蒲妍君, 袁 靜, 龐軍玲, 韓方普, 趙 軍*

1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所, 北京 100081;2.中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所, 北京 100101

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玉米轉(zhuǎn)錄因子ABP9基因的 BAC克隆鑒定及染色體定位

蒲妍君1, 袁 靜2, 龐軍玲1, 韓方普2, 趙 軍1*

1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所, 北京 100081;2.中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所, 北京 100101

為得到玉米轉(zhuǎn)錄因子ABP9的準(zhǔn)確基因組序列及其旁側(cè)基因組序列，應(yīng)用PCR法對玉米自交系齊319 BAC文庫中含有ABP9基因的單克隆進行篩選，得到了19個一級陽性混池，從中選擇BAC-103、BAC-159進一步篩選獲得了4個陽性單克隆。以其中1個陽性單克隆BAC-103-C3為模板進行全序列測定，比對分析后將ABP9基因初定位于玉米自交系Mo17基因組的3號染色體上。另以玉米自交系齊319、自交系Mo17萌發(fā)種子的根尖染色體滴片為材料，以綠色熒光標(biāo)記的ABP9基因ORF區(qū)質(zhì)粒DNA為探針進行熒光原位雜交，確認在這2個自交系中ABP9基因定位于3號染色體上。ABP9基因組序列的獲得及其染色體定位為該基因分子標(biāo)記的開發(fā)及應(yīng)用于分子育種奠定了基礎(chǔ)。

ABP9基因；BAC文庫；染色體定位；熒光原位雜交；分子育種

玉米集食用、飼用、藥用及工業(yè)用于一身，已成為全球產(chǎn)量最大的糧食作物[1]。然而，干旱、高溫、高鹽、低溫等非生物逆境依然是制約玉米生長發(fā)育和產(chǎn)量的重要因素。因此，鑒定優(yōu)良的抗逆境基因并通過先進的育種方法來提高玉米對非生物逆境的耐受性，對保證玉米在逆境下的穩(wěn)產(chǎn)具有重要意義。

ABP9(ABRE binding protein 9)是通過酵母單雜交的方法，以活性氧清除基因Cat1(Catalase1)啟動子的順式元件ABRE2為目標(biāo)序列，從玉米自交系齊319授粉后17 d的幼胚cDNA文庫中篩選得到的能夠與ABRE2結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子[2]。研究表明，ABP9基因的表達受ABA、干旱、H2O2和高鹽脅迫等非生物逆境的誘導(dǎo)；ABP9 cDNA過表達轉(zhuǎn)基因擬南芥能大幅度提高植株對干旱、低溫、高鹽等多種非生物逆境的耐受性，在逆境下，轉(zhuǎn)ABP9擬南芥能提高植株的光合能力，具有更強的ROS清除能力，且表現(xiàn)出ABA響應(yīng)和氣孔關(guān)閉響應(yīng)的高敏感性[3,4]。這些結(jié)果說明ABP9基因在植物抗逆過程中發(fā)揮了重要的作用，因此，ABP9基因進一步研究的一個重要方向是開發(fā)分子標(biāo)記并將該基因應(yīng)用于玉米抗逆育種。本實驗室前期通過PCR獲得了ABP9的基因序列共1 544 bp，含有4個外顯子和3個內(nèi)含子，其中CDS為1 158 bp，共編碼385個氨基酸。據(jù)此DNA序列，通過PCR步移法克隆了ABP9基因起始ATG上游2 006 bp的啟動子序列。另外還通過PCR法克隆了ABP9基因從啟動子至3’UTR共3 812 bp的序列(序列未發(fā)表)[5]。目前，玉米自交系齊319的基因組序列尚未測得， B73系玉米基因組序列雖已測序完成，但以已知的ABP9基因序列與B73基因組序列比對時，并未發(fā)現(xiàn)ABP9基因，故ABP9基因完整準(zhǔn)確的基因組序列、在基因組中的拷貝數(shù)及其在染色體上的定位情況均不清楚，這在一定程度上也限制了ABP9基因分子標(biāo)記的開發(fā)。

