黃可++廖品琥++謝克恭++盧賢哲++陸潞++王俊利++韋葉生++唐毓金

【摘要】目的研究血清IL8及IL18水平在骨肉瘤患者與健康體檢者之間的差異及臨床意義。

方法采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)160例骨肉瘤患者及250例健康體檢者的外周血血清IL8及IL18水平，比較兩組間IL8、IL18水平的差異及它們之間的相關(guān)性，探討血清IL8及IL18水平與骨肉瘤發(fā)病及進(jìn)展的關(guān)系。

結(jié)果骨肉瘤患者組血清IL8水平較健康對(duì)照組升高（P<0.01 ），血清IL18水平較健康對(duì)照組降低（P<0.01）。在骨肉瘤患者組中，未發(fā)生遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移的患者其血清IL8水平低于已發(fā)生轉(zhuǎn)移患者（P<0.05），未發(fā)生遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移的患者其血清IL18水平高于已發(fā)生轉(zhuǎn)移患者（P<0.05）。AJCC分期中Ⅰ～Ⅱ期的低度惡性腫瘤相對(duì)于Ⅲ期同一骨斷不連續(xù)的腫瘤、Ⅳ期伴有血源性肺轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL8水平均較低（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL8水平略高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Ⅰ～Ⅱ期患者較Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL18水平均較高（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL18水平較高（P<0.05）。

結(jié)論血清IL8水平升高、IL18水平下降可能與骨肉瘤發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)，其作用可能表現(xiàn)為促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增生和轉(zhuǎn)移，兩者有可能成為判斷骨肉瘤的進(jìn)展和預(yù)后的指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】骨肉瘤；白細(xì)胞介素8；白細(xì)胞介素18

骨肉瘤（osteosarcoma）是最常見(jiàn)的惡性骨腫瘤，好發(fā)于青少年，多發(fā)于骨干骺端，其早期即可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。白細(xì)胞介素是一種由白細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)分化的細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答、損傷修復(fù)中起重要作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)各種白細(xì)胞介素在直腸癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，并與腫瘤的血管生成、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等惡性行為密切相關(guān)[1～4]。而不同家族白細(xì)胞介素對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移作用也不相同，甚至相反。白介素8（interleukin8，IL8）可促進(jìn)腫瘤血管新生和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移，通過(guò) JNK/SAPK 信號(hào)通路調(diào)控MMP2 蛋白的表達(dá)，促進(jìn)肺腺癌A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[5]。IL18可通過(guò)誘導(dǎo)T、NK等細(xì)胞產(chǎn)生干擾素γ（IFNγ），增強(qiáng)NK細(xì)胞和CTL的活性，促進(jìn)T細(xì)胞增殖，以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫監(jiān)視功能[6～7]，殺傷腫瘤細(xì)胞。本研究通過(guò)檢測(cè)骨肉瘤患者血清IL8、IL18水平，探討其與骨肉瘤的關(guān)系。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選取2005年～2013年右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的骨肉瘤患者160例作為病例組，并最終有明確病理診斷確診為骨肉瘤的患者。男105例，女55例，年齡（27.88±8.26）歲。所有患者均排除家族腫瘤病史及自身免疫性疾病病史，且入院前未經(jīng)抗腫瘤治療，未服用皮質(zhì)類固醇激素、阿霉素以及有可能影響機(jī)體免疫功能的非甾體類抗炎藥物。隨機(jī)選取同時(shí)期到我院進(jìn)行健康體檢的250名體檢健康者作為對(duì)照組，排除了家族性腫瘤病史、遺傳史或其他嚴(yán)重疾病史。男155例，女95例，年齡（27.53±7.35）歲。本研究經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2主要試劑儀器

血清IL8及IL18試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)雷杜公司）。

1.3血清IL8及IL18檢測(cè)

采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定 （ELISA）分別檢測(cè)血清IL8及IL18含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，三組均數(shù)的比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用q檢驗(yàn)（NewmanKeuls法），檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2結(jié)果

2.1病例組與健康對(duì)照組IL8及IL18水平的比較

骨肉瘤組血清IL8水平較健康對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01 ）。骨肉瘤組患者血清IL18水平較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.2病例組是否發(fā)生轉(zhuǎn)移患者的IL8及IL18水平比較

在骨肉瘤組患者中，未發(fā)生遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移的患者其血清IL8水平低于已發(fā)生轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；未發(fā)生遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移的患者其血清IL18水平高于已發(fā)生轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3病例組患者骨腫瘤AJCC分期的IL8及IL18水平比較

