張 謙，張 微，呂曉麗，曹曉東，常福厚,△

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué):1.新藥安全評(píng)價(jià)研究中心；2.藥學(xué)院,呼和浩特 010110)

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·論 著·

GLP體系下全自動(dòng)血凝分析儀的3Q驗(yàn)證*

張 謙1，張 微1，呂曉麗2，曹曉東1，常福厚1,2△

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué):1.新藥安全評(píng)價(jià)研究中心；2.藥學(xué)院,呼和浩特 010110)

目的 以Sysmex CA7000全自動(dòng)血凝分析儀為例，探究良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP)體系下全自動(dòng)血凝分析儀3Q驗(yàn)證過(guò)程。方法 選擇凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)、纖維蛋白原(FIB)4項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)，對(duì)儀器的批內(nèi)精密度、日間精密度、準(zhǔn)確性、線(xiàn)性、攜帶污染率進(jìn)行性能驗(yàn)證。結(jié)果 PT、APTT、TT、FIB的批內(nèi)精密度CV值分別為1.33%、1.57%、1.47%、1.90%；日間精密度CV值分別為1.73%、1.52%、1.55%、2.14%；在準(zhǔn)確度方面，PT、APTT、TT、FIB的正常質(zhì)控CV值分別為7.45%、3.88%、-4.98%、4.36%，PT、APTT的異常質(zhì)控CV值分別為8.11%、8.77%；FIB的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)(r)值為0.999 3，a值為1.02；標(biāo)本攜帶污染率最高CV值為2.15%；所測(cè)結(jié)果均符合行業(yè)通用標(biāo)準(zhǔn)和儀器廠(chǎng)家要求。結(jié)論 通過(guò)GLP體系下的3Q驗(yàn)證，Sysmex CA7000血凝分析儀各方面性能優(yōu)良，可以用于臨床檢驗(yàn)部的檢驗(yàn)工作。

良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范； 全自動(dòng)血凝分析儀； 3Q驗(yàn)證

良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP)主要是針對(duì)食品化妝品、新藥等進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)而制訂的規(guī)范[1-3]。GLP實(shí)驗(yàn)室目的是嚴(yán)格控制食品化妝品、新藥等安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，在最大限度上消除可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主觀(guān)和客觀(guān)因素，降低誤差，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)、可靠[4-5]。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)、美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)均有相應(yīng)文件明確規(guī)范GLP實(shí)驗(yàn)室中備案儀器設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行3Q驗(yàn)證[6]。以確保儀器產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠、準(zhǔn)確。所謂3Q驗(yàn)證，即指儀器的安裝驗(yàn)證(IQ)、操作驗(yàn)證(OQ)和性能驗(yàn)證(PQ)[7]。CA7000全自動(dòng)血凝分析儀購(gòu)置后，查看儀器預(yù)安裝的地點(diǎn)及周邊環(huán)境、配套設(shè)施是否符合要求，安裝儀器運(yùn)行所需的硬件及軟件，即進(jìn)行安裝驗(yàn)證。安裝驗(yàn)證完成后，調(diào)試儀器、設(shè)置儀器參數(shù)、校準(zhǔn)儀器項(xiàng)目、開(kāi)機(jī)運(yùn)行儀器、查看各項(xiàng)功能是否正常、對(duì)操作人員進(jìn)行操作培訓(xùn)，即完成儀器的操作驗(yàn)證。臨床檢驗(yàn)部全自動(dòng)血凝分析儀在新藥非臨床安全性評(píng)價(jià)中承擔(dān)血液學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)，其檢測(cè)數(shù)據(jù)是否準(zhǔn)確在一定程度上影響著藥物毒理學(xué)結(jié)果[8]。而其中涉及的性能驗(yàn)證是整個(gè)3Q驗(yàn)證中的關(guān)鍵步驟，需要在實(shí)驗(yàn)前精心設(shè)計(jì)驗(yàn)證指標(biāo)和驗(yàn)證方案[9]。以Sysmex CA7000全自動(dòng)血凝分析儀為例，探究在GLP體系下CA7000全自動(dòng)血凝分析儀的性能驗(yàn)證過(guò)程。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 儀器為Sysmex CA7000全自動(dòng)血凝分析儀；試劑為凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定試劑盒(批號(hào)105273)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)測(cè)定試劑盒(批號(hào)112183)、凝血酶時(shí)間(TT)測(cè)定試劑盒(批號(hào)121150)、纖維蛋白原(FIB)測(cè)定試劑盒(批號(hào)1320791)；質(zhì)控品為正常凝血質(zhì)控品(批號(hào)182018)、異常凝血質(zhì)控品(批號(hào)183015)。試劑、質(zhì)控品生產(chǎn)廠(chǎng)家為上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 批內(nèi)精密度 根據(jù)NCCLS EP5-A文件取當(dāng)日門(mén)診患者新鮮血漿制成混合血漿[10]，取混合血漿快速、連續(xù)、重復(fù)檢測(cè)20次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差(s)和變異系數(shù)CV值，CV值必須小于或等于廠(chǎng)家的要求。

