馬 驍，張志欣，蔡劍平，潘芹芹，樊 甦，王曉艷，毛 偉，王振雷，陳 強(qiáng)，李劍平，張德梅，于衛(wèi)建，趙 星，杜 丹，劉 琪0，韓 穎0，沈 捷,△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院HLA與移植免疫實驗中心，南京 210029；2.北京市紅十字血液中心 100088；3.中華骨髓庫質(zhì)量控制實驗室，北京 100730；4.重慶市血液中心 400015；5.河北省血液中心，石家莊 050061；6.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所，成都 610052；7.遼寧省血液中心，沈陽 110096；8.山西省太原市紅十字中心血站 030024；9.遼寧省大連市紅十字血液中心 116001；10.中國造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫管理中心技術(shù)服務(wù)部，北京100010；11.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，南京 210029)

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·論 著·

中國高尿酸血癥患者HLA-B*58:01基因的人群分布*

馬 驍1，張志欣2，蔡劍平3，潘芹芹1，樊 甦1，王曉艷1，毛 偉4，王振雷5，陳 強(qiáng)6，李劍平7，張德梅8，于衛(wèi)建9，趙 星1，杜 丹1，劉 琪10，韓 穎10，沈 捷1,11△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院HLA與移植免疫實驗中心，南京 210029；2.北京市紅十字血液中心 100088；3.中華骨髓庫質(zhì)量控制實驗室，北京 100730；4.重慶市血液中心 400015；5.河北省血液中心，石家莊 050061；6.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所，成都 610052；7.遼寧省血液中心，沈陽 110096；8.山西省太原市紅十字中心血站 030024；9.遼寧省大連市紅十字血液中心 116001；10.中國造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫管理中心技術(shù)服務(wù)部，北京100010；11.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，南京 210029)

目的 全面了解中國大陸各地區(qū)HLA-B*58:01基因的陽性率和頻率，有效地指導(dǎo)高尿酸血癥患者臨床用藥及臨床基因篩查的必要性。方法 對中華骨髓庫891 793例中國大陸人群行HLA高分辨分型，并按31個省市自治區(qū)分層，明確HLA-B*58:01基因陽性率和基因頻率。結(jié)果 中國大陸人群HLA-B*58:01基因陽性率呈現(xiàn)南方人群中較其他地區(qū)高；按地區(qū)分類，華南地區(qū)的HLA-B*58:01基因陽性率最高，西南地區(qū)及北方地區(qū)陽性率較低；按省市自治區(qū)分類，陽性率較高的分別為福建(28.43%)、廣西(20.75%)、海南(20.20%)、廣東(19.66%)、浙江(18.38%)，陽性率較低的為天津(3.52%)、內(nèi)蒙古(3.49%)、西藏(3.27%)、河北(3.11%)、山西(3.08%)。結(jié)論 重視高尿酸血癥HLA-B*58:01基因陽性人群，尤其應(yīng)對中國南方人群高尿酸血癥患者進(jìn)行HLA-B*58:01基因篩查，以避免使用別嘌呤醇所致嚴(yán)重不良后果。

高尿酸血癥； 別嘌呤醇； HLA-B*58:01基因； 中華骨髓庫

高尿酸血癥是由于各種原因引起體內(nèi)尿酸升高或排泄減少而引起的一種代謝性疾病，同時，高尿酸血癥與心血管疾病、慢性腎臟病及代謝綜合征密切相關(guān)。隨著近年來中國社會經(jīng)濟(jì)的全面發(fā)展和居民生活水平不斷提高，高尿酸血癥的患病率逐年升高，已成為繼糖尿病之后嚴(yán)重威脅人民健康的重大慢性非感染性疾病。

