高宇 魏楠 李夢(mèng)潔 江皓

XRCC1基因多態(tài)性與彌漫大B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤預(yù)后的關(guān)系

高宇 魏楠 李夢(mèng)潔 江皓

目的 探討X射線損傷交叉互補(bǔ)蛋白1（XRCC1)基因多態(tài)性與彌漫大B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤（DLBCL）患者預(yù)后的關(guān)系。方法 選取XRCC1基因3個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）對(duì)DLBCL患者進(jìn)行基因分型，并回顧分析患者預(yù)后情況，采用logistic回歸分析XRCC1基因型與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 入選65例患者，平均年齡（59.7±8.0歲）；其中腫瘤相關(guān)死亡患者31例（47.7%）。XRCC1基因rs25487基因型頻率在死亡組與存活組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而等位基因頻率兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中A等位基因頻率在死亡組中明顯高于存活組（40.3%vs 22.1%，P＜0.05）。AA、GA、GG 3組基因型患者腫瘤相關(guān)病死率分別為75.0%（6/8）、54.2%（13/24）、36.4%（12/33）。rs25487位點(diǎn)A等位基因的加性模型中，每增加一個(gè)拷貝的A等位基因，風(fēng)險(xiǎn)是增加前的2.208倍（95%CI：1.039～4.694，P＜0.05）。校正年齡、性別、吸煙、B癥狀及和治療方式后，A等位基因仍然顯著增高患者死亡風(fēng)險(xiǎn)（OR=2.382，95%CI：1.057～5.367，P＜0.05）。結(jié)論 XRCC1基因rs25487多態(tài)性與DLBCL的預(yù)后相關(guān)。

非霍奇金淋巴瘤 XRCC1基因 多態(tài)性 預(yù)后

非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma，NHL）是一種常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，近30年來(lái)發(fā)病率有明顯的增加趨勢(shì)，目前已成為全球癌癥死亡的第五大病因。NHL發(fā)病危險(xiǎn)因素除了病毒感染、大劑量輻射、接觸有害的化工原料、服用某些免疫抑制劑導(dǎo)致免疫功能障礙外，遺傳易感性在其發(fā)病中也起著重要作用[1]。X射線損傷交叉互補(bǔ)蛋白1（X-ray repair cross complementary protein 1，XRCC1）是一種與堿基切除修復(fù)/單鏈斷裂修復(fù)直接相關(guān)的蛋白，參與鉑類(lèi)藥物引起的DNA損傷修復(fù)過(guò)程[2]。有研究顯示XRCC1基因多態(tài)性和NHL的發(fā)生密切相關(guān)[3-4]，但是目前關(guān)于XRCC1基因多態(tài)性與NHL預(yù)后的關(guān)系尚未明確。由于不同病理類(lèi)型的NHL患者預(yù)后不同，故本研究以NHL的常見(jiàn)類(lèi)型彌漫大B細(xì)胞型淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）患者為對(duì)象，探討DLBCL患者XRCC1基因多態(tài)性與其預(yù)后的關(guān)系。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇浙江醫(yī)院腫瘤科及血液科2009年3月1日至2014年3月1日病理明確診斷的DLBCL患者65例，排除4例非腫瘤相關(guān)死亡患者。患者納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為DLBCL；（2）經(jīng)過(guò)系統(tǒng)規(guī)范化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有全身多器官功能衰竭者；（2）伴有其他惡性腫瘤者；（3）觀察期內(nèi)發(fā)生非腫瘤相關(guān)死亡患者。其中男45例，女20例，女性患者占33.3%；年齡40～76（59.7±8.0）歲。所有患者均為南方漢族。42例（64.6%）患者有B癥狀，B癥狀定義為發(fā)熱（體溫38℃以上）、盜汗、體重減輕（就診前6個(gè)月內(nèi)無(wú)其他原因體重減輕10%以上）。30例（46.2%）患者有吸煙史，吸煙定義為一生中連續(xù)或累積吸煙6個(gè)月或以上者?；颊咧委熃Y(jié)束后每3～6個(gè)月進(jìn)行腫瘤狀態(tài)評(píng)估，隨訪形式為門(mén)診、住院復(fù)查及電話隨訪，截止觀察日期為2015年3月1日。NHL相關(guān)死亡指患者死于本病及本病相關(guān)并發(fā)癥。

