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        核酸檢測(cè)法對(duì)血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒的檢測(cè)價(jià)值分析①

        2017-01-05 01:49:35王志宏
        河北醫(yī)學(xué) 2016年12期
        關(guān)鍵詞:檢測(cè)方法

        王志宏,李 輝

        (陜西省漢中市中心血站檢驗(yàn)科,陜西 漢中 723000)

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        核酸檢測(cè)法對(duì)血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒的檢測(cè)價(jià)值分析①

        王志宏,李 輝

        (陜西省漢中市中心血站檢驗(yàn)科,陜西 漢中 723000)

        目的:研究分析核酸檢測(cè)法對(duì)血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒(HBV)的檢測(cè)價(jià)值。方法:采集中心血站無(wú)償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本16214份,同時(shí)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和核酸檢測(cè)法,以篩查HBV感染情況,并分析兩組檢測(cè)方法的診斷價(jià)值。結(jié)果:ELISA、核酸檢測(cè)HBV的一致性較好,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。核酸檢測(cè)法的特異性、敏感度明顯高于ELISA檢測(cè)法,而漏診率及窗口期明顯低于ELISA檢測(cè);A組的HBV-DNA陽(yáng)性率、含量均高于B組、C組。上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:核酸檢測(cè)法具有高度的特異性和靈敏度,與ELISA檢測(cè)具有一定的互補(bǔ)性,可有效地減少漏診率,縮短窗口期,且HBV-DNA的含量能反映HBV的傳染性,對(duì)輸血安全具有重要作用。

        核酸檢測(cè); 乙肝病毒; 檢測(cè)價(jià)值

        本文通過(guò)在ELISA檢測(cè)HBsAg的基礎(chǔ)上,同時(shí)應(yīng)用核酸檢測(cè)對(duì)獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 篩查對(duì)象:采集2015年8月至2015年12月我院血液中心無(wú)償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本16214份。所有獻(xiàn)血者均經(jīng)金標(biāo)試紙法檢測(cè)HBsAg和干化學(xué)法檢測(cè)ALT結(jié)果合格。血液采集后同時(shí)留取兩樣管標(biāo)本,一管用于ELISA檢測(cè):使用分離膠促凝真空管(5mL/管)采集;另一管用于核酸檢測(cè):使用帶分離膠EDTA-K2抗凝真空管(5mL/管)采集。所得樣本應(yīng)準(zhǔn)確記錄具體的采集日期以及樣品編碼等信息。并在4h內(nèi)經(jīng)離心后凍存在4℃冰箱,48h內(nèi)檢測(cè)結(jié)果。若不能完成的標(biāo)本則提取血漿置于-20℃環(huán)境下保存。

        1.2 儀器與試劑:ELISA檢測(cè)采用FAME24/20型全自動(dòng)酶免分析儀(瑞士哈密頓公司);核酸檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)(美國(guó)羅氏公司);低溫離心機(jī)(德國(guó)Thermo)。HBV常規(guī)血清學(xué)篩查試劑盒(廈門(mén)英科新創(chuàng))以及配套檢測(cè)試劑。

        1.3 檢測(cè)方法:所有血液標(biāo)本均參照國(guó)家《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[1]進(jìn)行衛(wèi)生部的初檢和復(fù)檢。每份標(biāo)本均采用ELISA試劑進(jìn)行HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)以及PCR系統(tǒng)進(jìn)行乙肝病毒基因(HBV-DNA)檢測(cè)。以lg(HBV-DNA)>2.7記為陽(yáng)性,其中HBV血清學(xué)標(biāo)志物包含HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb。

        1.3 觀察指標(biāo):觀察HBsAg的陽(yáng)性3種HBV感染狀態(tài),包括大三陽(yáng)(HBsAg+/HBeAg+/HBcAb+)、小三陽(yáng)(HBsAg+/HBeAb+/HBcAb+)和急性感染或感染慢性期(HBsAg+/HBcAb+)。

        2 結(jié) 果

        2.1 兩組方法診斷陽(yáng)性率對(duì)比:兩種方法檢測(cè)法的陽(yáng)性率比較,一致性較好,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kappa值=0.647,P=0.053)。見(jiàn)表1。

        表1 兩組方法診斷陽(yáng)性率對(duì)比(n)

        2.2 兩組方法特異性、敏感度對(duì)比:核酸檢測(cè)法的特異性、敏感度高于ELISA檢測(cè)法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

        表2 兩組方法特異性以及敏感度對(duì)比n(%)

        2.3 兩組方法漏診率、窗口期對(duì)比:核酸檢測(cè)法的漏診率、窗口期低于ELISA檢測(cè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 兩組方法漏診率、窗口期對(duì)比

        2.4 HBV感染與HBV-DNA陽(yáng)性率、含量分析:A組的HBV-DNA陽(yáng)性率、含量均高于B組、C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而B(niǎo)組、C組的HBV-DNA陽(yáng)性率、含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

        表4 HBV感染與HBV-DNA陽(yáng)性率、含量分析

        注:A組:大三陽(yáng),B組:小三陽(yáng),C組:急性感染或感染慢性期;A、B兩組比較,①P<0.05;A、C兩組比較,②P<0.05;B、C兩組比較,③P<0.05

