岑美婷 陳純旭 吳振興 張 慧

廣州市第一人民醫(yī)院 廣州市南沙中心醫(yī)院檢驗科（廣州 510045）

兒童化學發(fā)光免疫檢測中的稀釋方法研究

岑美婷 陳純旭 吳振興 張 慧

廣州市第一人民醫(yī)院 廣州市南沙中心醫(yī)院檢驗科（廣州 510045）

目的 對兒童化學發(fā)光免疫檢驗中標本量過少時的稀釋方法分析。方法 選取我院2013年5月—2015年5月兒童常規(guī)篩查項目50例血清三碘甲狀腺原氨酸（TT3）檢測為例，其稀釋介質分別采用TT3定制液S0、醫(yī)用蒸餾水以及0.9%氯化鈉，對其實施手工2倍（1∶1）和4倍（1∶3）稀釋后，對比分析稀釋后結合和原始數(shù)據(jù)差異。結果 結果和原始數(shù)據(jù)對比，2倍、4倍稀釋S0組以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋結果差異不大，對比沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），其與各組均差異顯著（P＜0.05）。結論 在兒童血清三碘甲狀腺原氨酸檢測中對其實施2倍、4倍稀釋S0以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋能夠滿足醫(yī)學檢驗需求，值得推廣應用。

兒童 化學發(fā)光免疫檢測 稀釋方法

化學發(fā)光免疫分析法可以分成兩種，分別是免疫化學反應和化學發(fā)光反應，也就是將化學發(fā)光劑在抗體或者抗原上面實施標記的一種免疫檢測方式，在應用中優(yōu)勢包括:操作方便、穩(wěn)定性高以及靈敏度高等，因此在臨床中的應用比較廣泛［1］。兒童生長激素激發(fā)試驗測定的經(jīng)典方法為放射免疫分析法（RIA），并且已形成一套完整的判斷標準。但近幾年來隨著其他免疫學方法迅速發(fā)展，尤其是全自動化學發(fā)光免疫分析儀的廣泛使用，放射免疫法已逐漸被取代。其中在兒童化學發(fā)光免疫檢測中難免會出現(xiàn)標本量過少的情況，那么也就需要采用合適的稀釋劑對其實施稀釋檢測，本文則以我院兒童常規(guī)篩查項目中的血清三碘甲狀腺原氨酸（TT3）檢測為例，對其稀釋劑和稀釋倍數(shù)分析。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取我院2013年5月—2015年5月兒童常規(guī)篩查項目中50例患兒的血清三碘甲狀腺原氨酸（TT3）檢測標本為例，其中男性患兒26例，女性患兒24例，患者年齡為3～13歲，平均年齡為（12.3±1.1）歲，所有患兒血清樣本均在檢測線性范圍之內。

本次所有檢測工作均由美國貝克曼庫爾特公司的化學發(fā)光免疫分析儀ACCESS 2對其樣本進行檢測。試劑為配套試劑三碘甲狀腺原氨酸（TT3），試劑盒批內質控檢測采用BIO-RAD質控品實施檢測，低、中、高三個濃度水平均在5%之下。

1.2 稀釋方法 其稀釋介質分別采用TT3定制液S0、醫(yī)用蒸餾水以及0.9%氯化鈉，對其實施手工2倍（1∶1）和4倍（1∶3）稀釋，將所選取的50例血清樣本分別放置在不同稀釋劑和不同倍數(shù)稀釋劑中，最后對其臨床指標實施檢測對比。

2 結 果

和原始數(shù)據(jù)對比，2倍、4倍稀釋S0組以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋結果差異不大，對比沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），其與各組均差異顯著（P＜0.05）。其中各組數(shù)據(jù)監(jiān)測數(shù)據(jù)和原始血清指標見表1。各組差異對比，見表2。