1.2 治療方案 入選患者采用R-CHOP方案及R-EPOCH方案進(jìn)行化療。R-CHOP方案：利妥昔單抗375mg/m2靜脈滴注，第1天；環(huán)磷酰胺750mg/m2靜脈滴注，第1、8天；阿霉素40mg/m2或表阿霉素50mg/m2靜脈滴注，第1天；長(zhǎng)春新堿1.4mg/m2靜脈滴注，第1、8天；強(qiáng)的松80mg/m2口服，第1～5天；21d為1個(gè)周期。R-EPOCH方案：利妥昔單抗375mg/m2靜脈滴注，第1天；第3天開(kāi)始用EPOCH方案，依托泊苷50mg/（m2·d）、阿霉素10 mg/（m2·d）、長(zhǎng)春新堿0.4mg/（m2·d）稀釋于500ml 0.9%氯化鈉注射液中持續(xù)靜脈滴注，連續(xù)4d，采用輸液泵控制滴數(shù)；環(huán)磷酰胺750mg/（m2·d）靜脈注射，第8天；強(qiáng)的松80mg/（m2·d）口服，第3～8天。每3周為1個(gè)周期，至少治療4個(gè)周期。其中采用放化療聯(lián)合的患者共11例。

1.3 樣本處理、基因選擇及分型 抽取患者外周靜脈血2～3ml，EDTA抗凝，按照Omega公司血標(biāo)本DNA提取試劑盒操作步驟提取DNA，置于-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。按照最小等位基因頻率（MAF）＞0.05的標(biāo)準(zhǔn)，從在線HapMap CHB數(shù)據(jù)庫(kù)的XRCC1基因中選取3個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）位點(diǎn)rs25489、rs25487、rs1799782，基本信息見(jiàn)表1。采用Primer 3.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，引物由上海生工生物工程公司合成。擴(kuò)增參數(shù)：95℃15min，94℃ 30s，58℃ 90s，72℃ 60s，30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。SNP基因分型采用Beckman Coulter公司的GenomeLab SNP stream基因測(cè)序平臺(tái)及系統(tǒng)自帶的GetGenos 2.2圖形分析軟件。

表1 XRCC1基因SNP位點(diǎn)信息

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SAS統(tǒng)計(jì)軟件（Version 9.0，SAS Institute Inc.Cary，NC，USA）。正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，兩樣本間比較采用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)間距（IQR）表示，比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s確切概率法檢驗(yàn)。SNPs哈代溫伯格（Hardy-Weinberg）平衡檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)。XRCC1基因型與患者預(yù)后之間的關(guān)系采用logistic回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 患者基線特征及隨訪結(jié)果 本研究入選的65例DLBCL患者中發(fā)生腫瘤相關(guān)死亡的共31例（47.7%）。死亡組患者年齡（61.7±5.2）歲大于存活組（57.8±8.7）歲，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），兩組患者中性別分布、吸煙、B癥狀、放化療聯(lián)合的比例均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 患者基線特征

2.2 XRCC1基因型及等位基因分布頻率 XRCC1基因SNP的分型成功率為100%。死亡組與存活組患者SNP頻率分布均符合哈代溫伯格（Hardy-Weinberg）平衡。本研究中3個(gè)SNP之間連鎖不平衡程度較弱，未發(fā)現(xiàn)與腫瘤相關(guān)死亡的單倍體型。死亡組和存活組患者間XRCC1基因rs25487位點(diǎn)基因型分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但是等位基因頻率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其中死亡組rs25487的A等位基因頻率明顯高于存活組（40.3%vs 22.1%，P＜0.05）。rs25489及rs1799782基因型及等位基因頻率兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），見(jiàn)表3。

2.3 XRCC1基因多態(tài)性與預(yù)后相關(guān)性 XRCC1基因rs25487位點(diǎn)AA、GA、GG 3組基因型NHL患者相關(guān)病死率分別為75.0%（6/8）、54.2%（13/24）、36.4%（12/33），腫瘤相關(guān)病死率隨著rs25487位點(diǎn)A等位基因拷貝增加而增加。在rs25487位點(diǎn)A等位基因的加性模型中，每增加一個(gè)拷貝的A等位基因，患者死亡風(fēng)險(xiǎn)是增加前的2.208倍（95%CI：1.039～4.694，P＜0.05）；校正患者年齡、性別、吸煙、B癥狀及治療方式后，rs25487位點(diǎn)上的A等位基因仍然顯著增高患者死亡風(fēng)險(xiǎn)，是增加前的2.382倍（95%CI：1.057～5.367，P＜0.05），見(jiàn)表4。

表3 XRCC1基因型及等位基因頻率分布[例（%）]

表4 XRCC1基因多態(tài)性與預(yù)后分析

3 討論

XRCC1基因是一種重要的DNA修復(fù)基因，它所編碼的蛋白在基因切除修復(fù)和DNA單鏈斷裂修復(fù)過(guò)程中都發(fā)揮著十分重要的作用。XRCC1蛋白沒(méi)有直接的催化活性，但它可以與DNA聚合酶β、DNA連接酶Ⅲ、聚二磷酸腺苷核糖多聚酶（PARP）結(jié)合形成復(fù)合體，發(fā)揮骨架蛋白的作用，參與堿基切除修復(fù)和DNA單鏈斷裂修復(fù)[2]。

