劉飛 楊大剛△ 孫誠誼 王惠群 劉影 李福堂 梁一

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科；2.貴陽醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室；3.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床營養(yǎng)科，貴州 貴陽 550004)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)了解梗阻性黃疸不同時(shí)期肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)并抗氧化免疫營養(yǎng)治療梗阻性黃疸患者療效觀察

劉飛1楊大剛1△孫誠誼1王惠群2劉影3李福堂1梁一3

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科；2.貴陽醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室；
3.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床營養(yǎng)科，貴州 貴陽 550004)

目的 建立梗阻性大鼠模型，了解梗阻性黃疸不同時(shí)期肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化。研究抗氧化免疫營養(yǎng)治療對有營養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)的梗阻性黃疸病人其肝功能及營養(yǎng)狀態(tài)的影響，為臨床抗氧化免疫營養(yǎng)治療提供理論依據(jù)。方法 (1)選取健康大鼠54只隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組與膽總管結(jié)扎組，建立梗阻性黃疸大鼠模型。于術(shù)后5、12、19 d 三個(gè)時(shí)相點(diǎn)檢測SOD、MDA在大鼠肝臟組織中的含量。(2)選取30例有營養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)(NRS2002評分>3分)的中重度梗阻性黃疸病人，隨機(jī)分對照組和干預(yù)組。對照組給予規(guī)范的腸外與腸內(nèi)營養(yǎng)支持，干預(yù)組在規(guī)范營養(yǎng)支持的基礎(chǔ)上添加抗氧化劑(維生素C)及免疫營養(yǎng)素(谷氨酰胺)，于入院第7天檢測生化指標(biāo)，比較兩組各指標(biāo)的差異。結(jié)果 膽總管結(jié)扎組術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)的SOD含量均低于正常組及假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MDA含量均高于正常組及假手木組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療7 d后，干預(yù)組病人的ALT、AST與JBIL，恢復(fù)優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); PA水平高于對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ALB水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 梗阻性黃疸病人處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，抗氧化免疫營養(yǎng)治療有利于肝功能和營養(yǎng)狀態(tài)的恢復(fù)。

梗阻性黃疸； 抗氧化； 免疫營養(yǎng)； 氧化應(yīng)激

梗阻性黃疸病人多數(shù)都伴有明顯的肝臟功能及結(jié)構(gòu)的損傷。有學(xué)者[1]認(rèn)為自由基及其引起的氧化應(yīng)激貫穿各種肝臟病變的始終，是引起肝臟病變的主要機(jī)制之一。VC、VE和谷胱甘肽等是研究較多的抗氧化劑，而在傳統(tǒng)營養(yǎng)基礎(chǔ)上添加免疫營養(yǎng)素谷氨酰胺可促進(jìn)病人肝功能的恢復(fù)，改善其營養(yǎng)狀態(tài)[2]。因此，我們對大鼠進(jìn)行梗阻性黃疸造模,研究其是否存在氧化應(yīng)激，同時(shí)研究抗氧化劑和免疫營養(yǎng)素對有營養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)的梗阻性黃疸病人的肝功能及營養(yǎng)狀態(tài)的影響，為這部分病人使用抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 基礎(chǔ)研究部分 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SD大鼠(由貴陽醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供)。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，選擇體質(zhì)量為250～300 g的大鼠54只。隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組和膽總管結(jié)扎組，建立梗阻性黃疸大鼠模型，其中每組各分為結(jié)扎術(shù)后5、12、19 d三個(gè)時(shí)相點(diǎn)，每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只動(dòng)物。(2)實(shí)驗(yàn)方法：正常組不作任何操作。假手術(shù)組分離膽總管但不結(jié)扎。膽總管結(jié)扎組膽總管雙重結(jié)扎，完成梗阻性黃疸造模。使用ELISA法檢測在不同時(shí)相點(diǎn)肝臟組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malndialdehyde，MDA)的含量。

1.2 臨床研究部分 (1)一般資料：選取2013年1月至2014年3月于貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診的30例膽紅素> 17 lumol/L且NRS2002評分>3分的梗阻性黃疸病人，隨機(jī)分為對照組(18例)和干預(yù)組(12例)。每位病人均經(jīng)臨床明確診斷，有明確的病因、病史、癥狀、體征及相關(guān)影像資料及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。兩組病人年齡、性別、所患良惡性疾病、治療各生化指標(biāo)均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)治療措施：兩組病人均在入院后2～3 d解除膽道梗阻。對照組每日予以規(guī)范的腸外+腸內(nèi)營養(yǎng)支持。干預(yù)組在規(guī)范營養(yǎng)支持的基礎(chǔ)上每日添加丙氨酰一谷氨酰胺1.5～2.0 mL/kg，維生素C 200 mg。兩組患者治療期間均予以常規(guī)護(hù)肝治療。