1.2.2 日間精密度 根據(jù)NCCLS EP5-A文件將正常凝血質(zhì)控品用1.0 mL蒸餾水復(fù)溶[10]，取正常凝血質(zhì)控連續(xù)測(cè)定20 d，每日檢測(cè)1次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差(s)和變異系數(shù)CV值，CV值必須小于或等于廠(chǎng)家的要求。

1.2.3 準(zhǔn)確性 根據(jù)NCCLS EP15-A文件分別取兩個(gè)水平的定值質(zhì)控品(正常、異常)驗(yàn)證凝血4項(xiàng)的準(zhǔn)確度[11]，每個(gè)項(xiàng)目重復(fù)測(cè)定3次，CV值應(yīng)小于或等于廠(chǎng)家規(guī)定的10%。

1.2.4 線(xiàn)性范圍 根據(jù)CLSI EP6-A文件從當(dāng)日門(mén)診患者標(biāo)本中篩選高值和低值標(biāo)本[12]，高值標(biāo)本為1號(hào)，低值標(biāo)本為5號(hào)，二者3∶1混合為2號(hào)，1∶1混合為3號(hào)，1∶3混合為4號(hào)，配制成具有5個(gè)濃度梯度的標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本檢測(cè)1次，將實(shí)測(cè)值與理論值作比較(偏離應(yīng)小于10%)，將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行線(xiàn)性回歸擬合，應(yīng)用Excel2010軟件中函數(shù)CORREL和函數(shù)SLOPE求得相關(guān)系數(shù)(r)和斜率(a)，a值在1±0.03范圍內(nèi)，r>0.98。

1.2.5 攜帶污染率 根據(jù)CLSI EP10-A文件[13]，高值標(biāo)本對(duì)低值標(biāo)本的污染：低值標(biāo)本(L)為1、3號(hào)，高值標(biāo)本(H)為2號(hào)，每個(gè)標(biāo)本順序測(cè)定3次，記錄結(jié)果L1、L2、L3、H1、H2、H3、L4、L5、L6利用公式K1=[L4-mean(L1,L2,L3)]/mean(L1,L2,L3)，結(jié)果應(yīng)小于或等于廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的10%；低值對(duì)高值標(biāo)本的污染率：高值標(biāo)本(H)為1、3號(hào)，低值標(biāo)本(L)為2號(hào)，每個(gè)標(biāo)本順序測(cè)定3次，記錄結(jié)果H1、H2、H3、L1、L2、L3、H4、H5、H6利用公式K2=[H4-mean(H1,H2,H3)]/mean(H1,H2,H3)，結(jié)果應(yīng)小于或等于廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的10%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié) 果

2.1 批內(nèi)精密度 批內(nèi)精密度檢測(cè)結(jié)果均小于廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的要求，驗(yàn)證通過(guò)。見(jiàn)表1。

表1 批內(nèi)精密度

2.2 日間精密度 日間精密度檢測(cè)結(jié)果均小于廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的要求，驗(yàn)證通過(guò)。見(jiàn)表2。

表2 日間精密度

2.3 準(zhǔn)確性 準(zhǔn)確性檢測(cè)結(jié)果均小于廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的要求，驗(yàn)證通過(guò)。見(jiàn)表3。

表3 準(zhǔn)確性

注：TT、FIB無(wú)異常質(zhì)控，僅驗(yàn)證正常水平。

2.4 線(xiàn)性范圍 只驗(yàn)證以濃度為結(jié)果的項(xiàng)目，依次測(cè)定FIB 5個(gè)濃度梯度的標(biāo)本，實(shí)測(cè)值分別為8.13、6.22、4.57、2.73、0.79 mg/dL，與理論值相比相對(duì)偏差均小于10%，F(xiàn)IB的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r值為0.999 3，a值為1.02，符合儀器廠(chǎng)家要求，表明該全自動(dòng)血凝儀在稀釋范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性相關(guān)性。

