童巧文，童 郁，張荷慧，鄭麗芬，楊曉凱，王耀光

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·論著·

血小板微顆粒水平與頸動脈粥樣硬化的關(guān)系研究

童巧文，童 郁，張荷慧，鄭麗芬，楊曉凱，王耀光

目的 探討血小板微顆粒(PMP)水平與頸動脈粥樣硬化的關(guān)系，評價PMP在頸動脈粥樣硬化形成中的作用。方法 選取2014年9月—2016年2月在溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的門診和住院患者187例，根據(jù)頸動脈超聲檢查結(jié)果分為頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)正常組(n=52)、IMT增厚組(n=70)和頸動脈硬化斑塊組(n=65)。采用流式細(xì)胞儀測定血清PMP水平，同時測定空腹血糖(FPG)、血清總膽固醇(TC)、血漿纖維蛋白原(FG)、血小板計數(shù)(PLT)等指標(biāo)；頸動脈粥樣硬化的影響因素分析采用多元Logistic逐步回歸分析。結(jié)果 3組性別、吸煙比例、PLT間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而年齡、收縮壓(SBP)、FPG、TC、FG、PMP間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。多元Logistic逐步回歸分析結(jié)果顯示，年齡〔OR=1.387，95%CI(1.195，1.610)〕、FPG〔OR=5.597，95%CI(1.695，18.469)〕、TC〔OR=10.241，95%CI(2.727，38.455)〕、PMP〔OR=14.918，95%CI(3.145，70.765)〕是頸動脈粥樣硬化的獨立危險因素(P<0.05)。結(jié)論 PMP是頸動脈粥樣硬化的獨立危險因素，在頸動脈粥樣硬化的病理過程中具有重要的作用。

頸動脈；動脈粥樣硬化；血小板微顆粒

童巧文，童郁，張荷慧，等.血小板微顆粒水平與頸動脈粥樣硬化的關(guān)系研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(31)：3822-3825.[www.chinagp.net]

TONG Q W,TONG Y,ZHANG H H,et al.Relationship between platelet microparticle level and carotid atherosclerosis[J].Chinese General Practice，2016，19(31)：3822-3825.

頸動脈粥樣硬化(carotid atherosclerosis)是導(dǎo)致缺血性腦卒中的重要病因和危險因素。因此近年來，頸動脈超聲檢查在缺血性腦卒中患者的預(yù)防和檢測中的價值越來越受到重視。血小板微顆粒(platelet microparticle，PMP)作為活化血小板的產(chǎn)物，繼承了血小板表面的多種抗體，參與了動脈粥樣硬化的過程[1-2]。很多研究表明：PMP、內(nèi)皮微顆粒等與心腦血管動脈硬化性疾病密切相關(guān)[3-4]。本研究通過PMP水平檢測與頸動脈超聲檢查，探討PMP對頸動脈粥樣硬化的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2014年9月—2016年2月在溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的門診和住院患者187 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡18～80歲；(2)來院前2周內(nèi)均未使用過阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達(dá)莫、華法林等影響血小板的藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)急性心肌梗死、急性腦卒中、感染、心房顫動和肝腎功能不全者；(2)伴有原發(fā)性或繼發(fā)性導(dǎo)致血小板數(shù)量或功能異常疾病者。其中男112例，女75例；年齡45～77歲，平均年齡(61.0±6.2)歲。根據(jù)頸動脈超聲檢查結(jié)果將所有患者分為頸動脈內(nèi)膜中層厚度(intimal-medial thickness，IMT)正常組(n=52)、IMT增厚組(n=70)和頸動脈硬化斑塊組(n=65)。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者或其家屬簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 頸動脈超聲檢查 采用美國GE公司LOGIQ E9型彩色多普勒超聲診斷儀(探頭9L-D，頻率8.4～9.0 MHz)，由專業(yè)超聲醫(yī)師負(fù)責(zé)檢查。延頸動脈走向，聲束方向垂直于血管的長軸，仔細(xì)測定頸總動脈起始部、頸總動脈分叉處以及頸內(nèi)、外動脈起始部的血管后壁，并在頸總動脈分叉近心端1～2 cm處測量IMT，每側(cè)均重復(fù)測量3次，以IMT平均值作為頸動脈粥樣硬化的評價指標(biāo)。頸動脈超聲檢查結(jié)果采用2009年中國血管超聲檢查指南定義：IMT<1.0 mm為正常，1.0 mm≤IMT<1.5 mm為增厚，IMT≥1.5 mm為動脈粥樣硬化斑塊形成[5]。