細菌人工染色體(bacterical artificial chromosome, BAC)是由Shizuya等[6]于1992年提出的用以分析和繪制復(fù)雜基因組的細菌克隆系統(tǒng)。BAC文庫具有DNA嵌合現(xiàn)象少、轉(zhuǎn)化率高、插入片段大且穩(wěn)定等優(yōu)點，這使得其在玉米[7]、水稻[8]、小麥[9]、馬鈴薯[10]、高粱[11]、 牛[12]和人類[13]等多種動植物復(fù)雜基因組及基因的結(jié)構(gòu)和功能的研究上發(fā)揮了重要的作用。如在染色體定位方面，覃瑞等[14]以與栽培稻抗稻癭蚊基因Gm-6和Gm-2連鎖的RFLP標(biāo)記(RG214和RZ569)在水稻基因組BAC文庫中篩選到了兩個BAC單克隆，并以這兩個BAC單克隆制備探針通過熒光原位雜交將它們定位于藥用野生稻的4號染色體長臂上；在基因克隆方面，Aert等[15]通過對香蕉基因組BAC文庫進行分級篩選和測序獲得了一個長為82 723 bp的單克隆，并成功克隆了MuH9基因；另外，在轉(zhuǎn)基因研究方面，Arrtoch等[16]采用BAC克隆大片段的轉(zhuǎn)基因技術(shù)完成了小鼠生物鐘基因的克隆及其功能的分析。這些研究結(jié)果說明，BAC文庫不僅可以用來篩選目的基因及獲得目的基因的DNA序列，還可用來研究目的基因的結(jié)構(gòu)、功能并對該基因進行染色體定位。

本研究擬對已構(gòu)建好的玉米自交系齊319的BAC文庫進行篩選，獲得含有ABP9的BAC單克隆；通過測序獲得該BAC的序列；并通過與已測序的玉米基因組序列進行比對以及與玉米根尖染色體進行熒光原位雜交(FISH)的方法來對ABP9基因進行染色體定位,以期獲得ABP9基因完整且準(zhǔn)確的基因組序列，并為進一步分析ABP9基因在不同自交系中的基因序列的變異、分子標(biāo)記的開發(fā)和優(yōu)異等位基因的鑒定奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 BAC文庫 BAC文庫的構(gòu)建以野生型玉米自交系齊319的幼嫩葉片為材料，提取其基因組DNA，進而用限制性內(nèi)切酶HindⅢ進行酶切消化，通過脈沖場電泳選擇大小為100～400 kb的片段克隆到多克隆酶切位點兩側(cè)為I-SceⅠ的pIndigoBAC536載體上，最后轉(zhuǎn)化到DH10B-T宿主細胞中擴增，保存于295塊384孔板中。經(jīng)檢測，該文庫克隆總數(shù)為113 280個，插入片段平均大小為125 kb，基因組覆蓋率為5.7倍，空載率為1.65%。該文庫由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)羅美中實驗室構(gòu)建，一共有3個拷貝，本文所用為第2個拷貝。

1.2 方法

1.2.1 含ABP9基因BAC單克隆的篩選及鑒定 將保存于295塊384孔板中的單克隆菌液用96孔微孔板復(fù)制器(購自上海桂寧實驗器材有限公司)分別接種于含有12.5 μL/mL氯霉素(購于MYM生物技術(shù)有限公司)和1‰誘導(dǎo)液(copy control BAC auto induction solution, 購于北京中北林格科技發(fā)展有限公司)的LB固體培養(yǎng)基上(1% 胰蛋白胨, 0.5%酵母提取物, 1% NaCl, pH 7.0，1.5%瓊脂，購于北京博文通生物有限公司)，37℃倒置培養(yǎng)20 h至全部接種點長出菌斑(未長斑的接種點單獨接種)。將固體培養(yǎng)基上的菌斑刮下并轉(zhuǎn)接于250 mL(含有12.5 μL/mL氯霉素和1‰誘導(dǎo)液)LB液體培養(yǎng)基中，37℃，200 r/min培養(yǎng)16 h。SDS堿裂解法[17]大量提取這295塊384孔板的混池質(zhì)粒DNA。PCR法鑒定混池質(zhì)粒DNA的提取效果，引物以克隆載體pIndigoBAC536氯霉素抗性基因的序列為模板進行設(shè)計(CAT-FW：5’-TCACTGGATATACCACCG-3’；CAT-RV：5’-ATTCAGGCGTAGCACCAG-3’, 由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)作物基因資源與基因改良國家重大科學(xué)工程測序合成部合成)。