1.3 指標(biāo)檢測 于入院第7天空腹抽取外周靜脈血，檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶( alanine aminotransferase ,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、總膽紅素(totai bilirubin，TBIL)、血清白蛋白(serum albumin，ALB)及前白蛋白(prealbumin，PA)的含量。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠3個(gè)時(shí)相點(diǎn)氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化 總膽管結(jié)扎組大鼠術(shù)后5、12、19 d肝臟組織中SOD的含量均低于正常組及假手術(shù)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MDA的含量均高于正常組及假手術(shù)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

組別時(shí)相點(diǎn)SOD/(IU/L)MDA/(nmol/L)5 12.95±1.01 3.37±0.23正常組12 13.37±1.18 3.29±1.0319 12.47±1.57 3.37±0.225 13.11±0.72 3.35±0.32假手術(shù)組12 13.00±0.45 3.48±0.1419 12.51±1.25 3.39±0.185 11.74±0.76*△ 3.72±0.25*△膽總管結(jié)扎組12 11.34±0.62*△ 4.02±0.19*△19 10.00±1.34*△ 3.73±0.19*△

注：與正常組比較，*P<0.05;與假手術(shù)組比較，△P<0.05。

2.2 兩組病人生化指標(biāo)的比較 入選病人治療前各生化指標(biāo)無差異，但在治療7 d后，干預(yù)組病人的ALT、AST與IBfL恢復(fù)優(yōu)于對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); PA水平高于對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ALB水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別ALT/(U/L)AST/(U/L)TBIL/(μmol/L)ALB/(g/L)PA/(mg/L) 對照組89.2±52.658.9±30.6287.5±88.6735.1±3.8101.5±43.2 干預(yù)組59.3±48.4*40.1±31.8*226.1±88.78*36.6±4.2144.9±47.6*

注：與對照組比較，*P<0.05。

3 討 論

肝細(xì)胞線粒體含量豐富，極易產(chǎn)生大量的氧自由基，而過量的氧自由基容易導(dǎo)致氧化應(yīng)激。研究[l-3]表明氧自由基引起的氧化應(yīng)激是肝臟病變的基礎(chǔ)并貫穿各種肝臟病變的始終，是引起肝臟病變的主要機(jī)制之一。本研究顯示：膽總管結(jié)扎組大鼠與正常組和假手術(shù)組相比，肝臟組織中MDA水平明顯升高但SOD水平明顯降低，表明此時(shí)梗阻性黃疸大鼠體內(nèi)自由基生成與清除的動(dòng)態(tài)平衡被打破，處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。而這種失衡狀態(tài)在體內(nèi)持續(xù)越久組織細(xì)胞抗氧化防御保護(hù)功能越弱，肝損傷程度越重[4]。

谷氨酰胺在人體正常生理代謝與疾病的氧化應(yīng)激中發(fā)揮的作用也越來越受到關(guān)注[5]。Abiles等[6]的研究證明了補(bǔ)充谷氨酰胺可以提高處于疾病氧化應(yīng)激狀況下患者的抗氧化能力，減少多余自由基造成的氧化損傷。韓剛等[7]的研究證明了谷氨酰胺能夠改善梗阻性黃疸患者的免疫狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示：給予梗阻性黃疸患者Vc和谷氨酰胺治療后，肝功能指標(biāo)ALT、AST、IBIL較對照組恢復(fù)地更快，營養(yǎng)指標(biāo)PA亦升高，說明抗氧化免疫營養(yǎng)治療對患者營養(yǎng)狀態(tài)和肝功能恢復(fù)有一定的作用。但營養(yǎng)指標(biāo)ALB雖然升高，但和對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮為ALB半衰期較長，本研究觀測時(shí)間為7 d，導(dǎo)致未能準(zhǔn)確觀察其變化，有待更深入的研究。

本研究證實(shí)了梗阻性黃疸患者明確存在著氧化應(yīng)激，初步證明給予患者抗氧化免疫營養(yǎng)治療后，他們的營養(yǎng)狀態(tài)和肝功能有一定的恢復(fù)，但還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行更深入的研究。

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2016-09-23)

△通信作者，E-mail:ydg435888@126.com