1.2.2 PMP測定 所有患者于清晨空腹抽取靜脈血，方法參照文獻(xiàn)[6]，取枸櫞酸鈉抗凝新鮮外周血標(biāo)本2 ml(輕扎止血帶，順利采血)，將血標(biāo)本按離心力80g室溫下離心10 min，制備富血小板血漿(PRP)。將5 μl CD61-percp和5 μl PRP分別加入流式管，混勻后室溫避光孵育15 min，以1 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)懸浮細(xì)胞，同時加入0.82 μm標(biāo)準(zhǔn)微球1 μl(1∶400稀釋)待測。通過后以MXP cytometer軟件獲取樣本并分析結(jié)果。流式細(xì)胞儀為Cytomics FC500MPL(美國BECKMAN公司)，CD61-percp(Cat NO.340560)為美國BD公司試劑，標(biāo)準(zhǔn)微球(0.82 μm)為美國Sigma公司產(chǎn)品(本研究采用0.82 μm標(biāo)準(zhǔn)微球進(jìn)行PMP定位對照)。

1.2.3 其他資料收集 記錄患者的性別、年齡，詢問吸煙情況，測量收縮壓(SBP)，檢測空腹血糖(FPG)、血清總膽固醇(TC)、血漿纖維蛋白原(FG)及血小板計數(shù)(PLT)。

2 結(jié)果

2.1 PMP水平檢測結(jié)果 流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測循環(huán)血PMP水平結(jié)果見圖1。

2.2 3組一般資料及實驗室檢查結(jié)果比較 3組性別、吸煙比例、PLT間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而年齡、SBP、FPG、TC、FG、PMP間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

表1 3組一般資料及實驗室檢查結(jié)果比較Table 1 Comparison of general data and laboratory test results among three groups

2.3 頸動脈粥樣硬化影響因素的多元Logistic逐步回歸分析 以是否頸動脈粥樣硬化(賦值：IMT正常組=0，IMT增厚組和頸動脈硬化斑塊組=1)為因變量，性別(賦值：女=1，男=2)、年齡實際值、SBP實際值、吸煙(賦值：不吸煙=1，吸煙=2)及FPG、TC、FG、PLT 、PMP實際值為自變量，進(jìn)行多元Logistic逐步回歸分析。結(jié)果顯示，年齡、FPG、TC、PMP是頸動脈粥樣硬化的獨立危險因素(P<0.05，見表2)。

注：A為血小板散點圖，B為經(jīng)0.82 μm標(biāo)準(zhǔn)微球比對的PMP水平；PMP=血小板微顆粒

圖1 流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測循環(huán)血PMP水平

Figure 1 Level of circulating blood PMP measured by flow cytometry

表2 頸動脈粥樣硬化影響因素的多元Logistic逐步回歸分析Table 2 Multiple Logistic stepwise regression analysis of influencing factors for carotid atherosclerosis