以ABP9基因的啟動子區(qū)及編碼區(qū)為模板設(shè)計引物，命名為ABP9-minus-pro245-Fw：5’-CGCTAGAGCCGATCAGTC-3’，ABP9-330-Rv：5’-ATTCGCCACGGGCATCATCG-3’，產(chǎn)物長度為569 bp；以及ABP9-promoter-1022-Fw：5’-AAGCAAGCAACACTATCA-3’，ABP9-330-Rv：5’-ATTCGCCACGGGCATCATCG-3’，產(chǎn)物長度為1 364 bp。分別用這兩對引物進行PCR法分級篩選含有ABP9基因的單克?。阂粔K384孔板所有單克隆(即24列、16行共384個單克隆)稱為一級陽性混池；將篩選到的一級陽性混池均分成4個(即每6列、16行共96個單克隆為1個二級混池)二級混池；將篩選到的二級陽性混池均分成6個(即每1列、16行共16個單克隆為1個三級混池)三級混池；將篩選到的三級陽性混池單個接種(即16個單池)即為四級池，PCR篩選到的陽性單池即為可能的陽性單克隆。PCR體系：PCR mix(TianGen) 10 μL，質(zhì)粒DNA 50 ng，上下游引物(10 μmol/L)各1 μL，無菌水補足到20 μL。 PCR程序：95℃ 5 min；95℃ 30 s，59℃ 45 s，72℃ 90 s，30次循環(huán); 72℃ 10 min。

對篩選到的陽性單克隆再次接種、提取質(zhì)粒，分別用上述篩選用的兩對引物進行PCR鑒定及陽性條帶全部回收測序鑒定(瓊脂糖凝膠DNA快速純化回收試劑盒，購于北京原平皓生物技術(shù)有限公司)。

1.2.2 陽性單克隆全長序列測定及比對 選擇其中一個陽性單克隆送到北京博艾永華生物技術(shù)有限公司測序，根據(jù)小片段重疊區(qū)域法進行拼接，用拼接所得的全長序列與玉米自交系B73和Mo17基因組序列進行比對，分析該基因的結(jié)構(gòu)及其在染色體上的位置。

1.2.3 BAC單克隆中ABP9基因拷貝數(shù)的Southern Blotting驗證 將篩選得到的陽性單克隆用Southern Blotting驗證其ABP9基因的拷貝數(shù)。以已測序的ABP9基因序列為模板設(shè)計引物并制備探針，引物序列為ABP9-910-FW：5’-CGGCGGATGATCAAGAAC-3’，ABP9-1426-RV：5’-GACG-AAAACACAGAGCTTTGTG-3’，探針總長度為517 bp，涵蓋ABP9基因編碼區(qū)3’端至3’UTR區(qū)。探針合成試劑盒為PCR DIG Probe Synthesis Kit(購于Roche公司)。Southern Blotting的具體操作方法參考Southern[18]的步驟，顯影由化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)Tanon 5200完成(北京原平皓生物技術(shù)有限公司)。

1.2.4 熒光原位雜交(FISH)定位 以玉米自交系齊319和Mo17的萌發(fā)種子為材料，取其根尖制備染色體滴片[19]。用于雜交的4個探針分別是：Coumarin-5-dUTP標(biāo)記的Knob-red(呈紅色熒光):用以標(biāo)記有突起的染色體；Texas red-5-dUTP標(biāo)記的CentC(centromeric satellite C)-red(呈紅色熒光)：標(biāo)記有著絲粒微衛(wèi)星的染色體；Fluorescein-12-dUTP 標(biāo)記的Cent4(centromeric satellite 4)-green(呈綠色熒光)：標(biāo)記有著絲粒微衛(wèi)星的4號染色體；Green fluorescence 標(biāo)記的ABP9(ABP9基因ORF區(qū)的克隆質(zhì)粒)-green(呈綠色熒光)：標(biāo)記含有ABP9基因的染色體。探針的標(biāo)記方法為缺口平移法，制備方法參考Kato[20]的步驟。FISH實驗流程參考Kato[21]的步驟。FISH呈像軟件為奧林巴斯BX61熒光顯微鏡(配有冷卻電荷耦合器件相機和MetaMorph 操作軟件)，圖像處理軟件為Photoshop CS 6.0, 圖像處理步驟參考Han[20]的方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 含ABP9基因BAC單克隆的篩選及鑒定

