeks，blood was collected from ear marginal veins，TC，TG，HDL-C，LDL-C were detected with automatic biochemical analyzer.The rabbit carotid artery tissue was extracted for HE staining to observe its pathologic change.Results：The carotid artery endothelium was smooth without plaques and lipid in the normal group.In the model group，endothelial proliferation was obvious，plaque contained a large number of foam cells，atheromatous plaques were widely distributed.The endothelial proliferation condition was significant improved and plaque contained less number of foam cells in the normal forage Huoxue Tongmai granule group.The whole arterial wall level was relatively clear in the normal forage Huoxue Tongmai granule high dose group.Compared with normal group，TC，TG，HDL-C，LDL-C were significantly increased in the model group（P<0.01）.In five weeks after the treatment，Compared with the natural healing group，TC，TG，HDL-C，LDL-C were significantly decreased in the Huoxue Tongmai granule low，medium and high dose group and simvastatin group（P<0.05）.Compared with the Huoxue Tongmai granule low dose group，TC，TG，HDL-C，LDL-C were significantly decreased in the normal forage Huoxue Tongmai granule medium and high dose group and simvastatin group（P＜0.05）.There was no statistical difference between the normal forage Huoxue Tongmai granule high dose group and normal forage simvastatin group（P＞0.05）.Conclusion：Huoxue Tongmai granule can inhibit the carotid artery atherosclerosis formation.

Huoxue Tongmai granule；Carotid atherosclerosis；Blood lipid；Rabbit

R285.5

A

1004-745X（2016）12-2249-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.12.013

2016-04-06）

國家中醫(yī)藥管理局趙淳名醫(yī)傳承工作室研究項目；云南省自然基金資助項目（2011FZ264）