王曉雯，洪振瀚，劉安瑞，羅立新

（華南理工大學(xué)，生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510006）

基于熒光定量PCR和高通量測序技術(shù)的葡萄園土壤細菌群落結(jié)構(gòu)多樣性分析

王曉雯，洪振瀚，劉安瑞，羅立新

（華南理工大學(xué)，生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510006）

土壤細菌在葡萄園生態(tài)系統(tǒng)中起著重要作用，具有十分重要的生態(tài)功能。以貴州鎮(zhèn)遠葡萄園基地根際、非根際土壤為研究對象，在對土壤的基本理化指標及酶活檢測的基礎(chǔ)上，采用熒光定量PCR（Q-PCR）和Illum ina M iseq高通量測序技術(shù)對葡萄園根際和非根際土壤的細菌菌群結(jié)構(gòu)進行分析。結(jié)果表明，葡萄園根際土壤細菌16S rRNA基因的拷貝數(shù)在1.38×108～1.17×109copies/g之間，高于非根際土壤。IlluminaM iseq高通量測序顯示，葡萄園根際土壤細菌呈多樣性分布且優(yōu)勢菌群突出，主要涵蓋了變形菌門（Protecbacteria），放線菌門（Actinbacteria），酸桿菌門（Acidobacteri），厚壁菌門（Firm icute），綠彎菌門（Chloroflexi），藍藻門（Cyanobacteria），泉古菌門（Crenarchoeo），擬桿菌門（Bacteroidetes），芽單胞菌門（Gemmatimonadete），硝化螺旋菌門（Nitrospirae）。其中變形菌門和放線菌門為優(yōu)勢菌群，兩者相對豐度之和占到了53.33%～67.28%。葡萄園根際土壤的主要優(yōu)勢細菌屬包括乳球菌屬（Lactococcus），節(jié)細菌屬（Arthrobacter），Candidatus nitrososphaera，亞硝化螺菌屬（Nitrososphaera），熱單胞菌屬（Thermomonas），Phycicoccus，泛菌屬（Pantoea），芽孢桿菌屬（Bacillus），埃希氏桿菌屬（Escherichia），鞘脂單胞菌屬（Sphingomonas），和溶桿菌屬（Lysobacter）。α多樣性分析表明，不同位點的根際土壤細菌多樣性比較接近，而根際土壤細菌多樣性低于非根際土壤。冗余分析（RDA）進一步分析表明，葡萄園土壤細菌群落多樣性與土壤養(yǎng)分及酶活存在不同程度的相關(guān)關(guān)系，群落結(jié)構(gòu)多樣性受多種因素的影響。

葡萄園土壤； 根際土壤； 細菌多樣性； 高通量測序； 熒光定量PCR

土壤根際是一個特殊的生態(tài)系統(tǒng)，它與周圍非根際土壤在化學(xué)、生物學(xué)等特性上具有顯著差異[1]。它易受植物根系的影響，是有益微生物及有害微生物與宿主植物發(fā)生復(fù)雜相互作用的一個微小區(qū)域，蘊含著豐富的微生物資源[2]。其中，細菌是根際土壤中數(shù)量最豐富、種類較多的微生物類群，廣泛參與抑制病原體，氮循環(huán)，土壤礦化和養(yǎng)分吸收過程，它的含量和組成會對植株產(chǎn)生顯著的影響[3-4]。有研究表明，有益的細菌類群能夠促進植株的生長，果實的發(fā)育[3]；有害的細菌類群則可能引起各種病蟲害的發(fā)生[5]。近年來興起的高通量測序方法為全面認識土壤微生物提供了新的契機，研究者們對根際微生物的研究和應(yīng)用越來越深入[5-6]。

葡萄又稱提子，多年生落葉藤本植物，褐色枝蔓細長，根系發(fā)達，可深達數(shù)米以下，在我國有大量的栽培，主要分布在貴州、甘肅、云南、寧夏、河北、新疆及吉林等地。其中貴州鎮(zhèn)遠擁有得天獨厚的氣候資源，是著名美酒產(chǎn)區(qū)，適宜原生態(tài)刺葡萄種植，葡萄產(chǎn)量高，粒大，著色度好，主要用于加工成葡萄酒。然而，對于該區(qū)葡萄園的微生物組成知之甚少，尤其是根際，研究該葡萄園土壤的微生物，對于評價該區(qū)釀酒葡萄基地的品質(zhì)具有重要意義。由此，本研究選取貴州金奇谷葡萄園為研究基地，對該葡萄園根際土壤的理化性質(zhì)及主要酶活進行探究，并結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)手段RT-PCR和高通量測序等對根際葡萄園土壤微生物群落結(jié)構(gòu)組成和大小進行研究，旨在了解該葡萄園土壤養(yǎng)分，酶活及根際微生物情況，以期對該葡萄園的土壤質(zhì)量評價和葡萄的合理種植及優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1土壤樣品采集