用PCR法對BAC文庫295個384孔板的一級混池質(zhì)粒DNA進行鑒定(引物為CAT-FW，CAT-RV)，結(jié)果顯示，295個一級混池的質(zhì)粒提取質(zhì)量良好，可用于下一步篩選。分別用ABP9-minus-pro245-Fw和ABP9-330-Rv、ABP9-promoter-1022-Fw和ABP9-330-Rv這兩對引物對這295個一級混池的質(zhì)粒進行PCR篩選，得到如下19個一級陽性混池質(zhì)粒：BAC-29、56、57、65、66、72、73、74、78、79、80、81、82、83、88、90、103、159、267，用以上兩對引物進行測序，測序結(jié)果正確。

由于BAC文庫的基因組覆蓋率為5.7，可能存在較多相同的單克隆。故挑選PCR電泳條帶最亮的兩個一級陽性混池BAC-103、BAC-159篩選陽性單克隆。依然用前述兩對引物進行PCR法分級篩選，最后得到4個含有ABP9基因的陽性單克隆，分別是：BAC-103-C3、BAC-103-L5、BAC-159-D1、BAC-159-E1，用以上兩對引物進行測序，測序結(jié)果顯示與已知ABP9序列完全一致。

2.2 陽性單克隆全序列測定及比對

選擇陽性單克隆BAC-103-C3送到北京博艾永華生物技術(shù)有限公司測序。將測得的小片段通過重疊區(qū)域法拼接和組裝，獲得了該單克隆全長序列為162 479bp。與已知的ABP9基因序列進行比對，結(jié)果顯示ABP9基因序列能100%比對到該單克隆全長序列的133 712～137 523bp區(qū)域。經(jīng)Genescan預(yù)測(圖1)，該BAC單克隆可能含有29個基因，如圖1和圖2(彩圖見圖版二)所示，ABP9基因與預(yù)測的基因25一致，含有4個外顯子，轉(zhuǎn)錄方向與該單克隆的序列相反。由于此BAC單克隆來源于基因組序列未知的玉米自交系齊319，故無法得知其他28個基因的功能。另外，將此BAC單克隆與B73系玉米基因組進行比對，結(jié)果證實該BAC單克隆在B73系玉米基因組中沒有完全相同的基因，僅與239個基因序列有部分同源區(qū)段，其中有43個基因為已知功能的基因，包括與植物抗逆(GRMZM2G076484)、細胞周期調(diào)控(GRMZM2G171022)、運輸?shù)鞍?GRMZM2G179459)以及信號傳遞(GRMZM2G-042034)等相關(guān)的基因。

圖1 BAC-103-C3序列中預(yù)測的基因Fig.1 Predict genes in BAC-103-C3 sequences.注：A:BAC-103-C3基因預(yù)測結(jié)果,1～29為預(yù)測基因; B:預(yù)測基因25與ABP9。實心條表示基因的外顯子，基因兩端的線條表示基因的首末，箭頭指向表示基因的轉(zhuǎn)錄方向。

將此BAC-103-C3序列和玉米自交系Mo17的3號染色體序列(未發(fā)表數(shù)據(jù))進行比對，結(jié)果如圖2所示：兩個序列之間有較大區(qū)域一致，但是其中也存在很多倒位、異位和缺失等情況，這可能是由于不同玉米品種間基因組序列在該染色體區(qū)段發(fā)生了變異導(dǎo)致的。兩個序列在ABP9基因及其旁側(cè)完全一致，其中ABP9基因序列比對到Mo17的3號染色體的157 069 279～157 070 822 bp

區(qū)域，序列相似性為100%，因此將ABP9基因定位在玉米基因組的3號染色體上。

2.3 BAC單克隆中ABP9基因拷貝數(shù)的Southern Blotting驗證

用限制性內(nèi)切酶HindⅢ消化篩選得到的4個陽性單克隆，以已測序的BAC-103-C3為陽性對照，ABP9基因位于該單克隆序列HindⅢ切下的5 001 bp(133 131～138 131 bp)區(qū)域內(nèi)。Southern Blotting的驗證結(jié)果如圖3，這4個陽性單克隆均在5kb附近的位置有一條雜交帶，說明均含有ABP9基因。另外，在BAC-103-L5、BAC-159-D1兩個單克隆中多出一條信號較弱的雜交帶，這暗示齊319系玉米基因組中可能存在兩個ABP9基

圖3 BAC單克隆中ABP9基因拷貝數(shù)的Southern Blotting驗證Fig.3 Southern Blotting validation the copy number of ABP9 gene in BAC.

