摘要：為了探討棉酚對(duì)小白鼠生殖功能的影響，本試驗(yàn)將30只健康小白鼠（雌、雄各半），隨機(jī)分為3組，每組10只（雌雄各半），對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)餌料，試驗(yàn)1組飼喂添加1.0%的棉酚的基礎(chǔ)餌料，試驗(yàn)2組飼喂添加0.5%溴敵隆的基礎(chǔ)餌料，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算適口性，睪丸、卵巢臟器系數(shù)，制作睪丸、卵巢組織學(xué)切片，統(tǒng)計(jì)合籠后的產(chǎn)仔情況。結(jié)果表明，在適口性方面，添加1.0%棉酚的混合餌料比添加0.5%溴敵隆的混合餌料要好；試驗(yàn)1組，小鼠的生精小管的管壁厚度比對(duì)照組?。≒<0.01），管腔直徑大。試驗(yàn)2組小鼠的生精小管管壁管，管腔直徑與對(duì)照組相比顯著變?。≒<0.05）。配對(duì)以后試驗(yàn)1組小鼠的幼仔個(gè)數(shù)少于對(duì)照組。結(jié)果表明，棉酚對(duì)小鼠精巢有影響，影響生精小管管壁直徑，精子數(shù)量，并且降低了雌鼠所懷幼仔個(gè)數(shù)。說(shuō)明棉酚能起到降低了雄性小鼠的生育能力的作用。

關(guān)鍵詞：棉酚；適口性；臟器系數(shù)；精巢

中圖分類(lèi)號(hào)：TQ645.9+7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）13-3402-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.13.034

植物不育劑是由具有抗生育作用的天然植物中的提取物配制而成，用不育劑配制的混合餌料，對(duì)雌雄鼠生殖機(jī)能均有一定的破壞性，起到了阻斷生殖的作用，又不污染環(huán)境和破壞生態(tài)平衡。所以近年來(lái)選用植物不育劑制作環(huán)保型鼠藥越來(lái)越受到人們的重視。棉酚是棉子、棉殼、棉子餅及棉粕中含有的一種有毒物質(zhì)，它是萘的衍生物。在動(dòng)物的餌料中加入少量的棉酚，并不會(huì)引發(fā)中毒，但加入大量棉酚，在豬、牛和羊中有中毒的記載[1]。游離棉酚的中毒量與餌料中蛋白質(zhì)水平、亞鐵離子水平及鈣離子水平有關(guān)[1]。棉酚對(duì)雄性大鼠有抗生育作用，但對(duì)大鼠的交配行為及副性腺的功能均無(wú)明顯的影響，亦不改變大鼠及猴血漿中睪酮的含量[2]。但影響抗生育的機(jī)理有待于研究。

本試驗(yàn)以小白鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物，并且喂以配有棉酚的自制餌料飼喂小白鼠，記錄攝食量，體重，計(jì)算適口性，臟器系數(shù)，用組織學(xué)方法研究精巢和卵巢組織結(jié)構(gòu)的變化，觀察小鼠懷幼崽個(gè)數(shù)。試驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^(guò)棉酚研究出植物源的無(wú)公害的滅鼠餌料，達(dá)到對(duì)田間、林地害鼠種群的調(diào)控。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

30只昆明小白鼠源于西安醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，體重為14～20 g。隨機(jī)分為3組，每組10只，雌、雄各半，分開(kāi)放置于小鼠鼠籠。

1.2 配制混合餌料

基礎(chǔ)餌料的配制：玉米35%；麩皮22%；豆渣24%；鹽1%；骨粉1%；面粉17%?；D為對(duì)照組餌料。試驗(yàn)1組在基餌中添加1.0%的棉酚（購(gòu)自西安慈緣生化科技有限公司）；試驗(yàn)2組在基餌中添加0.5%溴敵?。ㄙ?gòu)自陜西先農(nóng)生物科技有限公司）。各組餌料固定為餅狀烘干待用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 加藥飼養(yǎng) 每天每只飼喂基餌或混合餌料10 g，自由飲水。一周換一次墊料，換墊料時(shí)稱(chēng)量所剩餌料的重量，試驗(yàn)期共30 d，計(jì)算不同餌料對(duì)小白鼠日攝食量的影響，日攝食量（g）=（10×30-剩余餌料）÷30。

1.3.2 第一部分

1.3.2.1 臟器系數(shù) 30 d后，從3組中每組雌雄各選2只，共12只，稱(chēng)重，20%烏來(lái)糖腹腔麻醉，經(jīng)左心室輸入0.1 mol/L生理鹽水磷酸緩沖液100～150 mL（pH 7.4），剪破右心房以使血液流出，再輸入4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸緩沖液300 mL（pH 7.4），立即取雙側(cè)睪丸和卵巢，測(cè)臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=雙側(cè)睪丸或卵巢（g）/體重（g）。

1.3.2.2 組織學(xué)切片 另一側(cè)睪丸和卵巢置于Bouin’s液中固定，做冰凍切片。切片厚度8 μm，H.E染色，在顯微鏡下觀察并測(cè)量雄性各組同一橫截面生精小管管徑、生殖上皮厚度。觀察并測(cè)量卵巢中黃體的面積。

1.3.3 第二部分 30 d后，將剩余的小鼠合籠并重新分為3組（每組雌、雄鼠各3只），對(duì)照組：飼喂基餌；試驗(yàn)1組：飼喂1.0%棉酚混合餌料；試驗(yàn)2組：飼喂0.5%的溴敵隆。合籠后均以正常餌料喂養(yǎng)，觀察雌性個(gè)體的產(chǎn)仔潛伏期和產(chǎn)仔數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS10.0軟件系統(tǒng)對(duì)日進(jìn)食量、臟器系數(shù)、生精小管管徑、生殖上皮厚度、黃體的大小、產(chǎn)仔潛伏期和產(chǎn)仔數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（x±sd）來(lái)表示，根據(jù)Non-parametric test，產(chǎn)仔潛伏期和產(chǎn)仔數(shù)量為非正態(tài)分布，因而用Mann-Whitney U test，其他為正態(tài)分布，用Independent-Samples T test，P<0.05時(shí)表示兩組數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 適口性分析