表1 各組數(shù)據(jù)監(jiān)測數(shù)據(jù)和原始血清指標（g/L）

圖1 不同稀釋劑2倍和原始數(shù)據(jù)對比結果（單位:μg/L）

表2 不同稀釋劑和不同倍數(shù)和原始數(shù)據(jù)對比結果

圖2 不同稀釋劑4倍和原始數(shù)據(jù)對比結果（單位:μg/L）

3 討 論

化學發(fā)光是在常溫所出現(xiàn)的化學反應光的發(fā)射，其發(fā)光機理是在反應體系中的一些物質分子，其中包括反應物、熒光物質或者中間體等，對反應釋放能力有所吸收的話，從一開始基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，其中中間體能夠從一開始的激發(fā)態(tài)回歸到基態(tài)過程中會出現(xiàn)等能級光子的釋放，對這些光子實施臨床測定也就能夠實施相應的定量分析［2］?；瘜W發(fā)光免疫測量則是將化學發(fā)光和免疫產物結合應用的一種臨床檢測方法，因為化學發(fā)光具有一定的熒光特異性，但是其和熒光過程中所需要的激發(fā)光具有一定的差異，化學發(fā)光則是通過化學反應所出現(xiàn)的光強度，在此過程中并不需要激發(fā)光，以此也就對熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響作用有顯著避免［3］。基于其原理可以明確，在其檢測過程中對其精度要求較高，患者檢測過程中的血清加注可以直接影響到其檢測物濃度，從而影響檢測結果。兒童檢驗和成人檢驗具有一定差異，比如在加樣環(huán)節(jié)兒童化學免疫檢驗通常會出現(xiàn)標本量不足問題，究其原因則主要包括三個方面，分別是兒童血液樣本通常是14歲以下兒童，患兒血球壓積過高血清量偏少，因此具有一定的采集難度；針對具體的檢驗結果需要對某些問題實施復查；不可預估的儀器故障會導致標本出現(xiàn)浪費情況等等［4-5］。針對這些問題，為了能夠有效避免反復抽血情況的出現(xiàn)，就需要找到相應的稀釋介質和合理的稀釋倍數(shù)，解決標本量不足問題。

其中在本次研究中所選用的稀釋介質有三種，分別是和TT3相配合定制液S0，醫(yī)用蒸餾水以及0.9%氯化鈉，并各個稀釋介質采用2倍和4倍實施稀釋。其中在臨床分析結果中顯示2倍、4倍稀釋S0組以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋結果可用，但是其他稀釋辦法在臨床應用對其結果具有較大影響。其原因是S0定標液組成成分為人血清含有零濃度甲狀腺原氨酸，這一物質和樣品血清基本相近，兩者的結合應用具有較高稀釋能力。同時零濃度甲狀腺原氨酸膠體具有較高穩(wěn)定性，成分單一，能夠有效排除其他物質對血清所產生的影響作用，也就顯著降低了機制效應對檢驗結果所具有的影響作用。因此S0定標液在本次實驗中所選用的2倍以及4倍稀釋對其檢測結果均影響不大。醫(yī)用蒸餾水本身沒有任何雜質，在其稀釋過程中所產生的基質效應也比較小，能夠用來進行稀釋，但是在醫(yī)用蒸餾水量達到4倍的時候，也就會出現(xiàn)隨著稀釋液量的逐漸增大也就逐漸提高了之間的誤差，從而導致其結果偏差過大［6］。0.9%氯化鈉的分析結果則顯示不管是2倍還是4倍均不可用，主要原因是將其作為稀釋劑應用，其本身不含有蛋白質和血清成分，如果用其進行稀釋血清，也就會對其之前的穩(wěn)定性有所降低，也會引起吸光度范圍有較大波動的出現(xiàn)，從而最終導致檢驗結果具有較大差異，不可用。

化學發(fā)光免疫分析測定中經(jīng)常會用到稀釋液和稀釋方法，其也對檢測結果具有直接影響。關于稀釋液的選擇不但要簡單方便，同時也不能夠對其檢測結果準確性產生影響。在本次研究中所選用的三種稀釋液中，最好的為SO稀釋液，并且每一種檢測項目的SO定制液成分均是這一實際的零濃度入血清。因此在實施其他標本鑒定的時候也可以采用這一方式。但是在應用中是否能夠選用4倍以上標本稀釋液則還需要進一步研究。醫(yī)用蒸餾水比較容易得到，但是其使用僅限制在2倍稀釋，相對而言0.9%氯化鈉則不能夠作為稀釋液應用，在臨床中需要注意。

總之，在兒童血清總三碘甲狀腺原氨酸檢測中對其實施2倍、4倍稀釋S0以及2倍醫(yī)用蒸餾水稀釋能夠滿足醫(yī)學檢驗需求，檢驗結果和原有數(shù)據(jù)之間偏差較小，因此也就說明其能夠成功應用在兒童血清標本量過少情況中，同時也值得推廣應用。

［1］鮑俊杰，楊紅玲，郭彩嬌，等.酶聯(lián)免疫吸附測定法與化學發(fā)光微粒子免疫分析法檢測廣州地區(qū)兒童HB-sAb結果分析［J］.中西醫(yī)結合肝病雜志，2009，19（1）:44-46.

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［3］李華榮.化學發(fā)光免疫分析技術在跟蹤兒童乙型肝炎疫苗免疫效果中的動態(tài)觀察［J］.中國現(xiàn)代藥物應用，2013，7（20）:83-84.

［4］李麗珍.廣西那坡縣1～6歲兒童乙型病毒性肝炎及白喉免疫效果分析［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，29（1）:154-155.

［5］黃軍林，黃夏聲，羅炬，等.化學發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測免疫兒童乙型肝炎表面抗體的結果分析［J］.吉林醫(yī)學，2013，34（13）:2468-2469.

［6］陳紅兵，謝國錦，沈京培，等.化學發(fā)光法在兒童生長激素缺乏癥診斷中的應用［J］.廣東醫(yī)學，2011，32（3）:325-327.

10.3969/j.issn.1000-8535.2016.01.021

2015-10-12）