AJCC分期中Ⅰ～Ⅱ期的低度惡性腫瘤相對(duì)于Ⅲ期同一骨斷不連續(xù)的腫瘤、Ⅳ期伴有血源性肺轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL8水平均較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL8水平略高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Ⅰ～Ⅱ期患者較Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL18水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），Ⅲ期較Ⅳ期伴有血源性肺轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL18水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3討論

骨肉瘤多發(fā)生于青少年，惡性程度相對(duì)較高，嚴(yán)重危害青少年的身體健康。 隨著抗腫瘤藥物的應(yīng)用，目前骨肉瘤患者術(shù)后5年生存率已明顯提高。但由于腫瘤細(xì)胞的迅速發(fā)展及耐藥性的產(chǎn)生，骨肉瘤治療失敗病例數(shù)逐年增加。為此，進(jìn)一步探討骨肉瘤發(fā)生的分子機(jī)制勢(shì)在必行。早期探討與骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因可能包括：Bcl2家族、Fas/FasL家族、Caspases家族以及P53家族等[4]。近年來(lái)，白細(xì)胞介素家族在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用越來(lái)越受學(xué)者們的關(guān)注。本研究發(fā)現(xiàn)，IL8、IL18在骨肉瘤患者血清水平中呈相反的發(fā)展趨勢(shì)，說(shuō)明兩者對(duì)骨肉瘤的作用可能表現(xiàn)為相互抑制或拮抗可能，作用相反。

IL8是一種多功能的趨化因子， 能夠促進(jìn)炎癥反應(yīng)的進(jìn)程，對(duì)中性粒細(xì)胞有誘導(dǎo)趨化作用[6]。其在介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增生，促進(jìn)細(xì)胞分裂及腫瘤新生血管的形成，并在腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用[9～12]。本研究發(fā)現(xiàn)骨肉瘤患者血清 IL8水平較健康對(duì)照組患者顯著升高，且對(duì)于已經(jīng)發(fā)生血源性轉(zhuǎn)移的患者其血清IL8水平明顯高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移患者；Ⅲ期多發(fā)性腫瘤、Ⅳ期伴有遠(yuǎn)行轉(zhuǎn)移腫瘤其血清IL8水平也顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者，說(shuō)明IL8與骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程密切相關(guān)，其作用可能表現(xiàn)為促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增生和轉(zhuǎn)移。劉濤等人[13]對(duì)30例骨肉瘤標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，28例為IL8陽(yáng)性（93.3%），其中強(qiáng)陽(yáng)性者25例（83.3%）；在負(fù)荷原位灶中表達(dá)量明顯增加。此也進(jìn)一步證實(shí)IL8可直接促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。

IL18屬于IL1配體家族，其結(jié)構(gòu)與IL1蛋白家族相似，它可誘導(dǎo)T、NK等細(xì)胞產(chǎn)生干擾素（IFN），通過(guò)增強(qiáng)Thl細(xì)胞產(chǎn)生Thl類細(xì)胞因子、促進(jìn)T細(xì)胞表面Fas配體的表達(dá)和增強(qiáng)Fas介導(dǎo)的細(xì)胞毒等作用，提高Thl免疫應(yīng)答，以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫監(jiān)視功能[6]，并在抗腫瘤血管生成中起重要作用[14～15]。IL18基因多態(tài)性可能與惡性腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系[16]。IL18表達(dá)下降可能與免疫細(xì)胞功能受損、免疫功能失調(diào)密切相關(guān)，從而增加腫瘤易感性。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在外周血中的IL18在健康對(duì)照組的水平明顯高于骨肉瘤組（P<0.05）。表明血清IL18的水平高低與機(jī)體抵抗腫瘤的能力變化方向是一致的。對(duì)于合并血源性肺轉(zhuǎn)移患者其血清IL18水平較未發(fā)生轉(zhuǎn)移患者低，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清IL18水平均較低度惡性的Ⅰ期患者低，說(shuō)明骨肉瘤的轉(zhuǎn)移可能與IL18表達(dá)下調(diào)或其抗腫瘤的分子信息傳導(dǎo)途徑異常有關(guān)。Naoko Yamada等通過(guò)對(duì)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移小鼠模型進(jìn)行化療和免疫治療發(fā)現(xiàn)，IL18可顯著抑制骨肉瘤發(fā)生肺部轉(zhuǎn)移，當(dāng)聯(lián)合異環(huán)磷酰胺時(shí)其對(duì)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的抑制作用更大[17]。查翔遠(yuǎn)等[18]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性抑制物IL18結(jié)合蛋白可能通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌血管形成。此二者均從另一個(gè)相反方向進(jìn)一步證明此觀點(diǎn)，因此可以認(rèn)為血清IL18的水平高低在一定程度上可能與骨肉瘤的預(yù)后有關(guān)，對(duì)判斷骨肉瘤的預(yù)后可能有幫助。