土壤樣品于2015年6月25日采自貴州省鎮(zhèn)遠縣清溪鎮(zhèn)金奇谷產(chǎn)業(yè)園(E 108°42′，N 27°05′)，在該葡萄種植基地隨機選取3株葡萄植株，采用5點取樣法，以葡萄植株為中心，沿行內(nèi)挖取離樹干30 cm左右，0～20 cm深度的土壤，作為根區(qū)土壤；根際土壤采用抖落法[7]，先抖落根系上附著的大塊土壤，然后在紙上輕拍根系或用鑷子輕觸，將根系上附著的0～4mm的粒狀或粉狀土壤取下收集，此為根際土，分別標記為GY1、GY2、GY3；同時選取該植株附近無根系存在的裸地土壤作為對照，此為非根際土壤樣品，混樣后標記為CK。土樣裝入無菌封口塑料袋,帶回實驗室。一部分土樣于室內(nèi)自然風(fēng)干，研磨、過篩，置于4℃冰箱內(nèi)保存以供土壤基本理化性質(zhì)和土壤酶活測定，另一部分置于-20℃冰箱內(nèi)保存，以供土壤微生物學(xué)指標分析。

1.2土壤理化性質(zhì)及酶活測定

土壤理化性質(zhì)按常規(guī)方法測定[8]。含水量的測定采用烘干法，pH值采用pH計測定（水土比=5∶1），有機質(zhì)測定采用重鉻酸鉀外加熱法，全氮采用凱氏定氮法測定，總磷用HClO4-H2SO4消解-鉬藍比色法測定，速效磷采用NaHCO3浸提-鉬銻抗比色法。供試土壤理化性質(zhì)見表1。

土壤脲酶采用苯酚鈉比色法，以24 h后每1g土中的NH4+-N的mg數(shù)表示；淀粉酶采用3,5-二硝基水楊酸法測定，以24 h后1g土中麥芽糖的mg數(shù)表示；蔗糖酶采用3,5-二硝基水楊酸法測定，以24 h后1g土中葡萄糖的mg數(shù)表示；磷酸酶采用磷酸苯二鈉比色法測定，以24 h后每1g土壤中酚的mg數(shù)表示；過氧化氫酶采用高錳酸鉀滴定法測定，以每1g土壤消耗的0.02mol/L的高錳酸鉀的mg數(shù)表示[9]。

1.3土壤總基因組DNA的提取和熒光定量PCR

每個樣品取0.4g土樣提取DNA，采用OMEGA公司的SoilDNA Kit進行土壤全基因組提取，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳測定DNA完整性、Nanodrop測定DNA純度和濃度，以-20℃保存、備用。

熒光定量PCR（quantitative polymerase chain reaction，Q-PCR）采用Takara熒光定量試劑盒（SYBR?Prem ix Ex TaqTM II,Takara,Dalian,China）進行PCR擴增。以提取總DNA為模板，采用細菌特異引物338F/518R擴增16S rRNA，PCR擴增體系和程序參照參考文獻[10]。最后利用7500 system SDS software軟件構(gòu)建標準曲線及對熒光定量數(shù)據(jù)進行分析。

1.4土壤樣本的高通量測序

1.4.1PCR擴增

將稀釋后的基因組DNA作為PCR模板，采用細菌特異引物341F/805R擴增16S rRNA-V4區(qū)，同時在上游引物的5'端添加帶6個堿基長度Barcode序列區(qū)分樣品。細菌擴增程序為95℃預(yù)變性2m in，95℃變性15 s，55℃退火15 s，72℃延伸30 s，30個循環(huán)后，72℃終延伸10m in，保持4℃直到反應(yīng)完成。每個樣品做3個重復(fù)，將同一樣品的PCR產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，再根據(jù)PCR擴增產(chǎn)物的濃度進行等濃度混樣，最后使用GeneJET膠回收試劑盒（Thermo Scientific公司）回收產(chǎn)物。