別嘌呤醇是治療高尿酸血癥和(或)痛風(fēng)的一線藥物，對于大部分的高尿酸血癥及痛風(fēng)患者均能起到很好的治療作用，但也會對一些特定HLA基因型患者誘發(fā)嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)，更嚴(yán)重者甚至導(dǎo)致Stevens-Johnson綜合征(SJS)或中毒性表皮壞死松懈(TEN)[1]；對于別嘌呤醇引起的這些不良反應(yīng)，輕則引發(fā)輕微皮膚過敏，重則威脅患者生命，SJS/TEN的病死率更是達(dá)到10%～40%[2]。國外及中國臺灣多項研究均表明，別嘌呤醇引起的不良反應(yīng)與HLA-B*58:01基因密切相關(guān)[3-5]。為了更有效地指導(dǎo)臨床用藥和調(diào)查高尿酸血癥患者進(jìn)行臨床基因篩查的必要性，本文對中國大陸不同地區(qū)891 793例人群中HLA-B*58:01基因陽性率和頻率的分布進(jìn)行了危險性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象為中華骨髓庫中入庫時間為2003～2015年，籍貫為中國大陸地區(qū)，具有高分辨率分型數(shù)據(jù)的891 793例骨髓捐獻(xiàn)志愿者。依照中華骨髓庫志愿者捐獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)，所有志愿者入庫時，要求身體健康，年齡為16～45歲。按照“中國造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者血樣采集標(biāo)準(zhǔn)”采集志愿者靜脈血3 mL，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，進(jìn)行DNA的提取。選用以下兩種方法之一獲得HLA基因高分辨率分型結(jié)果：若選用高分辨率序列特異性引物技術(shù)(SSO HD)法，則提取后的DNA經(jīng)過擴(kuò)增、雜交、熒光標(biāo)記、Luminex軟件分析，最終得到HLA基因高分辨率分型結(jié)果；若選用測序分型技術(shù)(SBT)法，則提取后的DNA經(jīng)過擴(kuò)增、純化、雜交、測序、得到的結(jié)果經(jīng)過分型軟件分析，最終獲得HLA基因高分辨率分型結(jié)果。

1.2 數(shù)據(jù)采集 所有數(shù)據(jù)均來源于中華骨髓庫，數(shù)據(jù)采集由中華骨髓庫分設(shè)在各地的分型實驗室完成，數(shù)據(jù)經(jīng)質(zhì)控合格后，進(jìn)行數(shù)據(jù)入庫，HLA-B位點高分?jǐn)?shù)據(jù)結(jié)果以*后4位為準(zhǔn)。

1.3 地區(qū)分組 按照研究對象籍貫對研究對象進(jìn)行分組，籍貫采集隨中華骨髓庫志愿者信息錄入，指某人太祖父(或太祖母)的長久居住地或出生地，與戶籍所在地不同。按籍貫分組后，按中國地理位置七分法進(jìn)行分組，即華東(山東省、江蘇省、安徽省、浙江省、福建省、上海市)、華南(廣東省、廣西壯族自治區(qū)、海南省)、華中(湖北省、湖南省、河南省、江西省)、華北(北京市、天津市、河北省、山西省、內(nèi)蒙古自治區(qū))、西北(寧夏回族自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū)、青海省、陜西省、甘肅省)、西南(四川省、云南省、貴州省、西藏自治區(qū)、重慶市)、東北(遼寧省、吉林省、黑龍江省)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，HLA-B*58:01基因陽性率=陽性標(biāo)本數(shù)/標(biāo)本總數(shù)×100%；HLA-B*58:01基因頻率=等位基因數(shù)/(2×標(biāo)本總數(shù))×100%，分析方法為一般頻數(shù)分布。

2 結(jié) 果

2.1 各地區(qū)人群HLA-B*58:01基因陽性率及頻率 在中國大陸人群中HLA-B*58:01基因陽性共計102 657例，占總體人群11.51%，其中華南地區(qū)HLA-B*58:01基因陽性率最高，占該地區(qū)人群的20.19%，依次為華東、西南、華中、西北、東北，以華北地區(qū)HLA-B*58:01基因陽性率最低，為6.38%。見表1。對HLA-B*58:01基因頻率按地區(qū)進(jìn)行分析，華南地區(qū)最高，為10.69%，其余依次為華東、西南、華中、西北、東北，華北地區(qū)最低，為3.24%。見表2。