3 討論

當(dāng)今社會，隨著人們生活水平的提高和人口老齡化，腦卒中已經(jīng)成為導(dǎo)致人類死亡的第三大主要原因。而在頸動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上，不穩(wěn)定斑塊的突然脫落、血小板活化激活、動脈血栓形成是缺血性腦卒中重要的病理過程[7]。PMP是1967年由WOLF[8]首次發(fā)現(xiàn)描述,在一些刺激作用下活化或者凋亡的血小板細(xì)胞膜向外伸展以吐芽的方式進(jìn)入循環(huán)而形成的小微粒,直徑為0.1～1.0 μm，故也稱為“血小板塵?！?。血小板活化聚集、血栓形成以及血管內(nèi)皮損傷參與動脈硬化的發(fā)生發(fā)展過程，這些病理變化均可以導(dǎo)致PMP的生成；而隨后發(fā)生的缺血低氧反應(yīng)和炎性刺激，則進(jìn)一步促進(jìn)PMP的產(chǎn)生。PMP能夠參與多種生理功能，主要包括血栓形成，促進(jìn)內(nèi)皮修復(fù)、血管生成、細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和炎性反應(yīng)[9-11]，并影響許多疾病，包括惡性腫瘤的形成、血液系統(tǒng)疾病、動脈粥樣硬化性疾病如冠心病，缺血性卒中等。目前認(rèn)為PMP可能通過以下途徑促進(jìn)動脈粥樣硬化的形成：(1)損傷內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)PMP黏附到血管壁，PMP釋放的花生四烯酸激活細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)，介導(dǎo)白細(xì)胞募集遷移到血管壁，促進(jìn)動脈粥樣硬化形成；(2)PMP表面含有帶負(fù)電荷的磷脂酰絲氨酸(PS)，PS可促進(jìn)凝血酶原復(fù)合物形成，支持膜相關(guān)酶聯(lián)反應(yīng)，從而激活凝血因子，參與內(nèi)源性和外源性凝血途徑；(3)PMP可以減少一氧化氮合成和一氧化氮合酶的活性，此過程可以增強血管的炎性反應(yīng)和損害血管內(nèi)皮功能，導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)展；(4)PMP與低密度脂蛋白、磷脂、脂肪酸相關(guān)，而氧化后低密度脂蛋白可以對內(nèi)皮產(chǎn)生嚴(yán)重?fù)p傷，從而加速動脈硬化的進(jìn)展[12]。

本研究結(jié)果顯示，頸動脈硬化斑塊組PMP均高于IMT正常組和IMT增厚組，且IMT增厚組PMP高于IMT正常組，顯示PMP和頸動脈粥樣硬化程度有關(guān)，這與國外文獻(xiàn)報道一致[13-14]。頸動脈硬化斑塊組的PMP高于其他兩組，提示斑塊組有更高的血小板活化狀態(tài)，這可能與損傷的內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)PMP吸附到血管壁，PMP表面含有帶負(fù)電荷的PS，促進(jìn)凝血酶原復(fù)合物的聚集，進(jìn)一步激活血小板有關(guān)[15]。本研究多元Logistic逐步回歸分析結(jié)果顯示，PMP與其他已知動脈硬化因素如年齡、血糖、血脂等，均為頸動脈粥樣硬化的獨立危險因素，提示PMP水平升高與頸動脈粥樣硬化形成密切相關(guān)。臨床上進(jìn)行PMP水平檢測，為監(jiān)測頸動脈粥樣硬化程度和血小板活化狀態(tài)提供了一種有效的手段，有利于早期對缺血性腦卒中高危群體進(jìn)行預(yù)防干預(yù)。

綜上所述，PMP在頸動脈粥樣硬化形成的病理過程中具有重要的作用，在一定程度可以反映動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，對臨床有一定的實用性，可將其作為預(yù)防性治療動脈硬化和心腦血管疾病的生物標(biāo)志；并且在治療動脈粥樣硬化方面，需重視血小板活化的作用，將PMP作為一項治療心腦血管疾病的作用靶點。

作者貢獻(xiàn)：童巧文、王耀光進(jìn)行試驗設(shè)計與實施、撰寫論文、成文并對文章負(fù)責(zé)；童郁、張荷慧、鄭麗芬進(jìn)行試驗實施、評估、資料收集；楊曉凱、王耀光進(jìn)行質(zhì)量控制與審校。

本文無利益沖突。

[1]ZWICKER J I,TRENOR C C,FURIE B C,et al.Tissue factor-bearing microparticles and thrombus formation[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2011,31(4):728-733.

[2]HAYWARD C P.Platelet activation in the pathogenesis of obesity and vascular disease[J].Thromb Haemost,2011,106(4):567-568.

[3]BIASUCCI L M,PORTO I,DI V L,et al.Differences in microparticle release in patients with acute coronary syndrome and stable angina[J].Circ J,2012,76(9):2174-2182.

[4]LEE S T,CHU K,JUNG K H,et al.Circulating CD62E+ microparticles and cardiovascular outcomes[J].PLoS One,2012,7(4):e35713.DOI:10.1371/journal.pone.0035713.

[5]中國醫(yī)師協(xié)會超聲醫(yī)師分會.血管超聲檢查指南[J].中華超聲影像學(xué)雜志,2009,18(10):911-920.

[6]陳蓓蕾,李曉波,馬莉,等.急性腦梗死患者血小板微顆粒水平的研究[J].腦與神經(jīng)疾病雜志,2012,20(1):17-20. CHEN B L，LI X B,MA L,et al.Study of PMP levels in patients with acute cerebral infarctions [J].Journal of Brain and Nervous Diseases，2012,20(1):17-20.