因拷貝或與ABP9基因同源的序列。

2.4 FISH染色體定位

熒光原位雜交的結(jié)果如圖4(彩圖見圖版二)所示。如圖4-A、B分別用ABP9-green、Knob-red、Cent4-green 3種探針與玉米自交系齊319的根尖染色體進行雜交，ABP9-green在其中兩條染色體上獲得了單一較亮的信號(箭頭指示的綠色熒光)；Knob-red(紅色熒光)在有突起的染色體以及

圖4 熒光原位雜交結(jié)果Fig.4 Fluorescence in situ hybridization results.A、B：材料為齊319；C、D：材料為Mo17；ABP9-green、Cent4-green、Knob-red、CentC-red為不同熒光的探針；箭頭指向ABP-green探針與齊319的雜交信號。(彩圖見圖版二)

Cent4-green(無箭頭指示的綠色熒光)在有著絲粒4號染色體上均顯示非常強的信號。如圖5-A、B(彩圖見圖版二)通過染色體核型分析來對ABP9基因進行染色體定位[21]。以Mo17系玉米染色體為參考核型(圖5-C)，ABP9探針在一對染色體上獲得了較亮的信號，而且這對染色體無Knob信號，說明ABP9不在有突起的2、5、7、8、9號染色體上(圖5-A)；這對染色體沒有Cent4信號，說明ABP9不在4號染色體上，這對染色體較長，說明ABP9不在1、2、8、9、10號染色體上(圖5-B)；這對染色體沒有隨體，說明ABP9不在6號染色體上。

如圖4-C、D，分別用ABP9-green、Cent4-green、CentC-red、Knob-red 4種探針與玉米自交系Mo17的根尖染色體進行雜交。ABP9-green能在兩條染色體上獲得較亮的信號(箭頭指示的綠色熒光)，但在其他染色體上也有較為微弱的信號；Cent4-green(無箭頭指示的綠色熒光)在4號染色體著絲粒上、Knob-red(紅色熒光)在有突起的染色體上、CentC-red(紅色熒光)在有著絲粒的染色體上均顯示出非常強的信號。如圖5-D、E染色體核型分析結(jié)果顯示，ABP9探針也在其中1對染色體上獲得了較亮的信號，而且這對染色體無Knob信號，說明ABP9不在有突起的2、8號染色體上，這對染色體沒有Cent4信號，說明ABP9不在4號染色體上(圖5-D)；這對染色體上無CentC信號，說明ABP9不在有著絲粒的1、7、8、9、10號染色體上(圖5-E)；這對染色體不是等臂染色體，說明ABP9不在5號染色體上；這對染色體沒有隨體，說明ABP9不在6號染色體上。綜上所述，可以確認ABP9基因位于齊319系和Mo17系玉米的3號染色體上。

圖5 核型分析圖Fig.5 Karyotype analysis.A、B：齊319染色體核型分析；C：Mo17染色體參考核型；D、E： Mo17染色體核型分析。箭頭指向ABP-green探針與齊319的雜交信號。(彩圖見圖版二)

3 討論

本研究根據(jù)本實驗室前期獲得的ABP9基因序列設(shè)計引物，通過對玉米自交系齊319 BAC文庫的PCR分級篩選，一共篩選到了4個含有ABP9基因的單克隆：BAC-103-C3、BAC-103-L5、BAC-159-D1、BAC-159-E1。以其中一個單克隆BAC-103-C3為模板進行全序列測定得到了ABP9基因完整準(zhǔn)確的基因組序列及其旁側(cè)基因組序列。生物的表型受其自身內(nèi)在遺傳因素和外界環(huán)境條件的共同作用，而相關(guān)基因單個或數(shù)個堿基的變化是內(nèi)在遺傳差異導(dǎo)致生物體不同表型最根本的原因。陳吉寶等[22]以23份不同抗旱性的小麥為材料共篩選到TaDREB1基因序列的271個SNP，平均每140 bp就有一個SNP，單倍型分析揭示該基因的SNP與抗旱性表型具有相關(guān)性。ABP9基因組序列的獲得同樣對于分析該基因在其他玉米自交系中的SNP或序列變異提供了參考，同時也為該基因分子標(biāo)記的開發(fā)及鑒定優(yōu)異等位基因并應(yīng)用于抗逆分子育種奠定了研究基礎(chǔ)。