目前，已有較多的研究發(fā)現(xiàn)XRCC1基因rs25487位點(diǎn)多態(tài)性與血液系統(tǒng)腫瘤發(fā)病及預(yù)后密切相關(guān)。Wang等[5]研究發(fā)現(xiàn)XRCC1基因多態(tài)性與兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病發(fā)病密切相關(guān)，其中攜帶rs25487位點(diǎn)的A等位基因的亞洲兒童患急性淋巴細(xì)胞白血病的風(fēng)險(xiǎn)增加。Monroy等[3]對(duì)200例霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma，HL）患者和220例對(duì)照者進(jìn)行了XRCC1基因多態(tài)性與HL發(fā)病關(guān)系研究，結(jié)果顯示rs25487位點(diǎn)的A等位基因突變可使HL患病風(fēng)險(xiǎn)增加62%。Liu等[6]對(duì)中國(guó)人群進(jìn)行的XRCC1與NHL相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，重度吸煙患者組中XRCC1基因rs25487位點(diǎn)GA與AA基因型的患者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較GG基因型高3倍。Guillem等[7]研究了XRCC1基因rs25487位點(diǎn)多態(tài)性與自體造血干細(xì)胞移植術(shù)后淋巴瘤（包括NHL）患者預(yù)后的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)攜帶突變型A等位基因的患者死亡風(fēng)險(xiǎn)是野生型患者的2倍，而雜合突變和純合突變基因型患者發(fā)生治療相關(guān)急性髓系白血病的風(fēng)險(xiǎn)也明顯增加。然而，最近Li等[8]的一項(xiàng)薈萃分析顯示rs25487位點(diǎn)A等位側(cè)是NHL發(fā)病的保護(hù)因素，與本研究結(jié)果不一致，其原因主要是由于基因多態(tài)性存在地域及種族差異性，該薈萃分析納入了歐洲高加索人群及亞洲非漢族人群。此外，還有較多研究發(fā)現(xiàn)XRCC1基因rs25487位點(diǎn)多態(tài)性與其他腫瘤發(fā)病及預(yù)后密切相關(guān)[9-10]。

本研究發(fā)現(xiàn)，XRCC1基因的rs25487位點(diǎn)多態(tài)性與DLBCL患者預(yù)后密切相關(guān)，AA、GA、GG 3組基因型患者的腫瘤相關(guān)病死率分別為75.0%、54.2%和36.4%，隨著A等位基因拷貝增多，患者腫瘤相關(guān)病死率也逐漸升高。XRCC1基因rs25487位點(diǎn)突變會(huì)導(dǎo)致其第399密碼子編碼的氨基酸由精氨酸（Arg）變?yōu)楣劝滨０罚℅ln），第399密碼于位于PARP結(jié)合區(qū)域，因此這3個(gè)位點(diǎn)氨基酸的改變，可能改變XRCC1的功能[11-12]。rs25487位點(diǎn)的變異降低了XRCC1的修復(fù)能力，從而使DNA加合物水平升高，體細(xì)胞突變及染色體畸變?cè)黾?，同時(shí)該位點(diǎn)的變異會(huì)影響XRCC1基因編碼蛋白的氧化還原功能及DNA修復(fù)功能，將直接決定和影響癌細(xì)胞對(duì)鉑類(lèi)化療藥物耐藥性的高低，使腫瘤惡化進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)增加[13]。其中攜帶rs25487位點(diǎn)A等位基因的患者對(duì)化療藥物的反應(yīng)性較差，從而影響其預(yù)后及遠(yuǎn)期生存率。

本研究結(jié)果提示XRCC1基因rs25487位點(diǎn)多態(tài)性是NHL患者預(yù)后的預(yù)測(cè)因子，這提示未來(lái)可能可以通過(guò)對(duì)NHL患者進(jìn)行基因分型，從而評(píng)估患者的腫瘤相關(guān)死亡風(fēng)險(xiǎn)，為NHL患者個(gè)體化治療提供依據(jù)。但本研究也存在一些不足之處，首先樣本量有限，由于各種客觀條件限制，未能夠進(jìn)一步增加樣本量，可能對(duì)統(tǒng)計(jì)效能有一定影響，后續(xù)需累計(jì)病例樣本進(jìn)一步研究；另外本研究的納入人群均為中國(guó)南方漢族，XRCC1基因多態(tài)性存在地域種族差異性，故研究結(jié)論不能一概而論，尚需在不同地域及不同種族進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1] Skibola C F,Curry J D,Nieters A.Genetic susceptibility to lymphoma[J].Haematologica,2007,92(7):960-969.