2.5 攜帶污染率 各項(xiàng)目攜帶污染率均小于判定標(biāo)準(zhǔn)10%，符合行業(yè)通用標(biāo)準(zhǔn)要求。見(jiàn)表4。

表4 攜帶污染率(%)

3 討 論

對(duì)CA7000的性能驗(yàn)證表明，批內(nèi)精密度CV值為1.33%～1.90%，日間精密度CV值為1.52%～2.14%，均在儀器廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)范圍內(nèi)；準(zhǔn)確性方面，正常質(zhì)控CV最大值7.45%，異常質(zhì)控CV最大值8.77%，均小于儀器廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的10%；FIB的線(xiàn)性相關(guān)r值為0.999 3，a值為1.02，a值在1±0.03范圍內(nèi)，r>0.98。攜帶污染率的CV值為-0.35%～2.15%，均小于廠(chǎng)家標(biāo)識(shí)的10%。說(shuō)明CA7000血凝分析儀具有良好的精密度和準(zhǔn)確性，良好的線(xiàn)性范圍和低攜帶污染率從另一角度也保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)、可靠性。

3Q驗(yàn)證中的PQ驗(yàn)證頻率為每年1次[14]。儀器有下列情況之一則需要重新驗(yàn)證：儀器的放置地點(diǎn)改變、儀器的檢測(cè)方法改變、儀器進(jìn)行重大維修[15]。GLP體系下儀器的性能驗(yàn)證需在部門(mén)負(fù)責(zé)人的監(jiān)督下由有經(jīng)驗(yàn)的工作人員完成[16]。性能驗(yàn)證報(bào)告由檢測(cè)人員和部門(mén)負(fù)責(zé)人簽名確認(rèn)后連同原始數(shù)據(jù)和之前完成的安裝驗(yàn)證和操作驗(yàn)證報(bào)告共同以書(shū)面形式歸檔，即一個(gè)完整的3Q驗(yàn)證過(guò)程，3Q驗(yàn)證過(guò)程需要質(zhì)量保障部門(mén)人員的監(jiān)督[17]。

經(jīng)過(guò)GLP體系下的3Q驗(yàn)證，此臺(tái)Sysmex CA7000全自動(dòng)血凝分析儀各項(xiàng)性能指標(biāo)良好，所測(cè)定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)、準(zhǔn)確，可用于藥物非臨床研究安全性評(píng)價(jià)的臨床檢驗(yàn)中血液學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。

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3Q verification of automatic blood coagulation analyzer under good laboratory practice system*

ZHANGQian1，ZhangWei1，LVXiaoli2，CAOXiaodong1,CHANGFuhou1,2△

(1.CenterforNewDrugSafetyEvaluationandResearch,InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot,InnerMongolia010110,China;2.CollegeofPharmacy,InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot,InnerMongolia010110,China)

Objective To explore the procedures of 3Q validation for blood coagulation analyzer under the good laboratory practice(GLP) system based on the Sysmex CA7000 automatic blood coagulation analyzer.Methods Four test indicators of PT,APTT,TT and FIB were chosen to conduct the performance verification in the within-run precision,between-day precision,accuracy,linearity,carry-over contamination rate of the automatic blood coagulation analyzer．They were prothrombin time(PT),activated partial thromboplastin time(APTT),thrombin time(TT),and fibrinogen(FIB).Results The within-run precisionCVvalues of PT,APTT,TT and FIB were 1.33%,1.57%,1.47% and 1.90%,respectively; the inter-day precisionCVvalues of PT,APTT,TT and FIB were 1.73%,1.52%,1.55% and 2.14% respectively; in terms of accuracy,the normal quality controlCVvalues were 7.45%,3.88%,-4.98% and 4.36% respectively; the abnormal quality controlCVvalues of PT and APTT were 8.11% and 8.77% respectively; the r value of FIB linear correlation coefficient was 0.999 3,the a value was 1.02; the highestCVvalue of carry-over contamination rate was 2.15%; the detected results all conformed to the general industry standards and requirements of instrument manufacturer.Conclusion The 3Q validation under the GLP system proves that the Sysmex CA7000 automatic blood coagulation analyzer is good in performance and is appropriate for the laboratory work of clinical laboratory department．

good laboratory practice; automatic blood blood coagulation analyzer; 3Q verification

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260499)。

張謙，男，自然科學(xué)研究實(shí)習(xí)員，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究?！?/p>

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.001

A

1673-4130(2016)23-3241-03

2016-04-11

2016-07-13)