2.2 各省市自治區(qū)人群HLA-B*58:01基因分布 對中國大陸各省市自治區(qū)HLA-B*58:01基因陽性率及頻率進(jìn)行分析，其中福建、廣西、海南、廣東、浙江5個東南沿海省市自治區(qū)HLA-B*58:01基因陽性率及基因頻率最高，天津、內(nèi)蒙古、西藏、河北、山西最低。見表3、4。

表1 中國大陸各地區(qū)HLA-B*58:01基因陽性率

表2 中國大陸各地區(qū)HLA-B*58:01基因頻率

表3 中國大陸各省市自治區(qū)HLA-B*58:01基因陽性率

表4 中國大陸各省市自治區(qū)HLA-B*58:01基因頻率

續(xù)表4 中國大陸各省市自治區(qū)HLA-B*58:01基因頻率

3 討 論

2005年，Hung等[6]在中國臺灣漢族人群中發(fā)現(xiàn)了別嘌呤醇引起的SJS/TEN與HLA-B*58:01基因之間的相關(guān)性，研究結(jié)果顯示別嘌呤醇引起的SJS/TEN患者100%攜帶HLA-B*58:01基因；類似的結(jié)果在后續(xù)研究中被陸續(xù)證實[7-9]。中國大陸人群與臺灣地區(qū)人群，在遺傳學(xué)有極相似的一致性(本課題組另有研究課題)，因此，應(yīng)重視大陸人群HLA-B*58:01基因陽性與高尿酸血癥治療的關(guān)系。目前中國有痛風(fēng)患者1 200萬人，尿酸過高者更是高達(dá)1.2億，2006年方衛(wèi)綱等[10]調(diào)查北京市男性患病率達(dá)到13.8%，女性患病率達(dá)到6.0%。郭偉民等[11]研究了2009～2010年太原市社區(qū)人群的健康狀況，其中，男性高尿酸血癥患病率達(dá)到19.0%，女性高尿酸血癥患病率達(dá)到4.2%。馬文峰等[12]對廣州某醫(yī)院2010～2011年的8 302例體檢人群調(diào)查發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥患病率達(dá)到35.68%，其中男性為46.83%，女性為17.59%。臨床上高尿酸血癥的常會引發(fā)尿酸結(jié)石、關(guān)節(jié)炎癥，及導(dǎo)致腎臟等重要器官受損，乃至痛風(fēng)的發(fā)生。別嘌呤醇作為臨床中治療高尿酸血癥、痛風(fēng)的主要治療藥物，對HLA-B*58:01基因篩查有重要的臨床意義。

通過Allele*Frequencies網(wǎng)站(網(wǎng)址http://www.allelefrequencies.net)檢索世界范圍內(nèi)的HLA-B*58:01基因頻率，除中國大陸地區(qū)外，印度Pawra人群(15.00%)、馬來西亞華人(12.11%)、新加坡華人(10.40%)中HLA-B*58:01基因頻率均較高[13]。中國幅員遼闊，本研究對研究對象按籍貫進(jìn)行分類，發(fā)現(xiàn)HLA-B*58:01基因分布有明顯的地域性，在中國大陸人群中，HLA-B*58:01基因陽性率在中國南方人群中較其他地區(qū)高，華南地區(qū)各省市自治區(qū)的陽性率最高，其中福建、廣西、海南、廣東、浙江5個東南沿海省市自治區(qū)的陽性率均超過18%，基因頻率均超過9%，在中國南方人群中，為了避免嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)發(fā)生，在對患有高尿酸血癥、痛風(fēng)這一類代謝疾病的患者進(jìn)行別嘌呤醇用藥前，進(jìn)行HLA-B*58:01基因篩查尤為重要。在使用別嘌呤醇前開展HLA-B*58:01基因篩查的迫切性明顯高于西南內(nèi)陸地區(qū)及北方地區(qū)。在中國大陸人群中，HLA-B*58:01基因與嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)之間的不良反應(yīng)程度、比率及分子機(jī)制更是值得進(jìn)一步深究。有針對性地對不同地區(qū)高尿酸血癥人群進(jìn)行HLA-B*58:01基因篩查在衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)上也有重大意義。