1.4.2文庫構(gòu)建和上機測序

使用NEB Next?UltraTM DNA Library Prep Kit (New England Biolabs公司)建庫試劑盒進行文庫的構(gòu)建，文庫構(gòu)建好后經(jīng)過Qubit定量和文庫檢測，其結(jié)果合格后使用M iSeq 2500測序平臺（諾禾致源，北京）進行上機測序。

1.5數(shù)據(jù)分析

根據(jù)Barcode序列和PCR擴增引物序列從下機數(shù)據(jù)中拆分出各樣品數(shù)據(jù)后使用FLASH軟件對每個樣品的reads進行拼接，得到高通量測序原始數(shù)據(jù)（Raw Tags）。進一步去除嵌合體、兩端引物以及非靶區(qū)域序列后得到有效數(shù)據(jù)（Effective Tags）。再利用Uparse軟件對有效數(shù)據(jù)以97%的一致性進行OTU聚類，并利用Greengene數(shù)據(jù)庫進行物種注釋。然后根據(jù)OTU使用Qiime軟件計算Observed-species，Chao1，Shannon，Simpson，ACE，Goods-coverage指數(shù)，使用R軟件（Version 2.15.3）繪制稀釋曲線，Rank abundance曲線，物種累積曲線并使用R包進行Alpha多樣性和Beta多樣性分析。然后用SPSS 18.0軟件對細菌群落結(jié)構(gòu)與土壤養(yǎng)分及酶活進行Pearson相關(guān)性分析。最后利用Canoco軟件進行冗余分析（Redundancy analysis，RDA）。在進行RDA分析之前，先進行降趨對應(yīng)分析(DCA)，當(dāng)DCA分析結(jié)果中排序軸梯度最大值小于3時選擇RDA分析,從而對細菌群落相對豐度和土壤養(yǎng)分及酶活的關(guān)系進行進一步分析。

2　結(jié)果與分析

2.1葡萄園土壤理化性質(zhì)及酶活（表1、表2）

表1　供試土壤的理化性質(zhì)情況

土壤pH值、有機質(zhì)、總氮、總磷和有效磷是土壤質(zhì)量狀況的重要指標。由表1可知，葡萄園3個根際土壤pH值處在7.96～7.98之間，屬于弱堿性土壤；根際土壤的有機質(zhì)處在6.66～22.36g/kg之間；根際土壤總氮（處在0.57～1.47mg/kg之間）明顯高于非根際土(0.38mg/kg)；根際總磷（處在0.43～0.56g/kg之間）高于非根際土(0.34g/kg)；根際土有效磷（處在19.38～26.09mg/kg之間）明顯高于非根際土（9.66mg/kg）。

蔗糖酶、淀粉酶、脲酶和磷酸酶是土壤中的幾種主要水解酶類。從表2可知，根際土壤酶活與非根際酶活性存在一定差異。其中葡萄園根際土壤淀粉酶活明顯高于非根際土壤，而過氧化氫酶活和脲酶酶活低于非根際土壤。

表2　供試土壤的酶活

2.2RT-PCR定量分析葡萄園土壤微生物群落大小

用RT-PCR技術(shù)對細菌16S rRNA基因拷貝數(shù)進行定量分析，16S rRNA基因擴增的標準曲線的斜率分別為-3.33，R2值為0.997，擴增效率分別為99.50%，基因拷貝數(shù)見圖1。根際土壤細菌16S rRNA基因的拷貝數(shù)在1.38×108～1.17×109copies/g之間，高于非根際土壤。

圖1　葡萄園細菌16S rRNA基因拷貝數(shù)

2.3高通量測序分析葡萄園土壤細菌群落結(jié)構(gòu)

2.3.1葡萄園土壤細菌測序序列及α多樣性分析

通過對供試土壤宏基因組進行16S rRNA V4區(qū)高通量測序，共獲得213382條原始序列，207327有效序列。根據(jù)97%水平下OTU的豐度，對有效序列利用QIIME軟件處理操作分類單元，獲得10935個OTUs分類，每個土壤樣品的序列數(shù)及OTU數(shù)見表3。使用Rarefaction curve對樣品進行評估，稀釋曲線趨于飽和，證明此次測序的深度是合理的，繼續(xù)測序不會再產(chǎn)生較多新的OTU（圖2）。另外，表3也列出了依據(jù)OUT的根際土壤和非根際土壤α多樣性指數(shù)。從Shannon指數(shù)及Simpson指數(shù)來看，根際土細菌群落的α多樣性低于非根際土壤。