[2] CappelliE,Taylor R,Cevasco M,et al.Involvement of XRCC1 and DNAligase IIIgene products in DNAbase excision repair[J].J BiolChem,1997,272(38):23970-23975.

[3] Monroy C M,Cortes A C,Lopez M,et al.Hodgkin lymphoma risk: role of genetic polymorphisms and gene-gene interactions in DNArepair pathways[J].MolCarcinog,2011,50(11):825-834.

[4] Hill D A,Wang S S,Cerhan J R,et al.Risk of non-Hodgkin lymphoma (NHL)in relation to germline variation in DNA repair and related genes[J].Blood,2006,108(9):3161-3167.

[5] Wang R,Hu X,Zhou Y,et al.XRCC1 Arg399Gln and Arg194Trp polymorphisms in childhood acute lymphoblastic leukemia risk:a meta-analysis[J].Leuk Lymphoma,2013,54(1):153-159.

[6] Liu J,Song B,Wang Z,et al.DNA repair gene XRCC1 polymorphisms and non-Hodgkin lymphoma risk in a Chinese population [J].Cancer Genet Cytogenet,2009,191(2):67-72.

[7]Guillem VM,Arbona C,Hernández-Boluda J C,et al.An XRCC1 polymorphism is associated with the outcome of patients with lymphoma undergoing autologous stem cell transplant[J].Leuk Lymphoma,2011,52(7):1249-1254.

[8] Li Y,Bai O,Cui J,et al.Genetic polymorphisms in the DNA repair gene,XRCC1 associate with non-Hodgkin lymphoma susceptibility:Asystematic review and meta-analysis[J].Eur J Med Genet, 2016,59(2):91-103.

[9] Tengstro m M,Mannermaa A,Kosma V M,et al.XRCC1 rs25487 polymorphism predicts the survival of patients after postoperative radiotherapy and adjuvant chemotherapy for breast cancer[J]. Anticancer Res,2014,34(6):3031-3037.

[10] Ding P,Yang Y,Cheng L,et al.The relationship between seven common polymorphisms from five DNArepair genes and the risk for breast cancer in northern Chinese women[J].PLoS One, 2014,9(3):e92083.

[11] Kubota Y,Nash R A,Klungland A,et al.Reconstitution of DNA base excision-repair with purified human proteins:interaction between DNA polymerase beta and the XRCC1 protein[J].EMBO J,1996,15(23):6662-6670.

[12] Wilson S H.Mammalian base excision repair and DNA polymerase beta[J].Mutat Res,1998,407(3):203-215.

[13] Su Y,Zhang H,Xu F,et al.DNA repair gene polymorphisms in relation to non-small cell Lung cancer survival[J].Cell Physiol Biochem,2015,36(4):1419-1429.

Association between DNA X-ray repair cross complementary protein 1（XRCC1）polymorphisms and clinical outcome of patients with diffuse large B-cell lymphoma

GAO Yu,WEI Nan,LI Mengjie,et al.Department of Hematology,Zhejiang Hospital,Hangzhou 310013,China

【 Abstract】 Objective To investigate the association of DNA X-ray repair cross complementary protein 1(XRCC1) polymorphisms with the clinical outcome of patients with non-Hodgkin's lymphoma(NHL). Methods Sixty five patients with diffuse large B-cell lymphoma(DLBCL)(mean age of 59.7±8.0 years)were enrolled in the study,among whom 31(47.7%)died from NHL during follow-up.Three single nucleotide polymorphisms(SNPs)in XRCC1 gene of patients were genotyped.Logistic regression analyses were used to compute odds ratios(ORs)and 95%confidence intervals(CIs). Results Among three SNPs, frequency of A allele of rs25487 was significantly higher in death group than that in survival group(40.3%vs.22.1%,P＜0.05).The death rates of patients with AA,GA,and GG genotype were 75.0%(6/8),54.2%(13/24)and 36.4%(12/33),respectively.A allele of rs25487 increased the risk of death in additive model with odds ratio(OR)of 2.208(95%CI:1.039～4.694,P＜0.05).After adjusting for age,sex,smoking,B symptoms and treatment,the significance still remained with OR=2.382(95%CI:1.057～5.367,P＜0.05). Conclusion rs25487 of XRCC1 gene may be correlated with outcome of DLBCL patients.

Non-Hodgkin's lymphoma XRCC1 gene Polymorphism Prognosis

2015-08-24）

（本文編輯：田云鵬）

310013 杭州，浙江醫(yī)院血液科

高宇，E-mail：zjyyzlk@163.com