程迪迪 劉彩紅

(泰山醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

?

HPLC法測(cè)定半枝蓮中木犀草素和芹菜素的含量*

程迪迪 劉彩紅

(泰山醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

目的 建立RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定半枝蓮中木犀草素和芹菜素的含量。方法 采用Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-2%醋酸水溶液(30∶70)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm，流速1.0 ml/min，柱溫30℃。結(jié)果 木犀草素和芹菜素進(jìn)樣濃度在0.025 mg/ml～0.200 mg/ml范圍時(shí)，木犀草素(y=97251x-1134.2，R2=0.9965，n=5)和芹菜素(y=61659x-184.55，R2=0.9949，n=5)均呈良好的線性關(guān)系。木犀草素和芹菜素的平均回收率分別為99.83%和100.53%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確, 可對(duì)半枝蓮的質(zhì)量進(jìn)行控制。

半枝蓮；木犀草素；芹菜素；反相高效液相色譜法

半枝蓮為唇形科植物Scutellaria barbata D.Don 的干燥全草，有清熱解毒、化瘀利尿的功效，用于治療疔瘡腫毒、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌撲傷痛、水腫和黃疸等[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明半枝蓮有廣泛的藥理作用，主要表現(xiàn)在抗腫瘤、抑菌、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等方面[2]。半枝蓮含有多種化學(xué)成分，如黃酮類、萜類、生物堿、有機(jī)酸等成分，其中黃酮類化合物為半枝蓮的主要生理活性物質(zhì)[3]。從半枝蓮中分離得到的黃酮類化合物有野黃芩苷(scutellarin)、野黃芩素(scutellarein)、木犀草素(luteolin)和芹菜素(apigenin)等30多種。目前《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部中僅對(duì)半枝蓮藥材及飲片中的總黃酮和野黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定，尚未對(duì)半枝蓮中其他黃酮成分進(jìn)行規(guī)定，為了更全面地對(duì)半枝蓮中的主要黃酮類成分進(jìn)行分析，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法用于同時(shí)測(cè)定半枝蓮中木犀草素和芹菜素的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

大連依利特EC2006高效液相色譜儀，包括UV230II紫外—可見(jiàn)檢測(cè)器，P230II高壓恒流泵(A、B泵)。對(duì)照品木犀草素(批號(hào)120605)、芹菜素(批號(hào)120713)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；中藥半枝蓮購(gòu)于泰安宏康大藥房；乙腈為色譜純、醋酸為分析純、水為雙蒸水。

1.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取干燥至恒重的木犀草素、芹菜素對(duì)照品10 mg置于棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，配制成濃度為1.0 mg/ml的對(duì)照品溶液，4℃ 保存，備用。

1.3 樣品溶液的制備

將半枝蓮去除雜質(zhì)、干燥、粉碎，得到半枝蓮粉末。精密稱定半枝蓮粉末約1.0 g，置于100 ml錐形瓶中，精密加入50%的乙醇溶液40 ml，密塞，稱重，在45 ℃、200 W條件下超聲30 min后，放至室溫，用50%乙醇補(bǔ)足重量，抽濾，將濾液離心，并用0.22 μm濾膜過(guò)濾，得供試品溶液。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相乙腈-2%醋酸溶液(30∶70)，檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm，流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃。色譜圖見(jiàn)圖1，結(jié)果表明木犀草素和芹菜素分離度良好。

圖1 對(duì)照品(A)及和半枝蓮樣品(B)的HPLC 圖譜1木犀草素(luteolin)，2芹菜素(apigenin)

2.2 線性關(guān)系考察

精密吸取 “1.2”項(xiàng)下木犀草素、芹菜素對(duì)照品貯備液,加流動(dòng)相配制成木犀草素和芹菜素濃度均為0.025 mg/ml、0.05 mg/ml、0.1 mg/ml、0.15 mg/ml、0.2 mg/ml一系列混合溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以各對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，做線性回歸，得木犀草素、芹菜素的回歸方程分別y=97251x-1134.2(R2=0.9965，n=5)和y=61659x-184.55(R2=0.9949 n=5)。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品溶液 20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果表明，木犀草素和芹菜素峰面積的RSD分別為1.75%和1.81%均小于2.0%，表明該方法精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液 20 μl， 分別于配制后 0h、 2 h、4 h、 8 h、 16 h、 24 h 進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果木犀草素和芹菜素峰面積的RSD分別為1.09%、1.12%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品6份， 按照 “1.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20 μl進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算木犀草素、芹菜素的含量。其質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值分別為1.56%、1.80%。結(jié)果表明，本法重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