表3　葡萄園土壤測序序列和α多樣性分析

圖2　土壤樣品稀釋性曲線

2.3.2葡萄園土壤細菌落組成及豐度

從門的分類水平看（圖3a），葡萄園土壤的優(yōu)勢細菌類群為變形菌門（Protecbacteria），所占比例為33.42%～41.26%，其次為放線菌門（Actinbacteria），占16.07%～31.05%，其他的優(yōu)勢微生物有酸桿菌門（Acidobacteria）（占6.27%～12.28%），厚壁菌門（Firm icute）（占3.00%～9.18%）,綠彎菌門（Chloroflexi）（占5.24%～8.88%），藍藻門（Cyanobacteria）（占0.48%～4.53%）；擬桿菌門（Bacteroidetes）（占1.53%～3.15%），芽單胞菌門（Gemmatimonadete）（占1.68%～2.74%），硝化螺旋菌門（Nitrospirae）（占1.26%～2.19%）。同時還檢測到古菌中的泉古菌門（Crenarchoeota），占1%～4%，廣古菌門（Euryarchaeota），占0.2%～0.8%。其中根際土變形菌門、厚壁菌門，藍藻門，擬桿菌門的相對豐度明顯低于非根際土壤，根際土放線菌門，泉古菌門，綠彎菌門，芽單胞菌門的相對豐度明顯高于非根際土壤。

進一步從屬的角度分析發(fā)現(xiàn)（圖3b），根際土壤和非根際土壤分別鑒定出259個和276個細菌屬。主要優(yōu)勢細菌屬（排名前10屬）包括乳球菌屬（Lactococcus），節(jié)細菌屬（Arthrobacter），Candidatus Nitrososphaera，亞硝化螺菌屬（Nitrososphaera），熱單胞菌屬（Thermomonas），Phycicoccus，泛菌屬（Pantoea），芽孢桿菌屬（Bacillus），埃希氏桿菌屬（Escherichia），鞘脂單胞菌屬（Sphingomonas），和溶桿菌屬（Lysobacter）。其中根際土壤中節(jié)細菌屬，泛菌屬，芽孢桿菌屬，鞘脂單胞菌屬豐度明顯低于非根際土壤，而根際土壤中Candidatus Nitrososphaera豐度明顯高于非根際土壤。另外，對比根際和非根際土壤細菌屬可以發(fā)現(xiàn)，葡萄園根際和非根際土壤中各含有一些特有的低豐度細菌屬（表4）。其中根際特有屬4個，比如Sphingobium某些屬具有降解苯酚，異丙隆等功能，Desulfosporosinus廣泛參與硫還原過程；非根際特有屬18個，并各自具有一些特殊生物學(xué)功能。

2.3.3葡萄園土壤細菌群落聚類分析和PCoA分析

根據(jù)各土壤樣品的OTU聚類及其豐度，使用Unifrac距離的Unweighted算法對樣品進行了聚類分析（圖4a）和PCoA分析（圖4b）。由UPGMA聚類樹可以看出，根際土3個不同位點的樣品聚在同一個分支，非根際土壤樣品單獨在一個分支，表明同一葡萄園不同位點的根際土壤細菌群落結(jié)構(gòu)較為相似，不同于非根際土壤。由PCoA可以看出，第一軸得分63.44%，第二軸得分29.20%，兩軸之和超過了80%，與非根際土壤相比，根際土壤3個不同位點位置相對集中，說明不同位點的根際土壤細菌群落結(jié)構(gòu)更為相近。總的來說，聚類分析和PcoA分析結(jié)果一致，均表明根際土壤與非根際土壤細菌群落結(jié)構(gòu)有所差異。