        3 討 論

        乙肝病毒(HBV)是一種經(jīng)血液傳播的病毒性傳染病。在我國(guó)HBV呈高流行發(fā)展趨勢(shì),對(duì)獻(xiàn)血人群的血液進(jìn)行篩查是預(yù)防HBV傳播的重要途徑。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)作為檢測(cè)HBV最常用的方法,常以乙肝表面抗原(HBsAg)作為檢測(cè)指標(biāo),具有快速、便宜等優(yōu)勢(shì),在血液篩檢中占據(jù)著重要的地位。但是由于存在HBV感染的窗口期、隱匿性HBV等問(wèn)題,使得HBV漏檢的風(fēng)險(xiǎn)較大。核酸檢測(cè)法作為血清學(xué)診斷方法的一種補(bǔ)充,是一種新型的分子生物學(xué)診斷方法[2]。此方法是通過(guò)對(duì)乙肝病毒基因(HBV-DNA)含量的測(cè)定,進(jìn)而直接、有效地反映HBV的感染情況,其結(jié)果靈敏性較高,現(xiàn)已廣泛地應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液病毒感染的篩查。

        本文通過(guò)對(duì)中心血站無(wú)償獻(xiàn)血的血液標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測(cè)法以及核酸檢測(cè)法。結(jié)果發(fā)現(xiàn),核酸檢測(cè)HBV的陽(yáng)性率與ELISA檢測(cè)存在著一定的差異性。8份血液標(biāo)本ELISA檢測(cè)陽(yáng)性但在核酸檢測(cè)中呈陰性。筆者認(rèn)為,這可能是因?yàn)橐腋位颊咴谒幬镏委熯^(guò)程使得血液里殘留HBsAg,它并不具備病毒DNA,且傳染性及復(fù)制率均不高。而11份標(biāo)本ELISA檢測(cè)為陰性但在核酸檢測(cè)中呈陽(yáng)性。究其原因,這可能是因?yàn)樵贖BV感染早期病毒數(shù)量不多,ELISA檢測(cè)通過(guò)HBsAg指標(biāo)并不能被檢測(cè)到,而DNA在血清中也存在,因此核酸檢測(cè)陽(yáng)性。Chatterjee等研究表明[3],通過(guò)核酸檢測(cè)可將輸血傳播HBV的ELISA檢測(cè)窗口期縮短43%。與本文研究結(jié)果基本一致,核酸檢測(cè)的窗口期幾乎只需ELISA檢測(cè)時(shí)間的一半。此外,本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn),A組的HBV-DNA陽(yáng)性率、含量均明顯高于B組、C組(P<0.05)。這提示,HBV感染狀態(tài)與HBV-DNA陽(yáng)性率、含量相關(guān),大三陽(yáng)的陽(yáng)性率以及含量明顯較高。這可能是因?yàn)榧毙愿腥净蚋腥韭云诘腍BV并無(wú)傳染性,隨著HBV-DNA陽(yáng)性率、含量的增高,HBV血液標(biāo)本的傳染性越強(qiáng)。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了可以通過(guò)對(duì)HBV-DNA的定量測(cè)定來(lái)說(shuō)明HBV傳染性。

        [1] 蔡杰,許紀(jì)玲,陸玉婷,等.大容量樣本病毒濃縮HCV核酸檢測(cè)方案的研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,13(13):1070~1073.

        [2] Xiao X,Zhai J,Zeng J,et al.Comparative evaluation of a triplex nucleic acid test for detection of HBV DNA, HCV RNA, and HIV-1 RNA, with the Procleix Tigris System[J].Virol Methods,2013,187 (2): 357~361.

        [3] Chatterjee K,Agarwal N,Coshic P,et al.Sensitivity of individual and mini-pool nucleic acidtesting assessed by dilution of hepatitis B nucleic acid testing yield samples[J].Asian Transfus Sci, 2014,8 (1): 26~28.

        Value Analysis of Nucleic Acid detection Method for Detection of Hepatitis B Virus in Blood Samples

        WANGZhihong,LIHui

        (ClinicallaboratoryofHanzhoungBloodCenter,ShanxiHanzhong723000,China)

        Objective: To analyze the nucleic acid detection method for blood samples in the detection of hepatitis B virus (HBV). Methods: 16214 blood samples were collected in our hospital blood center blood donation, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nucleic acid detection method in screening of HBV infection situation, diagnosis and analysis of two group detection method. Results: The positive rate of nucleic acid detection ELISA, HBV were 0.21%, 0.23%, the difference was not statistically significant (P > 0.05), the coincidence rate of the two methods for detection of specific 99.77%. nucleic acid detection method, the sensitivity was significantly higher than that of ELISA detection, and the detection rate and the detection window period was significantly lower than that of ELISA the positive rate of HBV-DNA; A group, were significantly higher than in B group, C group. The differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion: The nucleic acid detection method has high specificity and sensitivity, complementarities and ELISA can effectively detect. To reduce the false negative rate, shorten the window period, and the content of HBV-DNA can reflect HBV infectivity, plays an important role in the safety of blood transfusion.

        Nucleic acid detection; Hepatitis B virus; Detection value

        ① 【基金項(xiàng)目】陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目,(編號(hào):2009k13-G6(7))

        1006-6233(2016)12-2097-03

        A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.12.068

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