本文用所測得BAC-103-C3序列通過比對將ABP9基因定位于已測序的玉米自交系Mo17基因組的3號染色體上。進一步應(yīng)用熒光原位雜交(FISH)的方法對ABP9基因進行染色體定位也證實該基因定位于Mo17系及齊319系玉米基因組的3號染色體上。目前，已有相當(dāng)多玉米數(shù)量性狀位點(QTLs)和抗逆相關(guān)的基因定位于玉米基因組的各條染色體上，而且這些基因大都成簇聚集在某條染色體的某一特定區(qū)域內(nèi)。如有研究報道在玉米染色體上定位了一系列抗病相關(guān)的基因：抗棉鈴蟲基因[23]、抗黑斑病基因[24]、抗條斑病基因[25]等。通過對本文結(jié)果進行分析，在BAC-103-C3上預(yù)測到多個與B73系基因組中同源的基因，且呈現(xiàn)出多個基因群聚效應(yīng)，這不僅可用于構(gòu)建高密度的遺傳連鎖圖譜，還大大提高了其他目的基因的克隆效率。另外，明確ABP9基因的定位，可利用該基因所在的染色體或其中一部分片段作為分子標(biāo)記并通過分子標(biāo)記輔助選擇與其連鎖的其他基因，將多個有利的基因聚合起來使該性狀更加突出，進而培育出更優(yōu)異的玉米新品種。有研究報道，通過分子標(biāo)記輔助選擇的方法能夠?qū)⑺究拱兹~枯病、稻瘟病等基因聚合選育出抗病、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的新雜交水稻品種[26]。

在用Southern Blotting驗證4個陽性單克隆中ABP9基因拷貝數(shù)的結(jié)果中顯示， BAC-103-L5和BAC-103-D1除了有一條雜交信號較強的條帶外還有一條信號較弱的帶(圖3)。在染色體定位實驗中以自交系Mo17為材料的熒光原位雜交結(jié)果中顯示ABP9探針雖然在兩條3號染色體上得到了較亮信號，但在這對染色體的其他位置也有較弱的信號。這預(yù)示在玉米基因組中可能存在一個或數(shù)個與ABP9基因的同源序列，這些同源基因的結(jié)構(gòu)和功能有待進一步研究。

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BAC Clone Identification and Chromosomal Localization of Maize Transcription FactorABP9

PU Yan-jun1, YUAN Jing2, PANG Jun-ling1, HAN Fang-pu2, ZHAO Jun1*

1.BiotechnologyResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081,China;2.InstituteofGeneticsandDevelopmentalBiology,ChineseAcademyofSciences,Beijing100101,China

In order to obtain the accurate genomic sequence and its flanking genomic sequences of maize transcription factor ABP9, PCR method was used to screen the BAC library of maize inbred line Qi319 for identification of single BACs which containABP9. As a result, four positive single BACs were obtained from two randomly selected among 19 positive primary pools, namely BAC-103, BAC-159. By sequencing and sequence alignment of single clone BAC-103-C3 with Mo17 genome,ABP9 was mapped on chromosome 3 of Mo17. This result was confirmed by fluorescence in situ hybridization using green fluorescent-labeledABP9 ORF as the probe with root tip chromosomes drops of germinating seeds of maize inbred lines Qi319 and Mo17. The knowledge of accurate genomic sequence and chromosomal localization ofABP9 will facilitate the development of molecular markers of this gene for use in molecular breeding.

ABP9 gene; BAC library; chromosome localization; fluorescence in situ hybridization; molecular breeding

2016-05-27; 接受日期：2016-07-18

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所與隆平高科技股份有限公司科技合作項目資助。

蒲妍君，碩士研究生，研究方向為植物抗逆分子生物學(xué)。E-mail：yan1987610@126.com。*通信作者：趙軍，研究員，博士，研究方向為植物抗逆分子生物學(xué)。E-mail：zhaojun01@caas.cn

10.3969/j.issn.2095-2341.2016.06.08