由表1可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1組雌、雄小白鼠日攝食量差異不顯著（P>0.05），而試驗(yàn)2組的日攝食量均極顯著小于對(duì)照組（P<0.01）。在一定程度上攝食量與適口性是呈正相關(guān)的，所以可得知添加1.0%棉酚的混合餌料的適口性比添加0.5%溴敵隆的混合餌料要好。

2.2 小鼠臟器指數(shù)

由表2可知，試驗(yàn)1組的睪丸臟器系數(shù)與對(duì)照組之間差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)2組的睪丸臟器系數(shù)極顯著小于對(duì)照組（P<0.01）。由表3可知，雌性試驗(yàn)1組卵巢臟器系數(shù)與對(duì)照組之間差異不顯著（P>0.05）。雌性試驗(yàn)2組卵巢臟器系數(shù)極顯著小于對(duì)照組（P<0.01）。

2.3 混合餌料對(duì)睪丸、卵巢結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可知，光鏡下觀察到對(duì)照組生精小管管壁完整，管壁較厚。間質(zhì)中可見(jiàn)單個(gè)或成群地間質(zhì)細(xì)胞。試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組生殖上皮厚度較薄，睪丸間質(zhì)增大，間質(zhì)細(xì)胞較為少見(jiàn)。試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組小鼠的生精小管管腔直徑比對(duì)照組極顯著性增大。試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組小鼠的管壁厚度與對(duì)照組相比極顯著或顯著變薄。對(duì)照組雌性小鼠和試驗(yàn)組卵巢中發(fā)育成熟的卵泡均較多，但試驗(yàn)2組黃體萎縮，結(jié)構(gòu)模糊。試驗(yàn)1組雌性小鼠和對(duì)照組無(wú)顯著性差異，試驗(yàn)2組雌性小鼠黃體最大橫截面積極顯著低于對(duì)照組。

2.4 產(chǎn)仔情況

由表4可知，試驗(yàn)1組的產(chǎn)仔數(shù)明顯比對(duì)照組少（P=0.01）。試驗(yàn)2組配對(duì)后死亡，所以無(wú)產(chǎn)仔數(shù)。

3 討論

用含棉酚的混合餌料飼養(yǎng)的小鼠日攝食量與對(duì)照組之間沒(méi)有明顯差異，表明混合餌料并不影響到小鼠的進(jìn)食量，有較好的適口性。而食用溴敵隆混合餌料的小鼠日進(jìn)食量比對(duì)照組明顯減小，表明溴敵隆混合餌料適口性差。食用混合餌料的雄性睪丸臟器系數(shù)和雌性卵巢臟器系數(shù)明顯比對(duì)照組小，說(shuō)明棉酚作用在動(dòng)物體上一段時(shí)間后睪丸和卵巢的相對(duì)質(zhì)量減小了，但質(zhì)量的減少不僅與藥物有關(guān)，可能與適口性也有關(guān)。

有研究認(rèn)為棉酚對(duì)睪丸曲細(xì)精管生精上皮的損傷，以晚期精子細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞最為明顯。如精母細(xì)胞核固縮，精子細(xì)胞核空泡化，形成多核巨細(xì)胞，胞漿呈嗜酸性。然而，即使在曲精細(xì)管生精上皮受到嚴(yán)重?fù)p傷，只剩下1～2層細(xì)胞的情況下，仍能見(jiàn)到精原細(xì)胞和支持細(xì)胞，由此可見(jiàn)，晚期精子細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞對(duì)棉酚較為敏感，而精原細(xì)胞和支持細(xì)胞對(duì)棉酚則表現(xiàn)一定的耐受性。棉酚對(duì)大鼠睪丸生精上皮的損傷具有長(zhǎng)效作用[2]。本試驗(yàn)通過(guò)制作小鼠精巢組織學(xué)切片，觀察到棉酚試驗(yàn)組管壁厚度均變薄，管腔直徑變大，合籠后產(chǎn)仔量減少，可能長(zhǎng)期服用棉酚減少精子數(shù)量，從而降低生育能力。

本試驗(yàn)還觀察到棉酚試驗(yàn)組雌性卵巢的組織學(xué)切片發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組雌性個(gè)體卵巢內(nèi)黃體面積與對(duì)照組相似，未出現(xiàn)萎縮，而食用溴敵隆組雌性黃體極度萎縮，還未合籠就已死亡，說(shuō)明毒性極大。有研究認(rèn)為黃體能夠分泌雌激素和孕激素，這兩種激素對(duì)于子宮內(nèi)膜的周期性變化及受精卵著床、胎兒發(fā)育極為重要[3]?？梢?jiàn)，棉酚可能只是影響雄性精巢的發(fā)育，而對(duì)雌性影響不大，這與其他學(xué)者研究結(jié)果一致[4]。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 張寅恭.棉酚抗生育作用的研究II.雄性大鼠的抗生育作用[J].上海中醫(yī)學(xué)，1980（6）：43.

[3] 何鳳琴.雷公藤和莪術(shù)混合餌料對(duì)棕色田鼠生殖作用的影響[J].中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2013，24（1）：34-38.

[4] 雷海鵬.醋酸棉酚對(duì)雄性大鼠的抗生育作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志， 1979，59（7）：402.