謝海珍，陳玉紅，黃秋艷

(宜春市疾病預(yù)防控制中心，江西宜春336000)

2013年-2015年宜春市麻疹實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

謝海珍，陳玉紅，黃秋艷

(宜春市疾病預(yù)防控制中心，江西宜春336000)

目的分析宜春市2013年-2015年麻疹監(jiān)測(cè)結(jié)果，探尋麻疹流行特點(diǎn)和變化規(guī)律，為控制和消除麻疹提供有力依據(jù)。方法收集宜春市各醫(yī)療機(jī)構(gòu)于2013年-2015間所有麻疹疑似病例血清學(xué)和病原學(xué)樣本(咽拭子)，血清樣本采用ELISA檢測(cè)麻疹病毒IgM抗體，咽拭子樣本采用熒光PCR進(jìn)行麻疹病毒核酸檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果麻疹疑似病例血清標(biāo)本699例，血清陽性標(biāo)本17例，咽拭子標(biāo)本651例，病毒核酸陽性標(biāo)本11例。時(shí)間分布主要集中在4-9月；年齡主要分布在小年齡＜8月齡、3齡組及40歲以上年齡組。結(jié)論有必要對(duì)疑似的所有發(fā)熱、出疹病例開展麻疹核酸PCR及血清IgM同步檢測(cè)。全面提高目標(biāo)人群免疫水平，達(dá)到控制、消除的目的。

麻疹；IgM；核酸檢測(cè)；病原學(xué)檢測(cè)

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集由宜春市轄區(qū)內(nèi)各市、區(qū)、縣疾控中心根據(jù)《全國麻疹監(jiān)測(cè)方案》要求對(duì)所有麻疹疑似病例采集血清學(xué)樣本699例和病原學(xué)樣本（咽拭子）651例，同時(shí)采集到靜脈血、咽拭的疑似病例共62例；靜脈血常規(guī)分離血清，咽拭子標(biāo)本保存在3ml麻疹病毒標(biāo)本運(yùn)輸液(含5%牛血清、終濃度2000U/ml青霉素、200μg/ml鏈霉素和25U/ml制霉菌素的細(xì)胞培養(yǎng)液)中，冷藏運(yùn)送。

1.2 標(biāo)本檢測(cè)

1.2.1 檢測(cè)程序血清標(biāo)本采用ELISA檢測(cè)麻疹病毒IgM抗體，咽拭子標(biāo)本采用熒光PCR進(jìn)行麻疹病毒核酸檢測(cè)。2013年1-4月份麻疹疑似病例病原學(xué)咽拭子標(biāo)本直接送省疾控中心進(jìn)行麻疹核酸檢測(cè)，5月份以后的標(biāo)本由市疾控中心進(jìn)行麻疹核酸檢測(cè)，所有麻疹核酸檢測(cè)陽性的標(biāo)本再送省疾控中心進(jìn)行病毒分離。

1.2.2 麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)采用《麻疹病毒IgM抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫捕捉法)》(珠海海泰生物制藥有限公司)檢測(cè)麻疹I(lǐng)gM抗體，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，在有效期內(nèi)使用。結(jié)果計(jì)算S/N值(S/N值=樣品A值/陰性對(duì)照A值平均值，陰性對(duì)照A值平均值＜0.07，按0.07計(jì)算，陰性對(duì)照A值平均值≥0.07，則按實(shí)際值計(jì)算)。S/N值≥2.1，判為陽性，S/N值＜2.1，判為陰性。酶標(biāo)儀是安圖2010型。

1.2.3 麻疹病毒核酸檢測(cè)

1.2.3.1 病毒RNA提取按照美國Promega公司生產(chǎn)的Maxwell16 Viral Total Nucleic Acid Purification Kitey及配套儀器Maxwell16 Instrument操作說明提取病毒RNA。

1.2.3.2 Realtime RT-PCR檢測(cè)提取的病毒RNA按照廣州達(dá)安基因試劑公司提供的試劑盒說明配置反應(yīng)體系，經(jīng)50℃反轉(zhuǎn)錄15min，95℃變性15min，再按94℃×15s→55℃×45s，循環(huán)40次，反應(yīng)體系為25μl。熒光通道檢測(cè)選用FAM通道。

1.2.3.3 結(jié)果判斷擴(kuò)增曲線無對(duì)數(shù)增長期或Ct值＞38判為陰性，曲線有明顯的對(duì)數(shù)增長期且Ct值≤38判為陽性。