[7]FISHER M,PAGANINI-HILL A,MARTIN A,et al.Carotid plaque pathology:thrombosis,ulceration,and stroke pathogenesis[J].Stroke,2005,36(2):253-257.

[8]WOLF P.The nature and significance of platelet products in human plasma[J].Br J Haematol,1967,13(3):269-288.

[9]BODE A P,ORTON S M,FRYE M J,et al.Vesiculation of platelets during in vitro aging[J].Blood,1991,77(4):887-895.

[10]BREEN K A,SANCHEZ K,KIRKMAN N,et al.Endothelial and platelet microparticles in patients with antiphospholipid antibodies[J].Thromb Res,2015,135(2):368-374.

[11]CHEN Y,XIAO Y,LIN Z,et al.The role of circulating platelets microparticles and platelet parameters in acute ischemic stroke patients[J].J Stroke Cerebrovasc Dis,2015,24(10):2313-2320.

[12]WANG Z T,WANG Z,HU Y W.Possible roles of platelet-derived microparticles in atherosclerosis[J].Atherosclerosis,2016,248:10-16.

[13]CSONGRADI E,NAGY B,FULOP T,et al.Increased levels of platelet activation markers are positively associated with carotid wall thickness and other atherosclerotic risk factors in obese patients[J].Thromb Haemost,2011,106(4):683-692.

[14]WOJTA J.Platelet-derived microparticles in patients with high cardiovascular risk and subclinical atherosclerosis[J].Thromb Haemost,2015,114(6):1099.

[15]LOSITO I,CONTE E,CATALDI T R,et al.The phospholipidomic signatures of human blood microparticles,platelets and platelet-derived microparticles:a comparative HILIC-ESI-MS investigation[J].Lipids,2015,50(1):71-84.

(本文編輯：崔沙沙)

Relationship between Platelet Microparticle Level and Carotid Atherosclerosis

TONGQiao-wen,TONGYu,ZHANGHe-hui,ZHENGLi-fen,YANGXiao-kai,WANGYao-guang.

DepartmentofNeurology,WenzhouPeople′sHospital,Wenzhou325000,China

WANGYao-guang,DepartmentofNeurology,WenzhouPeople′sHospital,Wenzhou325000,China;E-mail:wz4204@163.com

Objective To discuss the relationship between platelet microparticle(PMP) level and carotid atherosclerosis,and assess the role of PMP in the development of carotid atherosclerosis.Methods 187 outpatients and inpatient who received treatment in Department of Neurology of Wenzhou People′s Hospital from September 2014 to February 2016 were selected,according to results of carotid ultrasonography,they were divided into normal group of carotid intima-media thickness(IMT)(n=52),IMT thickening group(n=70) and carotid atherosclerotic plaque group(n=65).Serum PMP level was measured by flow cytometry,and in the meanwhile fasting blood-glucose(FPG),serum total cholesterol(TC),plasma fibrinogen(FG),platelet count(PLT) and other indicators were also measured;multiple Logistic stepwise regression analysis was used to analyze the influencing factors of carotid atherosclerosis.Results There was no significant difference in sex,smoking rate and PLT among the three groups(P>0.05),but there was significant difference in age,SBP,FPG,TC,FG and PMP(P<0.05).Multiple Logistic stepwise regression analysis showed that age 〔OR=1.387,95%CI(1.195,1.610)〕,FPG 〔OR=5.597,95%CI(1.695,18.469)〕,TC 〔OR=10.241,95%CI(2.727,38.455)〕,PMP 〔OR=14.918,95%CI(3.145,70.765)〕 were the independent risk factors of carotid atherosclerosis(P<0.05).Conclusion PMP is the independent risk factor of carotid atherosclerosis,and it plays an important role in the pathological process of carotid atherosclerosis.

Carotid arteries;Atherosclerosis;Platelet microparticle

溫州市科技計劃項目(Y20140274)

325000浙江省溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(童巧文，張荷慧，鄭麗芬，楊曉凱，王耀光)，檢驗科(童郁)

王耀光，325000浙江省溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科；E-mail：wz4204@163.com

R 543.5

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.31.013

2016-04-28；

2016-09-19)