本研究中進(jìn)行基因分型均采用SSO HD法或SBT法，這兩種方法作為常規(guī)的HLA基因分型方法，精度高，通量大，尤其SBT法更是目前基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，保證了本研究的準(zhǔn)確性。然而，這兩種方法均成本較高，操作較繁瑣，對研究人員要求較高，若要大量開展臨床基因篩查，有必要針對HLA-B*58:01基因開發(fā)新的臨床簡單、可用的聚合酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒，以降低檢測成本，縮短檢測時間。

(志謝：本研究所用數(shù)據(jù)均來自于中華骨髓庫“從白細(xì)胞抗原的遺傳免疫學(xué)探討中國人群肥胖和高血壓的發(fā)生機(jī)制”課題，受到中華骨髓庫管理中心的大力支持和資助，該研究凝聚了中華骨髓庫全國31家HLA定點組織配型實驗室，6家高分辨確認(rèn)實驗室和1家質(zhì)量控制實驗室全體工作人員的大量心血，在此一并志謝。)

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Population distribution of gene HLA-B*58:01 for hyperuricemia patients in China*

MAXiao1,ZHANGZhixin2，CAIJianping3，PANQinqin1，F(xiàn)ANSu1，WANGXiaoyan1，MAOWei4，WANGZhenlei5，CHENQiang6，LIJianping7，ZHANGDemei8，YUWeijian9，ZHAOXing1，DUDan10，LIUQi10，HANYin10，SHENJie1,11△

(1.TheCenterofHLAandTransplantImmunology,theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu210029,China;2.BeijingRedCrossBloodCenter,Beijing100088,China;3.QualityControlLaboratory,ChinaBoneMarrowProgram,Beijing100730,China;4.ChongqingBloodCenter,Chongqing400015,China;5.HebeiBloodCenter,Shijiangzhuang,Hebei050061,China;6.InstituteofBloodTransfusion,ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege,Chengdu,Sichuan610052,China;7.LiaoningBloodCenter,Shenyang,Liaoning110096,China;8.TaiyuanRedCrossBloodCenter,Taiyuan,Shanxi030024,China;9.DalianRedCrossBloodCenter,Dalian,Liaoning116001,China;10.DepartmentofHLATechnology,ChinaBoneMarrowProgram,Beijing100010,China;11.DepartmentofEndocrinologyandMetabolism,theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu210029,China)

Objective To comprehensively understand HLA-B*58:01 positive rate and gene frequency of various areas in mainland China,effectively guide the hyperuricemia patients clinical medication and clear the necessity of clinical genetic screening.Methods 891793 HLA high resolution typing results of mainland China people were get from CMDP(China Marrow Donor Program) data bank,classified into 31 provinces and regions,clarify the positive rate and gene frequency of HLA-B*58:01.Results HLA-B*58:01 positive rate of south China provinces is higher than other regions,according to the region classification,positive rate of southern China is highest,positive rate of southwest China and north China is lower; according to the province of classification,positive rate of Fujian(28.43%),Guangxi(20.75%),Hainan(20.20%),Guangdong (19.66%) and Zhejiang(18.38%) are higher,positive rate of Tianjin(3.52%),Inner Mongolia(3.49%),Tibet(3.27%),Hebei(3.11%) and Shanxi(3.08%) are lower.Conclusion The hyperuricemia patients with HLA-B*58:01 should be paid attention.In order to avoid serious skin reactions after using allopurinol,the patients should be gene screened for HLA-B*58:01,especially in southern China.

hyperuricemia; allopurinol; HLA-B*58:01; China Marrow Donor Program

江蘇省衛(wèi)生和計劃生育委員會科技項目(Z201401)。

馬驍，男，研究實習(xí)員，主要從事人類白細(xì)胞抗原分型與相關(guān)疾病方向的研究。△

，E-mail:23697996@qq.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.005

A

1673-4130(2016)24-3395-05

2016-06-28

2016-10-18)