綜上所述，IL8、IL18表達(dá)水平的檢測(cè)可能為骨肉瘤預(yù)防、診斷以及預(yù)后的判斷提供重要依據(jù)。但由于IL8、IL18在骨肉瘤患者血清表達(dá)恰恰相反，兩者對(duì)骨肉瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的過(guò)程中起相反作用，甚至存在相互拮抗可能，其可能相互機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

[1]Wang JL，Nong LG，Wei YS，et al.Association of interleukin8 gene polymorphisms with the risk of hepatocellular carcinoma[J].Mol Biol Rep，2014，41（3）：14831489.

[2]Wang J，He W，Liu J，et al.Association of IL6 polymorphisms with gastric cancer risk：evidences from a metaanalysis[J].Cytokine，2012，59（1）：176183.

[3]Huang ZQ，Wang JL，Pan GG，et al.Association of single nucleotide polymorphisms in IL12 and IL27 genes with colorectal cancer risk[J].Clin Biochem，2012，45（12）：5459.

[4]陳楷，呂書軍，付東，等.骨肉瘤凋亡與耐藥相關(guān)機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)骨與關(guān)節(jié)雜志，2015，4（1）：4549.

[5]楊同寧.IL8對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞遷移的影響及其機(jī)制探討[D].重慶：重慶醫(yī)科大學(xué)，2011.

[6]甘家華，祝育德.血清IL6、IL18及IFNγ檢測(cè)與宮頸癌的相關(guān)性研究[D].廣州：暨南大學(xué)，2010.

[7]Zhang B，Wu KF，Cao ZY，et al.IL18 increases invasiveness of HL60 myeloid leukemia cells：upregulation of matrix metalloproteinases9 （MMP9） expression[J].Leuk Res，2004，28（1）：9195.

[8]Zhang WJ，Gong YF，Xu GM et al.Relationship between serum interleukin8 and ulcerative colitis[J].Chin J Gastroenterol，2002，7（5）：277279.

[9]Ma Q，Zhou Y，Qiu XC.Research progress on selfseeding of circulating tumor cells[J].Modern Oncology，2011，19（6）：12351238.

[10]Huh SJ，Liang S，Sharma A，et al.Transiently entrapped circulating tumor cells interact with neutrophils to facilitate lung metastasis development[J].Cancer Res，2010，70（14）：60716082.

[11]Epanchintsev A，Shyamsunder P，Verma RS，et al.IL6，IL8，MMP2，MMP9 are overexpressed in Fanconi anemia cells through a NFκB/TNFα dependent mechanism[J].Mol Carcinog，2015，54（12）：16861699.

[12]Chuang TD，Khorram O.miR200c regulates IL8 expression by targeting IKBKB：a potential mediator of inflammation in leiomyoma pathogenesis[J].PLoS One，2014，9（4）：e95370.

[13]劉濤，馬瓊，張迎龍，等.IL8在循環(huán)腫瘤細(xì)胞自我種植促進(jìn)人骨肉瘤進(jìn)展中的作用機(jī)制[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2015，23（16）：22432246.

[14]Dinarello CA，Novick D，Kim S，et al.Interleukin18 and IL18 binding protein[J].Front Immunol，2013（4）：289.

[15]Palma G，Barbieri A，Bimonte S，et al.Interleukin 18：friend or foe in cancer[J].Biochim Biophys Acta，2013，1836（2）：296303.

[16]Wei YS，Lan Y，Liu YG，et al.Interleukin18 gene promoter polymorphisms and the risk of esophageal squamous cell carcinoma[J].Acta Oncol，2007，46（8）：10901096.

[17]Yamada N，Hata M，Ohyama H，et al.Immunotherapy with interleukin18 in combination with preoperative chemotherapy with ifosfamide effectively inhibits postoperative progression of pulmonary metastases in a mouse osteosarcoma model[J].Tumour Biol，2009，30（4）：176184.

[18]查翔遠(yuǎn)，翟群遠(yuǎn)，吳建成，等. 肝細(xì)胞癌組織中 IL18BPc 和 VEGF 的表達(dá)及與腫瘤血管形成的關(guān)系[J].安徽醫(yī)藥，2016，20（1）：8285.

（收稿日期：2016-05-18修回日期：2016-08-18）

（編輯：梁明佩）