2.4葡萄園土壤細菌群落結(jié)構(gòu)和土壤養(yǎng)分及酶活相關(guān)性分析

圖3　葡萄園土壤細菌群落結(jié)構(gòu)相對豐度

表4　葡萄園根際土壤和非根際土壤細菌差異屬比較分析

圖4　葡萄園土壤基于Unweighted Unifrac距離的β多樣性分析

圖5　葡萄園土壤因子與細菌群落多樣性間RDA分析

運用Canoco4.5軟件，將細菌群落結(jié)構(gòu)的相對豐度分別和土壤養(yǎng)分及酶活進行RDA排序（圖5）。前兩個軸得分分別為79.6%和17.8%，兩者之和接近于100%，這說明本研究選擇的土壤養(yǎng)分和酶活能較好地解釋葡萄園土壤細菌群落，而且各細菌類群與各因子間的相關(guān)系數(shù)較高。結(jié)果顯示，參與RDA分析的各因子在根際和非根際土壤細菌群落組成之間所起的作用是不同的。其中土壤放線菌門、綠彎菌門、芽單胞菌門和泉古菌門與葡萄園土壤的pH值、有機質(zhì)、有效磷含量、淀粉酶和蔗糖酶呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，變形菌門、厚壁菌門和藍藻門與葡萄園土壤水分、脲酶和磷酸酶呈較好的正相關(guān)關(guān)系。另外，土壤水分與pH值及脲酶酶活呈顯著的負相關(guān)關(guān)系（p＜0.05）,有效磷與淀粉酶呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（p＜0.01）。

3　討論

3.1葡萄園土壤養(yǎng)分及酶活評價

葡萄植株生長需要從土壤中吸收養(yǎng)分，土壤養(yǎng)分作為根際微生態(tài)系統(tǒng)中的重要因素之一，其含量對葡萄植株生長產(chǎn)生重要影響。葡萄最適宜的土壤pH6.5～7.5，本文選取的幾個樣點pH7.90～7.95之間，與最適pH值比較接近。另外，該葡萄園根際土平均含水量為9.67%，有機質(zhì)為14.51g/kg，達到果園土壤養(yǎng)分肥力指標有機質(zhì)的三級水平；總氮含量為1.01mg/kg，僅為果園土壤養(yǎng)分肥力指標四級水平，總體含量偏低；總磷和有效磷含量分別為0.48g/kg和21.71mg/kg，達到果園土壤養(yǎng)分肥力指標有效磷一級水平[11]。總體來看，該葡萄園根際土壤有機質(zhì)、總氮含量偏低，有效磷含量較高，因此該葡萄園應(yīng)調(diào)整施肥措施，提高土壤中有機質(zhì)和氮的含量，更好地促進葡萄植株生長。

土壤酶活在一定程度上也能表征土壤的質(zhì)量，一般認為，土壤酶活性是生物與非生物活性的總和，不僅受土壤微生物的影響，還受環(huán)境等非生物因素的影響[12]。本文中葡萄園根際土壤各酶活性各異，其中不同位點的葡萄園根際土壤的脲酶和過氧化氫酶活比較接近，這說明空間位置對這兩種酶活影響不大，但對另外幾種酶影響較大。另外，根際土的淀粉酶活明顯高于非根際土，根際土的磷酸酶活明顯低于非根際土壤，這表明淀粉酶活與酸酶活可能對根際效應(yīng)比較敏感，受根系分泌物的影響可能比較大。由此看出，盡管是同一葡萄園土壤，土壤酶活對根際土不同空間位點以及非根際土壤做出了不同的表現(xiàn)，這進一步說明土壤酶活受多種因素的影響。

3.2葡萄園根際土壤和非根際土壤細菌群落結(jié)構(gòu)

本研究通過對16S rDNA-V4區(qū)進行高通量測序，分析了該葡萄園根際土和非根際土細菌的群落結(jié)構(gòu)。在97%的相似度水平上，將獲得的OUT分別從門到屬的水平上進行物種注釋，歸類為42個門，130綱，213個目，249個科，295個屬。分析表明，葡萄園土壤的優(yōu)勢細菌類群為變形菌門，其次為放線菌門和酸桿菌門，其他的優(yōu)勢菌群包括厚壁菌門、綠彎菌門、藍藻門、擬桿菌門、芽單胞菌門等，這與Kayla N.Burns等[3]對不同區(qū)域葡萄園細菌群落結(jié)構(gòu)研究結(jié)果類似。另外，從門的分類水平來看，該葡萄園根際土壤和非根際的細菌群落組成相似，最豐富的3個優(yōu)勢種群均為變形菌門，放線菌門和酸桿菌門，其中變形菌門的豐度最高，其次是放線菌門，這與韓亞飛等[4]對楊樹根際和非根際土壤細菌多樣性研究相一致。這表明土壤根際細菌群落多樣性雖然受根際效應(yīng)的影響，但在門分類水平上差異并不是很大。