2 結(jié)果

2.1 麻疹病毒病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果及流行病學(xué)特征

2.1.1 麻疹病毒血清IgM抗體及核酸檢測(cè)結(jié)果2013年-2015年全市共檢測(cè)麻疹疑似病例血清標(biāo)本699例，血清陽性標(biāo)本17例，咽拭子標(biāo)本651例，病毒核酸陽性標(biāo)本11例。其中血清IgM抗體及核酸同時(shí)為陽性標(biāo)本10例。2013年沒有陽性病例，2014年麻疹血清IgM抗體和核酸檢測(cè)陽性者為同一人，實(shí)驗(yàn)室診斷病例1例，2015年實(shí)麻疹血清IgM抗體陽性16例，其中核酸檢陽性者9例，另有一例血清IgM抗體陰性而核酸陽性，故實(shí)驗(yàn)室診斷病例17例，2013年-2015年宜春市實(shí)驗(yàn)室診斷病例共計(jì)18例。見表1。

表1 麻疹疑似病例標(biāo)本檢測(cè)陽性率

2.1.2 流行病學(xué)特征18例實(shí)驗(yàn)室診斷病例地區(qū)分布僅在袁州區(qū)、高安市、萬載縣、銅鼓縣4個(gè)市、區(qū)縣，分別為袁州區(qū)6例、高安市7例、萬載縣1例、銅鼓縣1例。時(shí)間分布主要集中在4-9月份（見圖1）；年齡主要分布在小年齡＜8月齡及〈18歲以上年齡組（見表2），最小發(fā)病年齡為4月齡，最大為43歲。麻疹疫苗免疫史：無MCV免疫史6例，免疫史不詳9例，免疫史不詳?shù)谋壤c年齡沒有很明顯相關(guān)性。

圖1 2013-2015年宜春市麻疹實(shí)驗(yàn)室診斷病例月分布圖

表2 2013年～2015年宜春市麻疹病例發(fā)病年齡構(gòu)成比

3 討論

宜春市近年來麻疹發(fā)病接近消除的水平，但2015年麻疹疫情出現(xiàn)抬頭趨勢(shì)，消除麻疹的目標(biāo)也面臨很大挑戰(zhàn)。為加大對(duì)麻疹疫情監(jiān)控力度，盡早對(duì)麻疹疑似病例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確診，及時(shí)阻斷麻疹病毒傳播，2013年4月，宜春市在血清學(xué)診斷基礎(chǔ)上，引進(jìn)了麻疹病毒realtime RT-PCR檢測(cè)技術(shù)，建立了麻疹和風(fēng)疹病毒病原學(xué)核酸快速診斷實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步縮短麻疹病例實(shí)驗(yàn)室診斷時(shí)間，彌補(bǔ)ELISA法檢測(cè)血清特異性IgM抗體在發(fā)病早期存在一定程度的漏檢[3]。ELISA法是基層麻疹監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室通用的檢測(cè)手段，但一些處于感染早期(出疹3d內(nèi))或免疫功能低下的患者體內(nèi)麻疹I(lǐng)gM抗體滴度比較低，容易造成漏檢[4，5]。且風(fēng)疹與麻疹在臨床上難以鑒別，為確保控制和消除麻疹工作的及時(shí)有效性，有必要對(duì)疑似的所有發(fā)熱、出疹病例開展麻疹和風(fēng)疹的PCR(real－time PCR)及特異性免疫球蛋白M(IgM)同步檢測(cè)。本調(diào)查中有1例核酸檢測(cè)陽性而血清IgM為陰性，所以對(duì)早期血清IgM陰性的疑似病例也可用此法復(fù)檢，可增加疑似病例的麻疹診斷率。但也要結(jié)合麻疹疫苗接種史、核實(shí)接種疫苗等情況綜合判斷，避免假陽性[6]。