取已知濃度的樣品溶液(木犀草素0.031 mg/ml、芹菜素0.029 mg/ml)9份，每份1 ml，分別加入供試品含量80%、100%、120%的木犀草素和芹菜素對(duì)照品溶液，每種濃度各3份，進(jìn)樣20 μl，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。結(jié)果表明，該測(cè)定方法準(zhǔn)確度較高, 木犀草素、芹菜素3個(gè)濃度下的平均回收率分別為 99.83%、100.79%，RSD值分別1.13%、0.98%。

2.7 樣品含量測(cè)定

取藥材樣品粉末0.5 g，按照“1.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，進(jìn)樣，測(cè)定吸收峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算木犀草素和芹菜素的含量。供試液中木犀草素、芹菜素的濃度分別為0.031mg/ml、0.029 mg/ml，藥材中木犀草素、芹菜素的含量分別為0.052%、0.165%。

表1 木犀草素回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 芹菜素回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

3 討 論

試驗(yàn)過(guò)程中比較了以下不同的流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響：甲醇-0.4% 磷酸溶液(40∶60)；甲醇-0.4% 醋酸溶液(40∶60)；乙腈-0.4% 磷酸溶液(35∶65)；乙腈-2% 醋酸溶液(30∶70)，結(jié)果選用乙腈-2% 醋酸溶液(30∶70)作為流動(dòng)相時(shí)各個(gè)色譜峰的分離效果好。木犀草素和芹菜素在340～360 nm之間有較大吸收峰，木犀草素的最大吸收波長(zhǎng)為350 nm，芹菜素在340 nm處有最大吸收峰，綜合考慮各種因素，最后選定340 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。從以上方法學(xué)考察及試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，本測(cè)定方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好, 穩(wěn)定性較好，結(jié)果可靠，能夠準(zhǔn)確測(cè)定樣品中木犀草素和芹菜素的含量。

[1] 仲浩,薛曉霞,姚慶強(qiáng).半枝蓮化學(xué)成分的研究[J].中草藥,2008,39(1):21-23.

[2] Lee TK, Kim DI, Song YL. Differential inhibition of Scutellaria barbataon HCG-promoted proliferation of cultured uterine leiomyomal andmyometrial smoothmuscle cells[J].Immunopharmacol Immunotoxicol, 2004,26(3):329-342.

[3] 陳莉華,張燁,李三艷.半枝蓮黃酮的超聲提取及其抗氧化活性[J].生物加工過(guò)程,2013,11(4):36-41.

HPLC determination of luteolin and apigenin in Herba Scutellariae barbatae

CHENG Di-di LIU Cai-hong

(College of Pharmaceutical, Taishan Medical University, Taian 271016,China)

Objective: To develop an RH-HPLC method for determination of luteolin and apigenin in Herba Scutellariae barbatae. Methods: The analyses were performed on a Hypersil ODS2 column (4.6×250 mm,5 μm), the mobile phase was acetonitrile-2% acetic acid (30∶70) at the flow rate of 1 ml/min. The detection was carried out at 340 nm, the column temperature was 30 ℃.Results: The linear range was 0.025mg/ml～0.200 mg/ml for luteolin (y=97251x-1134.2, R2=0.9965, n=5) and apigenin (y=61659x-184.55, R2=0.9949, n=5). The average recoveries of luteolin and apigenin were 99.83% and 100.53% respectively. Conclusion: The method is found to be simple and accurate for simultaneous analysis of luteolin and apigenin in Herba Scutellariae barbatae. The method may be applied for quality control.

scutellariae barbatae；luteolin ；apigenin；HPLC determination

程迪迪(1994—)，女，本科，2013級(jí)制藥工程本科1班。

劉彩紅，女，主要從事中藥活性成分的研究，E-mail: chliu@tsmc.edu.cn。

R781

A

1004-7115(2016)12-1340-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.12.008

2016-10-12)