從屬的分類水平看，根際和非根際細菌群落的種類和數(shù)量均具有一定差異，由α多樣性指數(shù)顯示，根際土壤細菌豐度低于非根際土壤細菌群落豐度，這與韓亞飛等[4]對連作楊樹根際和非根際細菌豐度結(jié)果相一致，但與汪其同等[1]對楊樹根際和非根際的細菌群落結(jié)構(gòu)多樣性結(jié)果相反，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)根際土壤細菌豐度高于非根際土壤細菌群落豐度。在所有檢測到的土壤細菌屬中，相對豐度大于2%的有5個，包括乳球菌屬（Lactococcus），節(jié)細菌屬（Arthrobacter），Candidatus Nitrososphaera，熱單胞菌屬（Thermomonas）和Phycicoccus。此外，在根際和非根際還有一些相對豐度較高但豐度差別較大的屬，其中根際對非根際顯著下調(diào)的屬包括節(jié)細菌屬，泛菌屬，芽孢桿菌屬，鞘脂單胞菌屬等。在非根際土壤中存在一些特有的降解幾丁質(zhì)，產(chǎn)丁酸等的相對豐度較低的細菌屬。汪其同等[1]認為，根際和非根際微生物的群落的趨異化發(fā)展，其原因最初歸結(jié)于根系分泌。細菌群落結(jié)構(gòu)的演變可能與葡萄根系的分泌物有一定關(guān)系，但鑒于葡萄根際微生物組成非常復(fù)雜，影響因素眾多，需進一步加大樣本量，充分的利用高通量測序技術(shù)，更為全面解析根際土壤與非根際土壤理化性質(zhì)差異，以期對葡萄根際理化性質(zhì)、微生物群落結(jié)構(gòu)有一個更全面和更深度的認識。

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Analysisof BacterialCommunity Structure in Vineyard Soilby RT-PCR and High Throughput Sequencing

WANG Xiaowen,HONG Zhenhan,LIUAnruiand LUO Lixin
（Schoolof Biosciencesand Bioengineering,South China University of Technology,Guangzhouguangdong 510006,China）

Soilbacteria have importantecological functionsand play a very important role in vineyard ecological system.In this study,we performed quantitative PCR(Q-PCR)and Illum ina M iseq high-throughputsequencing to compare the basic physiochem ical parameters,enzymatic activities and bacterialgroupsbetween the rhizosphere and non-rhizosphere soil from a vineyard from Zhenyuan,Guizhou.Q-PCR results indicated that,the bacterial16S rRNAgene copy numbers in the rhizosphere soils ranged from 1.38×108to 1.17×109copies/g,higher than that in non-rhizosphere soil.Illum ina M iseq high-throughput sequencing results indicated that,the bacterial communities in rhizosphere vineyard soil mainly included Protecbacteria,Actinbacteria,Acidobacteria,Firm icute,Chloroflexi,Cyanobacteria,Crenarchoeo,Bacteroidetes,Gemmatimonadete,and Nitrospirae,among them,the dom inant bacterial taxa members were Proteobacteria and Actinobacteria which accounted for 53.33%～67.28%of total abundance.Atgenus level,Lactococcus,Arthrobacter,Candidatus Nitrososphaera,Nitrososphaera,Thermomonas, Phycicoccus,Pantoea,Bacillus,Escherichia,Sphingomonas,Lysobacter were the dominantbacteriagenera in rhizosphere vineyard soil.α-diversity analysis showed that,the bacterial community diversity of rhizosphere soilwas sim ilar in different site butwere lower than thatof the non-rhizosphere soil.Redundancy analysis showed that,therewere certain correlations between bacterial communities and nutrients and enzymeactivity in vineyard soil..

vineyard soil;rhizosphere soil;bacterialdiversity;high throughputsequencing;quantitative PCR(Q-PCR)

TS262.6；Q93-3；TS261.1；TS261.2

A

1001-9286（2016）11-0028-06

10.13746/j.njkj.2016279

華南理工大學(xué)“學(xué)生研究計劃”（SRP）項目（105612015S533）。

2016-09-14

王曉雯，女，河南駐馬店人，在讀碩士研究生，研究方向為食品微生物發(fā)酵。

羅立新，男，廣東興寧人，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：工業(yè)微生物學(xué)，發(fā)酵工程，微生物分子生態(tài)學(xué)，E-mail：btlxluo@scut.edu.cn。

優(yōu)先數(shù)字出版時間：2016-10-12；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20161012.1505.016.htm l。