調(diào)查表明，18例病例主要分布在袁州區(qū)及高安市兩個(gè)人口密度較大的區(qū)、市；而且麻疹發(fā)病有明顯的季節(jié)特征，主要集中在4-9月，發(fā)病高峰在春、夏季，因此，在麻疹高發(fā)季節(jié)來臨前，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)托幼機(jī)構(gòu)、學(xué)校等場所的疫情監(jiān)測(cè)，有針對(duì)性地開展強(qiáng)化免疫的相關(guān)措施，避免麻疹暴發(fā)流行；袁州區(qū)6例病例全部是9個(gè)月及以下嬰兒，且均未接種過麻疹疫苗，發(fā)病率較高的主要原因是該時(shí)期的嬰幼兒尚未到麻疹疫苗的基礎(chǔ)免疫時(shí)間，其自身遺傳母親相應(yīng)抗體的水平較低，建議加強(qiáng)袁州區(qū)常規(guī)免疫規(guī)劃管理，提高人群免疫成功率，擴(kuò)大易感人群疫苗接種范圍，定期開展挨家挨戶“掃蕩式”的查漏補(bǔ)種工作，對(duì)高危人群適時(shí)開展強(qiáng)化免疫，消除免疫空白，而高安市7例均為18歲以下病例，大部分人麻疹病例免疫史不詳，致使免疫空白、免疫失效和免疫裂隙，成為發(fā)病的主要原因。也有可能是隨著其接種麻疹疫苗的時(shí)間比較久遠(yuǎn)、體內(nèi)麻疹抗體水平已明顯下降、極易感染麻疹病毒而致病[7，8]。由此可見，成人已成為麻疹發(fā)病的高危人群，應(yīng)適時(shí)開展大齡兒童的強(qiáng)化免疫工作[9]。

麻疹陽性病例中，有6例血清IgM抗體陽性而核酸檢測(cè)為陰性，提示我市麻疹病例咽拭子標(biāo)本采集還是存在很大問題，而且近年我國其他省份都開始出現(xiàn)新的基因型別，因此，需要進(jìn)一步提高陽性病例咽拭子標(biāo)本采集率和病毒分離率，盡可能獲得更多的毒株，及時(shí)發(fā)現(xiàn)新的基因型別，為麻疹防控策略提供科學(xué)依據(jù)[10]。

建議各級(jí)疾控中心高度重視加強(qiáng)特殊人群如邊遠(yuǎn)貧困地區(qū)兒童的免疫接種，有針對(duì)性的強(qiáng)化免疫，如加強(qiáng)成年人的麻疹疫苗接種，盡可能消除免疫空白地區(qū)，全面提高目標(biāo)人群免疫水平，達(dá)到控制、消除、消滅麻疹的目的。同時(shí)定期開展人群免疫成功率調(diào)查和健康人群免疫水平監(jiān)測(cè)，對(duì)本市有效控制麻疹的發(fā)生有著重要意義。

【致謝】感謝江西省疾病預(yù)防控制中心疾病控制檢驗(yàn)所對(duì)本研究的大力支持。

[1]馬超，蘇琪茹，郝利新，等.中國2012～2013年麻疹流行病學(xué)特征與消除麻疹進(jìn)展中國疫苗和免疫[J].中國疫苗和免疫，2014，20 (3)：193-199.

[2]龔甜，熊英，張艷妮，等.2013年江西省麻疹/風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)運(yùn)轉(zhuǎn)分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42(5)：841－843.

[3]余蓓蓓，馮燕，徐昌平，等.含內(nèi)質(zhì)控多重?zé)晒釸T-PCR同時(shí)檢測(cè)麻疹病毒和風(fēng)疹病毒的研究[J].病毒學(xué)報(bào)，2010，26(2)：109-114.

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[9]朱豐秀，吳中發(fā)，劉素華.贛州市738例麻疹血清抗體(IgM)檢測(cè)結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28(1)：91－92.

[10]龔甜，熊英，張艷妮，等.江西省2013年疑似麻疹病例病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015(10)：1615-1617.

R511.1，R446.62

A

1674-1129(2016)06-0791-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.034麻疹是一種傳染性很強(qiáng)的呼吸道傳染病，嚴(yán)重危害兒童健康，2013年，我國國務(wù)院《衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展“十二五”規(guī)劃》提出了要努力實(shí)現(xiàn)消除麻疹的目標(biāo)[1]。2013年4月起江西省麻疹/風(fēng)疹疑似病例病原學(xué)的核酸快速診斷網(wǎng)絡(luò)正式建立并開始運(yùn)轉(zhuǎn)[2]。宜春市自建立麻疹核酸實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real－time PCR)實(shí)驗(yàn)室以來，為控制和消除麻疹工作起到了推進(jìn)作用。為了進(jìn)一步提高麻疹監(jiān)測(cè)水平，科學(xué)地分析現(xiàn)階段麻疹流行因素，探索麻疹發(fā)病原因，本研究對(duì)2013年-2015年宜春市麻疹實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)的1350份疑似麻疹病例的樣本結(jié)果進(jìn)行分析。

2016-07-26；

2016-11-30)